HE4 崔恒 北京大学人民医院

新型卵巢癌标记物HE4的研究进展,崔恒北京大学人民医院妇科肿瘤中心,世界范围统计资料,癌新发死亡宫颈470,000230,000卵巢190,000114,000内膜188,00045,000,美国2008,卵巢癌的现状,一个难题：无成熟的早期诊断方法；二个70%：确诊时约70%已属晚期；治疗后即使是已达到临床完全缓解的病人仍有70%最终将复发；三个进展：手术病理分期、肿瘤细胞减灭术、紫杉醇+卡铂化疗方案四个焦点：保留生育/生理功能、早期的辅助治疗、晚期的治疗、复发的诊断和治疗,卵巢癌的诊断策略-早期诊断,卵巢癌的早期诊断一直是卵巢癌研究中最具挑战性的课题肿瘤诊断的三大支柱图像诊断：B超CT、MRIPET/CT血液与体液检测：肿瘤标记物细胞学与组织学诊断,现阶段卵巢癌的诊断,目前常用的诊断方法包括：1）妇科三合诊；2）阴式彩色B超；3）血清CA125的检测；4）计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET或PET/CT）等,关于诊断正在研究中的有：放射免疫显像（RII）新的或多种血清标记物的检测血清中卵巢癌特异抗体的检测恶性肿瘤危险指数评分（RMI)癌基因和抗癌基因突变的检测，特别是与遗传相关基因的检测（芯片）发现和寻找新的特异抗原和基因,肿瘤标记物的定义,与肿瘤相关的抗原或某种生物活性物质肿瘤细胞异常表达反映癌变发生、发展过程可被检出,有效的肿瘤标记物,特异性强敏感性高交叉反应小早期诊断率高随病情变化监测值变化明显,临床应用,肿瘤诊断及鉴别诊断肿瘤残存复发的预测及复发部位监测疗效观察及预后评估对无症状早期癌及高危人群的筛查,血清肿瘤标志物的检测,CA125是应用最多的卵巢癌血清肿瘤标志物，特别是最常用的监测卵巢癌复发的指标。期卵巢癌患者仅有约30-50%35u/ml，监测复发的敏感性、特异性、阳性预测值分别为79、95、100。1健康妇女、3良性卵巢肿瘤、6非卵巢相关的良性疾病可有血清CA125水平升高。在子宫内膜异位症、盆腔结核、炎症等甚至高达50-70%,卵巢癌相关的其它标志物,基因分析和组织化学分析已发现许多新的可能与卵巢癌相关的标志物MUC1Kallikreins：hK4,hK6,hK8,hK10MesothelinAntileukoproteinase1(ALP1)OsteopontinVEGFS100A1InhibinLPAB7-H4HE4，表达上调在卵巢癌中最常见，且在早、晚期患者中mRNA和蛋白的表达均上调。,HE4,HE4（HumanEpididymisSecretoryProtein4,人附睾分泌蛋白4）1991年由Kirchhoff等从人的附睾中克隆出cDNA，基因定位在染色体20q12-q13.1，全长为12kb左右，由5个外显子和4个内含子组成，编码的蛋白质与细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同源性，是一种酸性蛋白质。1999年Schummer等发现HE4mRNA在卵巢癌组织中高表达，而在癌旁组织中不表达。HE4在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，少见于肺腺癌及间皮瘤。,HE4在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的敏感性均高于CA125，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治疗情况。英国的一项研究对200，000妇女用30多种肿瘤标记物分别单独或与CA125联合进行卵巢癌筛查，HE4可以使诊断卵巢癌的敏感度和特异度提高,BiochemistryofHE4,HE4-HumanEpidiymissecretoryprotein4MemberoftheWAP-genefamilyofproteaseinhibitors(newnameWFDC-genefamily)Characterizedbyanapprox50aasequencewith8highlyconservedcysteineresiduesthatform4disulphidebridges.WFDC(WheyAcidicProteinFourDisulphideCore)TumourassociatedWFDC-proteinsALP1,Elafin,HE4(WFDC2),PS20(WFDC1),HE4mRNAexpressionprofile,RestrictedexpressionprofileinnormaltissueExpressedinnormalepididymis,andepitheliaoftherespiratoryandreproductivetractTumor-restrictedexpressioninovariancancer90%ofserousovariancancerHE4mRNAhighlyexpressedinlungadenocarcinomas60%highexpressioninAdC10%highexpressioninSqC,FromGalganoetalModernPathol(2006)19;847-853,ExpressionofHE4mRNAincancer,HE4antigenexpressioninOvariancancer,GalganoetalModernPathol(2006)19;847-853,HE4antigenishighlyexpressedinserous,endometroidandclearcellovariancancerMucinous,germcellorsexcordovariancancerbarelyexpressHE4,DrapkinetalCancerRes(2005)65;2162-2169,HE4是一种适宜的卵巢癌血清标志物,HE4可分泌入体液正常卵巢不表达，而在卵巢癌高表达-特异性好在早期和晚期HE4表达均呈高度上调早期病例具有高度敏感性HE4的表达独立于CA125的表达联合检测将较各自单独检测获得更多的信息,HE4诊断试剂盒,HE4EIA试剂盒由瑞典FujirebioDiagnosticsAB公司生产，已经获得了FDA认证和CE认证，在美国、欧洲等多个国家上市销售，现正在申请在中国上市注册。FujirebioDiagnosticsAB公司研制的HE4EIA试剂是国外唯一用于定量检测人血清中HE4的试剂，国内尚无任何检测HE4的试剂上市销售。