中药制剂的含量测定.ppt

第四章中药制剂含量测定，第一节含量测定的目的和意义，在我国药品质量标准中，“鉴别”、“检验”和“含量测定”项目是判定中药制剂质量优劣的标准。 中药制剂的鉴别是通过研究某些原料药物和成分的有无来判断药物的真伪，含量测定项目是通过研究某些成分的含量高低是否符合规定来判断药物的优劣。 中药制剂含量测定是质量控制中的重要指标。 通过测定制剂中有效成分、毒性成分或指标成分的含量，测定制剂技术的稳定性和中药材质量的优劣，保证中药制剂的质量，临床药品的安全性、有效性和中药制剂应进入国际市场。 第二节含量测定样品的处理，由于中药制剂样品的基质和成分组成非常复杂，且样品中被测定成分的含量常常较低，因此对样品进行各种处理，必须满足所选分析方法的要求。 样品处理的主要作用是有效地从样品中释放出被检成分，制作出便于分析测定的稳定样品。 去除杂质，精制样品，提高分析方法的重现性和精度。 浓缩或衍生化，测定低含量被测定成分。 衍生化不仅可以提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。 试样的形式和使用的溶剂满足分析测定的要求。 第二节含量测定样品的处理、第一、样品粉碎样品的粉碎有两个目的：保证用含量测定采集的样品均匀、具有代表性，提高测定结果的精度和精度，使样品中的被测成分更快、更完整地提取出来。 粉碎时的注意事项：请勿细微粉碎。 样品粉碎过细，样品提取时过滤困难，根据实际情况进行粉碎筛选。 不污染样品。 粉碎样品时，不要因设备磨损或污垢等污染样品，防止粉尘飞散或挥发性成分的损失。 通过筛子时，一些不通过筛孔的粒子决不能丢弃。 必须重复粉碎和粉碎，使其通过筛孔。 第二节含量测定样品的处理、第二、样品的提取对中药剂和固体制剂样品进行粉碎后，精密称量粉末适量，首先用溶剂提取，溶解与被测成分共存的成分(前者必须完全溶出)，与过滤渣分离后，进行被测成分的含量测定。 以下介绍一些常见的提取方法：冷浸法回流提取法连续回流提取法超临界流体提取法，第二节含量测定样品的处理，(1)冷浸法以必要的精度将一定量的样品放入带栓容器中，摇晃后放置，浸渍提取，溶剂用量为样品重量的1050倍，测量重量。 浸泡时间为1224小时，注意浸泡期间始终摇晃，浸泡后称重，补充溶剂充分摇晃，浸泡的溶液可以部分测定，也可以全部测定。 部分测定法(即等量法)适当过滤浸渍后的溶液，精密测量一定体积的滤液，相当于一定重量的样品进行测定。 该方法不适合挥发性高的萃取溶剂。 所有的测定法(即总量测定法)都是过滤浸泡过的溶液，将滤液和清洗液加在一起充分清洗滤液直至萃取完毕，将浓缩或蒸干的残留物用其他溶剂溶解，定量地转移到容量瓶中，稀释成刻度摇摆进行测定。 该方法能克服一些测定方法的缺陷，无需精密加入萃取时的溶剂用量。 (1)冷浸法其他所有测定方法中萃取液的浓缩蒸发，具体为常压或减压蒸发，后者具有适合温度低、速度快、热不稳定的样品的优点，可以自然挥发，也可以在氮气流动下进行干燥。 适用于体积小的样品和挥发性溶剂，氮气的流动可以防止氧化的冷冻干燥(常用水溶液)，适用于热不稳定的样品。 冷浸法的优点是操作简单，适用于热不稳定的样品，杂质提取少。 其缺点是花费时间和溶剂。第二节含量测定样品的处理如下： (二)回流提取法将冷浸法中的带栓容器换成回流装置，用单一溶剂或混合溶剂在水浴中加热回流提取，其馀的操作方法与冷浸法相同。 优点： 1、提取效率高于冷浸法2 .还可缩短提取时间，1次提取时间为0.52小时，直至提取完成。 缺点： 1、多提取杂质2、此法不适用于热不稳定或挥发性成分。 第二节含量测定样品的处理、第二节含量测定样品的处理、(三)连续回流萃取法样品设置索氏萃取器，使用热能挥发的溶剂反复萃取(相当于始终使用新鲜溶剂萃取)，一般可在数小时内完全萃取。 优点：1)不过滤，萃取后取下虹吸回流管，回收溶剂，用适当的溶剂溶解，定容，测定。 2 )提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少，操作简便。 缺点：不要使用容易受热分解的成分。 第二节含量测定样品的处理，(四)将超声波提取法样品放入适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声波振荡器中提取。 一般样品可在30分钟内完成，最多可在1小时内完成。 优点：超声波提取可以使样品粉末充分分散在溶剂中，提高提取效率和提取速度。 (超声波溶解辅助作用)缺点：促进化学反应(例如氧化还原反应、高分子化合物的分解和聚合作用等) . 用上述方法提取浸渍剂制成的固体制剂时，通常将适量的药粉量入量瓶，定量加入适当的溶剂提取后，用干燥滤纸过滤，丢弃滤液，继续进行滤液(滤纸不会吸附或污染被测定成分)的部分测定法进行测定。 