3-自身抗体荧光片判读与讲解

抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）荧光模型解析及判读）荧光模型解析及判读 储韬储韬 FAE for AnHui ANAANA筛查（间接免疫荧光法）筛查（间接免疫荧光法） 检测检测ANA的“的“金标准金标准” 基质组合：基质组合：Hep-2+灵长类肝灵长类肝 抗原谱完整抗原谱完整 (细胞核、细胞浆细胞核、细胞浆) ANAANA筛查（基质组合）筛查（基质组合） Hep-2细胞细胞 灵长类肝灵长类肝 ANAANA筛查（基质组合）筛查（基质组合） 根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下： ANA 细胞核细胞核 细胞浆细胞浆 抗核抗体荧光模型分类抗核抗体荧光模型分类 核均质型：核均质型： dsDNA、组蛋白和核小体等、组蛋白和核小体等 核膜型：核膜型： 板层素、板层素、gp210等等 核糖核蛋白：核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B 核颗粒型核颗粒型 细胞周期蛋白：细胞周期蛋白：I型（型（PCNA）和）和II型型 Ku 核仁型：核仁型： Scl-70、RNA多聚酶、多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等和原纤维蛋白等 核浆点型：核浆点型： 着丝点、核点等着丝点、核点等 胞浆颗粒型：线粒体、胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等、核糖体等 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 分裂期细胞：纺垂体、中间体、中心粒等分裂期细胞：纺垂体、中间体、中心粒等 读片要点读片要点 HEp-2细胞细胞:选取多个视野判断选取多个视野判断 HEp-2细胞细胞:分裂间期与分裂期细胞综合看分裂间期与分裂期细胞综合看 HEp-2与肝片综合看与肝片综合看 核均质型核均质型 HEp-2：间期细胞核：间期细胞核 呈呈均匀荧光均匀荧光，分裂期，分裂期 细胞细胞浓缩染色体浓缩染色体荧光荧光 增强增强 肝片肝片：肝细胞核阳性，：肝细胞核阳性， 呈均匀荧光。呈均匀荧光。荧光强荧光强 度度与与HEp-2基本基本一致一致 靶抗原：靶抗原：dsDNA、 核小体、组蛋白核小体、组蛋白 核粗颗粒型核粗颗粒型 肝片：肝细胞核呈肝片：肝细胞核呈 颗粒样荧光。核仁颗粒样荧光。核仁 阴性；阴性；荧光强度与荧光强度与 HEp-2基本一致基本一致 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核呈颗粒样荧光，核呈颗粒样荧光， 核仁核仁阴性；分裂期阴性；分裂期 细胞细胞浓缩染色体浓缩染色体阴阴 性，染色体周围呈性，染色体周围呈 颗粒样荧光颗粒样荧光 靶抗原：靶抗原：nRNP、 Sm 核细颗粒型核细颗粒型 肝片：肝细胞核呈肝片：肝细胞核呈 颗粒样荧光。部分颗粒样荧光。部分 核仁阴性；核仁阴性；荧光强荧光强 度明显弱于度明显弱于HEp-2 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核呈细颗粒样荧光，核呈细颗粒样荧光， 部分核仁阴性部分核仁阴性；分；分 裂期细胞裂期细胞浓缩染色浓缩染色 体阴性体阴性，染色体周，染色体周 围呈颗粒样荧光围呈颗粒样荧光 靶抗原：靶抗原：SS-A、 SS-B 抗抗KuKu抗体抗体 肝片：肝片： （灵长类）（灵长类） 肝细胞核呈现肝细胞核呈现网状网状 荧光荧光 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核呈现细颗粒样荧核呈现细颗粒样荧 光；分裂期细胞光；分裂期细胞浓浓 缩染色体阴性缩染色体阴性 靶抗原：靶抗原：Ku蛋白蛋白 细胞周期蛋白细胞周期蛋白I I型（型（PCNAPCNA） 肝片：荧光模型不肝片：荧光模型不 典型典型 HEp-2：半数：半数间期间期 细胞核细胞核呈现亮的、呈现亮的、 细颗粒样荧光，核细颗粒样荧光，核 仁阴性；另半数间仁阴性；另半数间 期细胞荧光模型相期细胞荧光模型相 同，但强度弱同，但强度弱10倍倍 以上；以上；分裂期细胞分裂期细胞 浓缩染色体阴性浓缩染色体阴性， 周围有较弱的颗粒周围有较弱的颗粒 荧光荧光 靶抗原：靶抗原：DNA聚合聚合 酶酶的辅助蛋白的辅助蛋白 细胞周期蛋白细胞周期蛋白II II型型 肝片：荧光模型不肝片：荧光模型不 典型典型 HEp-2：部分间期：部分间期 细胞核阳性，细胞核阳性，部分部分 间期细胞核阴性间期细胞核阴性； 分裂期细胞核均阳分裂期细胞核均阳 性性，呈颗粒样荧光，呈颗粒样荧光， 浓缩染色体为阴性浓缩染色体为阴性 