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文档简介
细菌内毒素检查(凝胶法)、细菌内毒素检查法、凝胶法分类浊度法显色基质法重现性好的方法,定量增强/抑制药物干扰操作简便。 节约时间:原理:利用鲎血液中的变性细胞,通过降解液和机械方法促进细胞破裂提取的细胞溶解物,与极微量的细菌内毒素形成特异的凝胶反应,反应速度和凝胶坚牢度与内毒素浓度有关. 细菌内毒素检测的凝胶法实验程序1、试验准备:试剂、仪器及器具2、内毒素临界值的确定3、最大有效稀释倍数的确定4、凝胶临界试验5、结果判定、要求1、检查最终产品所需(浓度超过0.5mg/ml)2、检查样品PH值应在68之间调整试剂细菌内毒素作业标准品,细菌内毒素检查用水,鲎试剂。2、内毒素限制值的确定、L=K/M式中l为供试品的内毒素限制值,一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示的k人,以EU/(kgh )表示每千克体重1小时最大可接受内毒素量的m人一般供试品提供者直接提供内毒素限制值,例如1000EU。3、确定最大有效稀释倍数(MVD):MVD=cL/式中l为试样的内毒素限制值,c为试样溶液的浓度,为凝胶法中鲎试剂的显示灵敏度(EU/ml )。3、鲎试剂灵敏度研究,按下表制备溶液a、b、c,用稀释倍数为MVD的试剂溶液制备溶液a,并在鲎试剂灵敏度研究试验项目中操作。 6、结果,用锡箔包好制备的试剂后,放入电恒温水槽锅中,60min后观察37的恒温水槽(保证玻璃瓶中的溶液在水面以下,防止水进入瓶中)。 阴性对照溶液b为阴性,阳性对照溶液c为阳性,试验有效。 如果溶液a的两个平行管均为阴性,则判定为供试品满足规定的溶液a的两个平行管均为阳性,则判定为供试品不符合规定。 溶液a的两个平行管中,如果一个管为阳性,另一个管为阴性,则需要进行再试验,在再试验时,溶液a需要制作4根平行管,如果所有的平行管为阴性,则判定为供试品不满足规定,判定为供试品不符合规定,操作注意事项,在试验前2、内毒素检测所用稀释试管保证玻璃试管所需塑料器具一次性无内毒素。 实验环境:优选在洁净室或清洁工作台内进行,保证环境温度、湿度、通风稳定。 实验者:戴干净的手套和口罩。实验过程: 1、内毒素工作标准品必须按要求低温保存,工作标准品开封后应尽快使用,一次用完,保存。 2、用于一步一步稀释液的移液管不能反复、交替使用。 3、鲎试剂再溶解时,把检测用水沿着瓶壁放入,以免产生气泡。 4 .操作时间的长度。 环境温度的变化影响实验结果,操作应尽量熟练、快速。5、恒温器的温度变化应为1。 鲎试剂和样品混合后,立即移至水浴槽,严格控制保温时间为602min,保温期间不得移动试管架。 桌子上很平稳
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