第二节含量测定样品的处理，(五)超临界流体萃取法(Supercritical-fluidextraction，SFE )是以超临界流体(常用CO2 )为萃取溶剂，高效、快速地萃取固体或半固体中的被测定成分的样品前处理新技术。 超临界流体(SF )是临界压力(Pc )和高于临界温度(Tc )时形成的单相状态，不是液体也不是气体，具有对样品成分的溶解力强的特性。 超临界流体(SF )的密度接近液体(例如，CO2超临界流体的密度为0.30.9g/cm3)，但具有与液体相似的溶剂作用2 )试样中的被检测成分有利于向SF扩散。 SF的粘度接近气体，仅比液体低2位数，但扩散系数比液体高1位数以上，具有良好的遗传性能，3)SF能大幅提高萃取效率和萃取速度。 SF的表面张力几乎为零，容易渗透到样品基质的空隙中，有利于SF和样品的充分接触4 )同一种SF可以提取极性和分子大小随温度和压力而不同的化学成分。 SF的密度、粘度、扩散系数等与温度、压力、流体组成有关。 温度和压力稍超过临界点时，SF的压缩系数达到最大，压力的微小变化会导致较大的密度变化，但是控制密度可以控制SF对溶质的溶解能力，现在仍是用升压力(即升压密度)提取法逐步提取的。 最常用的SF为CO2，其性质稳定、安全、廉价、临界点低(Tc=31和Pc=7.4MPa )。 第二节含量测定样品处理，第二节含量测定样品处理，SFE具有快速提取效率高、方法精度高、选择性高、节约溶剂、自动化容易、易燃、避免使用有毒有机溶剂、可直接与色谱和光谱等分析仪器配套使用的特点。 SFE不仅用于热不稳定成分和挥发性成分的提取，也多用于热稳定性成分的提取。 缺点：对设备有很高的要求。 第二节含量测定样品的处理，三、样品的分离净化(一)沉淀法的原理：从某些试剂和被测成分或杂质中生成沉淀物，分离沉淀物或留下溶液进行精制的方法。该方法必须注意：1)过量试剂妨碍被检组分的测定，无论如何必须除去；2 )大量杂质以沉淀的形式被除去时，被测定成分发生共沉淀而不会损失；3 )被检成分生成沉淀物时，该沉淀物分离后再溶解，或者直接用重量法测定第二节含量测定样品的处理为： (二)蒸馏法的原理：利用某些被测定成分具有挥发性，采用蒸馏法收集馏出液进行含量测定，或者某些成分蒸馏分解生成挥发性成分，利用分解产物(要求结构明确)进行测定。 目前，水蒸气蒸馏法应用较多。 1 )共水蒸馏法(即直接加热法)、水蒸气蒸馏法和水上蒸馏法。 例如中药制剂中的挥发油、某些小分子生物碱(麻黄碱、碱、槟榔碱)以及丹皮酚等可以通过蒸馏法提取、分离净化。 2 )为了更完全地蒸馏挥发性成分，盐析作用，即使在蒸馏液中加入一定量的无机盐，也常用NaCl、NaSO4、MgSO4等。 第二节含量测定样品的处理是： (三)液一液萃取法(LLE )中常用的两种LLE方法是有机溶剂直接萃取法和离子对萃取法。 直接萃取法的原理：利用样品中受试成分与干扰成分在有机溶剂(萃取剂)中的溶解度不同，多次萃取，达到分离净化的目的。 多次提取有助于提高提取回收率和结果的精度，但多次溶液转移等操作会造成误差。 在某些情况下，对于组成复杂、含量低的样品，由于样品数多、提取花费时间等原因，只要每次测定的回收率再现性良好，就可以在经常接受的回收率的前提下一次提取。 直接萃取法中常用的溶剂有氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、醚等。 根据被测成分疏水性的相对强弱，可以选择极性合适的溶剂，保证被测组成的充分提取，具有良好的选择性。 对于弱酸性成分，调整水相的pHKa-2。 弱碱性成分调节水相的pHPKa 2(这里是共轭酸的pKa )，使弱酸、弱碱性成分主要以非离子化的游离酸或碱的形式存在，提高萃取率。 萃取过程中也充分利用中性盐的盐析作用，像水相一样用NaCl饱和，将受试成分加入有机相中提高萃取率。 第二节含量测定样品的处理、离子对萃取法：其原理是，在适当的pH介质中，某种有机酸(碱)性物质形成的带有与离子相反电荷的离子(也称离子对试剂)定量结合成弱极性的离子对，易溶于有机溶剂中，进行萃取分离。 它最适合于高度电离的有机酸、碱性化合物的提取(无法直接法提取)，中药制剂的分析主要用于生物碱(b )的分析，其离子对试剂始终为酸性染料(In-)，例如溴氰菊酯蓝(BTB )、溴磺酰绿(BCG )等，在水相中的定量反应由In_ (水相) BH In-(水相) BH In-(有机相) BH In-(有机相)形成的离子对氢键能力强的氯仿和二氯甲烷萃取。 由以上反应可知，水相中的生物碱和酸性染料要求较高的离子化度，因此必须注意水相的pH和离子对试剂的选择。 