靶抗原：靶抗原：cyclin蛋白蛋白 着丝点型着丝点型 肝片：肝细胞核内肝片：肝细胞核内 可观察到可观察到10-20个荧个荧 光点；光点；荧光强度明荧光强度明 显弱于与显弱于与HEp-2细胞细胞 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核内出现大小数目核内出现大小数目 相同、均匀分布的相同、均匀分布的 点状荧光；分裂期点状荧光；分裂期 细胞细胞浓缩染色体浓缩染色体处处 出现出现浓缩点状荧光浓缩点状荧光 靶抗原：着丝点蛋靶抗原：着丝点蛋 白白 核点型核点型 肝片：肝细胞核内肝片：肝细胞核内 出现大小、数目不出现大小、数目不 均一的点状荧光；均一的点状荧光； 荧光强度与荧光强度与HEp-2 基本一致基本一致 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核内出现大小、数核内出现大小、数 目、强度不均的点目、强度不均的点 状荧光；分裂期细状荧光；分裂期细 胞胞浓缩染色体阴性浓缩染色体阴性。 周围可见点状荧光周围可见点状荧光 靶抗原：靶抗原：Sp100、 PML 核膜型核膜型 肝片：肝细胞核呈肝片：肝细胞核呈 现特征性现特征性环状荧光环状荧光 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核呈现均匀荧光，核呈现均匀荧光， 核周增强；核周增强；分裂期分裂期 细胞浓缩染色体阴细胞浓缩染色体阴 性性 靶抗原：板层素、靶抗原：板层素、 gp210 核仁型核仁型 肝片：肝细胞核仁肝片：肝细胞核仁 阳性；阳性；荧光强度与荧光强度与 HEp-2基本一致基本一致 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核仁阳性；核仁阳性；分裂期分裂期 细胞浓缩染色体阴细胞浓缩染色体阴 性性。 靶抗原：靶抗原：Scl-70、 PM-Scl、RNA多多 聚酶、原纤维蛋白聚酶、原纤维蛋白 原纤维蛋白原纤维蛋白 PM-Scl RNA多聚酶多聚酶 Scl-70 核仁型的多种模型核仁型的多种模型 胞浆颗粒型：抗核糖体胞浆颗粒型：抗核糖体P P蛋白抗体蛋白抗体 肝片：肝片： 灵长类肝组灵长类肝组 织中织中可能可能呈现特异呈现特异 的由几个肝细胞浆的由几个肝细胞浆 融合形成的融合形成的岛状荧岛状荧 光光 HEp-2：间期细胞：间期细胞 浆中出现致密的细浆中出现致密的细 颗粒样荧光，并颗粒样荧光，并有有 空泡现象空泡现象，部分核，部分核 仁阳性；分裂期细仁阳性；分裂期细 胞浓缩染色体阴性胞浓缩染色体阴性 靶抗原：核糖体靶抗原：核糖体P 蛋白蛋白 胞浆颗粒型：抗线粒体抗体胞浆颗粒型：抗线粒体抗体 肝片：肝片： 肝细胞呈颗肝细胞呈颗 粒样荧光，整个视粒样荧光，整个视 野呈野呈细沙状荧光细沙状荧光 HEp-2：细胞浆内：细胞浆内 粗颗粒样粗颗粒样荧光荧光 靶抗原：线粒体靶抗原：线粒体 胞浆颗粒型：抗胞浆颗粒型：抗JoJo- -1 1抗体抗体 肝片：肝片： 荧光模式不荧光模式不 典型典型 HEp-2：间期细胞浆：间期细胞浆 中出现中出现颗粒到细块状颗粒到细块状 荧光，细胞核有时也荧光，细胞核有时也 出现出现细颗粒荧光细颗粒荧光；分；分 裂期细胞浓缩染色体裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围区阴性，染色体周围区 域呈域呈致密的细颗粒荧致密的细颗粒荧 光光 靶抗原：靶抗原：Jo-1 胞浆颗粒型：抗溶酶体抗体胞浆颗粒型：抗溶酶体抗体 肝片：肝片： 荧光模式不荧光模式不 典型典型 HEp-2：细胞浆中：细胞浆中 出现细小的、中等出现细小的、中等 大小的、以及粗的大小的、以及粗的 滴状荧光滴状荧光颗粒颗粒 靶抗原：溶酶体靶抗原：溶酶体 胞浆颗粒型：抗高尔基体抗体胞浆颗粒型：抗高尔基体抗体 肝片：肝片： 荧光模式不荧光模式不 典型典型 HEp-2：间期细胞：间期细胞 核一侧核一侧的高尔基体的高尔基体 所在部位呈现网状所在部位呈现网状 的颗粒样荧光；分的颗粒样荧光；分 裂期细胞无荧光。裂期细胞无荧光。 靶抗原：高尔基体靶抗原：高尔基体 胞浆纤维型：抗肌动蛋白抗体胞浆纤维型：抗肌动蛋白抗体 肝片：肝片： 出现出现 “T” 字或字或 “丁”“丁” 字样荧字样荧 光光 HEp-2：细胞浆中：细胞浆中 出现无数出现无数束状纤维束状纤维 样结构，有时可伸样结构，有时可伸 展到细胞核展到细胞核 靶抗原：肌动蛋白靶抗原：肌动蛋白 胞浆纤维型：抗波形蛋白抗体胞浆纤维型：抗波形蛋白抗体 肝片：荧光模式不肝片：荧光模式不 典型典型 HEp-2：细胞浆中：细胞浆中 出现细的出现细的纤维网状纤维网状 荧光；分裂期细胞荧光；分裂期细胞 浓缩染色体阴性，浓缩染色体阴性， 染色体周围可出现染色体周围可出现 无数圆形的荧光点无数圆形的荧光点 靶抗原：波形蛋白靶抗原：波形蛋白 抗中心粒抗体抗中心粒抗体 肝片：荧光模式不肝片：荧光模式不 典型典型 HEp-2：在细胞核：在细胞核 内可见一内可见一或两个荧或两个荧 光点光点，分裂期细胞，分裂期细胞 中荧光点位于细胞中荧光点位于细胞 纵向对称的两极纵向对称的两极 抗纺锤体纤维抗体抗纺锤体纤维抗体 肝片：荧光模式不肝片：荧光模式不 典型典型 HEp-2：仅见于：仅见于分分 裂期细胞裂期细胞，纺锤体，纺锤体 部位出现特征性荧部位出现特征性荧 光。