,HE4EIA方法的建立,主要试剂：2H5and3D8MAbestablishedusingHE4-MouseIgfusionproteinasimmunogenHellstrometal,CancerResearch63,36953700,2003检测原理：Two-stepforwardsandwichimmunoassaybasedonBio2H5MAbforcatchingofHE4andHRP3D8MAbfordetection,HE4用于监测卵巢癌,约80%患者HE4与CA125相符，与病情一致,Studyon80patients,4,4observations/patientMeasuredconcordancebetweenbiomarkerchange11-17,C-45,C-45,TH:TeachinghospitalNTH:Nonteachinghospital,TypeofSurgeonImpactsSurvivalrates,TypeofHospitalImpactsSurvivalrates,ROMA,ROMAvalue=expPI/1+expPIx100,RiskofOvarianMalignancyAlgorithm(ROMA)valueEstimateoftheriskofovariancancergiventhatthepatienthadapelvicmass;theirHE4andCA125values;andtheirmenopausalstatus,BiomarkerandROMAScatterplot,ROMAValidationtrial-Conclusions,Ataspecificityof75%,theoverallsensitivityforEOC+LMPwas89%OverallsensitivityforEOCwas94%Pre-menopausalwomen89%Post-menopausalwomen95%NPV94%forEOC+LMPinPre-andpostmenopausalwomencombinedNPV97%forEOC17/279(6%)patientsclassifiedaslowriskhadEOCorLMP9/17hadLMPtumor1(0.4%)hadlatestage(III/IV)cancerROMAeffectivelystratifiespatientswithpelvicmassintogroupswithlowandhighriskofhavingepithelialovariancancer,C-50,ROMAvsRMI,RiskofMalignancyIndex(RMI)RMI=UxMxserumCA125levelU=0forimagingscoreof0=1forimagingscoreof1=3forimagingscoreof2-5M=1ifpremenopausal=3ifpostmenopausal,JacobsIetal.BrJObstetGynecol.1990;97:992-929.,ROMAhasincreasedsensitivitycomparedwithRMI,BenignandEOC:AllStages,*TwoSampleTestofEqualityofProportionsp=0.0129CI:ConfidenceInterval,ROMAHasIncreasedSensitivityvsRMIForEarlyStageCancer,BenignandEOC:StageI&II,*TwoSampleTestofEqualityofProportionsp=0.0510CI:ConfidenceInterval,表患者被ROMA划分为高危组和低危组的分布,月经状态疾病高危(例)低危(例)合计(例)敏感性(%)特异性(%)PPV(%)NPV(%)绝经后恶性35237EOC28028良性4812合计a32840100.066.787.5100.0合计b39104994.666.789.780.0绝经前恶性12416EOC808良性23103126合计a31103134100.081.725.8100.0合计b3510714275.081.722.996.3全部恶性47653EOC36036良性27111138合计a63111174100.080.457.1100.0合计b7411719188.780.463.594.9a：指EOC与良性肿瘤的合计，b：指恶性肿瘤与良性肿瘤的合计,HE4ClinicalInvestigations,ItalyMestre-VenicePelvicmassMilanoPelvicmassBresciaEndometrialcancerRomaOngoingreallifestudyNorwayOsloManybiobankstudiesSwedenStockholmBiobankpelvicmassBrasilSaoPaoloOvariancancerBelgiumLeuvenPelvicmass,HE4ClinicalInvestigations,HE4用于卵巢癌的动态监测和对复发的诊断血清HE4与CA125联合检测用于鉴别卵巢癌和卵巢子宫内膜异位症血清HE4检测用于子宫内膜癌的诊断和随访血清HE4用于肺癌的诊断,HE4联合CA125鉴别诊断子宫内膜异位症和卵巢癌,HE4的编码基因WFDC2主要在卵巢子宫内膜样癌、子宫内膜癌中有表达,并且在正常的子宫内膜腺体中也有表达，但是在子宫内膜异位病灶中是否有表达尚不明确，,我们实验室最检测了57例卵巢子宫内膜异位症患者血浆中HE4和CA125的浓度。数据结果与49例卵巢癌，60例卵巢良性肿物，50例健康对照作对比，初步探讨血清人附睾分泌蛋白4(HE4)和CA125水平检测在鉴别诊断子宫内膜异位症和卵巢癌的价值。,（1）CA125在各组中的中位数（2）HE4在各组中的中位数,在子宫内膜异位症中在卵巢癌中HE4和CA125无相关性HE4和CA125有相关性,r=0.14P=0.125,r=0.475P0.05,卵巢子宫内膜异位囊肿以正常为参照卵巢子宫内膜异位囊肿以良性肿物为参照HE4:ROC-AUC0.5无诊断意义HE4:ROC-AUC0.5无诊断意义,HE4:ROC-AUC=0.453,HE4:ROC-AUC=0.453,卵巢癌以卵巢子宫内膜异位囊肿为参照HE4:ROC-AUC=0.933,HE4:ROC-AUC=0.933CA125:ROC-AUC=0.821HE4+CA125:ROC-AUC=0.936,HE4和