通常，生物碱和BTB形成1:1的离子对，优选以pH5.26.4萃取，但二碱形成1:2的离子对，优选以pH3.05.8萃取(二碱的碱性弱，需要在低pH下离子化后形成离子对)。 氯仿层中微量水分浑浊时，应加入少量乙醇或放置较长时间使层清晰，分离有机相后加入脱水剂(常用无水Na2SO4)，或用滤纸过滤除去微量水分，避免液体一液萃取时发生乳化现象。 第二节含量测定样品的处理包括： (四)色谱吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱作为中药制剂分析中的净化分离方法，其操作方式为柱色谱、薄层色谱和纸色谱其中经典的微柱色谱又称固相萃取或液固萃取(LSE )，因设备简单、易于使用、快速、净化效率高、最常用于此。 所谓LSE，通常是将样品溶液加入加入了适当的固定相(净化剂)的长度515cm、内径0.51cm的柱中，将被检测成分留在柱中，溶出杂质后，溶出被检测成分进行测定，或者将杂质强力留在柱中，直接溶出被检测成分进行测定。 这样的选择性好，柱效应低的方法进行样品的净化分离，特别适用于一种全部成分的含量测定，从柱中流出的样品也可以用GC、HPLC、TCL进行分离测定。 LSE的常用净化剂(填料)有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅胶、活性炭、多孔树脂离子交换树脂、结合相硅胶C8、C18、聚酰胺等。 根据其性质，可分为亲脂型、亲水型、离子交换型填料。 第二节含量测定样品的处理，h44444444444444444444444气体6通常在柱中加入溶解于有机溶剂的样品，非极性或低极性的杂质首先从柱中溶出，用适当极性的溶剂溶出被测定成分，强极性的杂质残留在柱中氧化铝可以将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、糖苷等的测定。 例如，使用UV法(吸收系数法)的硅胶适合分离中性或酸性化合物，强烈保持碱性化合物。 样品萃取液加入色谱柱中，从极性小的溶剂中依次溶出，就可以分离出杂质和被检测成分。 另外，硅胶也和后述的硅藻土等一样，可以作为亲水性填充剂使用，常见商品的硅胶柱为Sep-pakSilica，通常是用甲醇、水处理后的状态。 结合相硅胶：十八烷基结合相硅胶(简称C18或ODS )是常用的固体萃取剂，其次为烷基、苯基、氰基结合相硅胶，可用于分离脂溶性和水溶性杂质或成分。 也常用于提取，纯化水基质体液中的疏水性药物。 该LSE的一般操作程序是1 )列的激活。 用2ml甲醇洗涤，润湿结合相，除去杂质，再用0.5ml水洗柱中的甲醇。 2 )同上。 3 )清洗。 用25ml的水洗涤，去除无机盐、氨基酸、亲水蛋白、糖、中保留成分的极性化合物、低肽等弱保留的亲水成分。 4 )溶出。 用25ml的甲醇和甲醇-水洗脱高分子的肽、类固醇、亲脂药物等较强的保留成分。 第二节含量测定样品的处理可以分为极性和非极性型的极性丙烯酰胺聚合物的非极性苯乙烯和二乙烯基苯的共聚物。 其吸附性类似于烷基结合硅胶，通过疏水作用对非极性水溶性成分具有吸附力。 例如，测定复方芪剂中的黄芪甲苷时，用多孔树脂去除水溶性多糖类杂质，用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。 多孔树脂的主要特点是表面积极大，传递速度高，具有不同的极性，适合吸附大分子。 树脂使用前需要预处理：有时用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂去除杂质，用酸、碱洗涤。 该填料用量通常为12g，有时为100150mg提取血、尿中的药物，操作步骤与ODS填料相似。第二节含量测定样品处理、第二节含量测定样品处理、聚酰胺：常用有机吸附剂，主要通过与溶质氢键发挥吸附作用。 常用于含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离，测定黄酮时，用样品的乙醇提取液提升色谱柱，水洗一部分杂质，用95%乙醇洗脱黄酮进行测定。 第二节含量测定样品的处理方法为：卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡6填料多以水基质液作为支持剂，以不与水混合的有机溶剂作为流动相，比较亲脂的成分从固定相转移到流动相中溶出，达到提取的目的。 其提取率高(一般为80%以上)，无浓缩作用，提取液纯净，但洗脱剂用量大(一般为5ml以上)，硅藻土柱可直接在干燥柱中取样，柱可再生。 常见的品牌是Extretut。 纤维素柱的使用与硅藻土柱类似。 m离子交换树脂：疏水基质的离子交换树脂兼有离子交换剂和多孔质树脂的性质，因此在水中溶解度低的药物和洗脱