基因工程框架复习PPT课件

.,基因工程核心内容复习,.,考情分析,命题重点：基因工程的工具与操作程序基因工程的原理和应用考查频度：高考高频考点,5年19考如2016年全国1卷和3卷考查方向：多以最新基因工程成果为载体，结合其他工程技术进行综合考查,.,基因工程复习目标,一、基因工程的操作工具和具体步骤（熟悉掌握）二、明确解题思路,.,基因工程的操作工具,.,下列关于限制性核酸内切酶的叙述，错误的是()A限制性核酸内切酶可从原核生物中提取B同一种限制酶切割不同的DNA分子产生的末端能够进行碱基互补配对C限制酶能任意切割DNA分子，从而产生大量的DNA片段D每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列,.,限制性核酸内切酶,1.来源：原核细胞2.简称限制酶（没有其他简称）3.是酶就具有酶的特性（受温度、PH影响）4.能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列（不能识别RNA序列）5.作用部位：磷酸二酯键6.DNA切割的结果：产生黏性末端或平末端7.相同限制酶切出的末端一定相同，不同限制酶切出的末端也可能相同,.,已知限制酶I的识别序列和切点是GGATCC限制酶的识别序列和切点是GATC。请问这两种酶切出的黏性末端能否相连？,.,DNA连接酶,作用部位：磷酸二酯键E.coliDNA连接酶只能连黏性末端T4DNA连接酶既能连黏性末端也能连平末端比较：限制酶ECOR1切出的是黏性末端Sma1切出的是平末端,.,运载体,作为运载体必备的条件1.在受体细胞中能复制并稳定保存（让目的基因能一起复制2.有一个至多个限制酶切割位点(供外源基因插入)3.具有标记基因(鉴别受体细胞中是否含有目的基因)-最常用的载体质粒（大肠杆菌Ti质粒含T-DNA）噬菌体的衍生物动植物病毒,.,基因工程的基本操作程序,1、目的基因的获取,2、基因表达载体的构建,3、将目的基因导入受体细胞,4、目的基因的检测与鉴定,.,步骤一获取目的基因,1、人工合成,2、从基因文库中获取,3、利用PCR技术扩增,(基因比较小，序列已知),原理:双链DNA分子复制条件：模板、引物热稳定DNA聚合酶四种脱氧核苷酸能量,.,组成部分,复制原点（复制起点）启动子（RNA聚合酶识别和结合的部位）目的基因（位于启动子和终止子之间）终止子（终止转录）标记基因（如抗生素的抗性基因或荧光基因。构建时至少有一个）,第二步：基因表达载体的构建(核心),.,第三步：将目的基因导入受体细胞,将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法、基因枪法，花粉管通道法将目的基因导入动物细胞显微注射法将目的基因导入微生物细胞感受态细胞法（Ca2+处理）,-转化的过程,.,步骤四目的基因的检测和鉴定,接种实验,抗原抗体杂交法,分子杂交法,DNA分子杂交法,.,当转基因技术和其他技术综合考查时解题思路：一.明确目的，要获得什么？是基因产品、转基因植物还是转基因动物找到目的基因和受体细胞二.细化过程,.,1.获得基因产品：获得含目的基因微生物细胞(一般)-培养微生物-获得产品2.获得转基因植物：将目的基因导入植物细胞-进行植物组织培养-获得转基因植物3.获得转基因动物：将目的基因导入动物受精卵（或通过核移植获得）-早期胚胎培养-胚胎移植-获取转基因动物,.,重度呼吸综合征是有一种新型冠状病毒（MERS-CoV）引起的病毒性呼吸道疾病，科学家利用大肠杆菌大量生产病毒蛋白，以探究其作为MERS疫苗的可能性，结合所学知识回答下列相关问题：（1）研究初期，科学家首先分离出病毒RNA分子，在_酶的作用下，以_为原料，获得DNA分子。（2）在构建表达载体的过程所使用的限制酶一般来自_生物体内，构建好的表达载体包括_、_、启动子和终止子。其中启动子是_酶的结合位点（