光。 抗中间体抗体抗中间体抗体 肝片：荧光模式不肝片：荧光模式不 典型典型 HEp-2：分裂中期分裂中期 细胞中间水平方向细胞中间水平方向 产生产生带状带状细颗粒荧细颗粒荧 光，半数间期细胞光，半数间期细胞 含有大量含有大量粗荧光点粗荧光点， 其余细胞为阴性。其余细胞为阴性。 模板片示例 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫） 抗抗dsDNAdsDNA抗体（绿蝇短膜虫）抗体（绿蝇短膜虫） 绿蝇短膜虫模式图绿蝇短膜虫模式图 抗抗dsDNAdsDNA抗体（绿蝇短膜虫）抗体（绿蝇短膜虫） 阴性阴性 阴性阴性 阳性阳性 抗抗dsDNAdsDNA抗体判读要点抗体判读要点 全部虫体动基体全部虫体动基体 表现为表现为均匀的均匀的、 有时边缘有时边缘增强增强的的 荧光。荧光。 细胞核与鞭毛基细胞核与鞭毛基 体体的反应的反应没有任没有任 何意义何意义，可不做，可不做 结果判断。结果判断。 ANCAANCA荧光模型解析及判读荧光模型解析及判读 ANCAANCA筛查：基质筛查：基质 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） = Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies ANCAANCA荧光模型荧光模型 核周型核周型ANCA（pANCA） 胞浆型胞浆型ANCA（cANCA） 细胞细胞核周核周围呈现平滑的围呈现平滑的带状带状荧光，荧光， 细胞核阴性细胞核阴性 细胞细胞浆浆呈现不均匀的呈现不均匀的颗粒样荧颗粒样荧 光光，有时形成小团块或粗大颗粒，有时形成小团块或粗大颗粒， 核分叶处有荧光增强核分叶处有荧光增强 ANCAANCA筛查：推荐基质组合筛查：推荐基质组合 粒细胞（乙醇固定）粒细胞（乙醇固定） 粒细胞（甲醛固定）粒细胞（甲醛固定） 猴肝猴肝 Hep-2 模板片示例模板片示例 抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） cANCAcANCA 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 猴肝猴肝 HEp-2 细胞细胞 pANCApANCA 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 猴肝猴肝 HEp-2 细胞细胞 pANCApANCA 猴肝猴肝 HEp-2 细胞细胞 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 关于肝片：关于肝片： EUROIMMUN 从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞 在肝组织上撒布中性粒细胞在肝组织上撒布中性粒细胞 关于乙醇固定的中性粒细胞关于乙醇固定的中性粒细胞： EUROIMMUN OK Maybe . ANAANA（干扰）（干扰） 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) HEp-2 细胞细胞 ANA+pANCAANA+pANCA 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) HEp-2 细胞细胞 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) ANCAANCA产品读片要点：产品读片要点： EUROIMMUN ANA主要会对乙醇固定粒细胞的基质产生干扰主要会对乙醇固定粒细胞的基质产生干扰 甲醛敏感的甲醛敏感的pANCA最易被最易被ANA干扰，从而产生误报。干扰，从而产生误报。 使用多基质组合（使用多基质组合（HEp-2/猴肝猴肝/乙醇固定乙醇固定/甲醛固定）进甲醛固定）进 行综合判断，可最大限度降低行综合判断，可最大限度降低ANA的干扰。的干扰。 自身免疫性肝病（自身免疫性肝病（ALDALD）相关抗体）相关抗体 荧光模型解析及判读荧光模型解析及判读 抗线粒体抗体（抗线粒体抗体（AMAAMA） 鼠肾：鼠肾：肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞胞胞 浆颗粒样荧光。浆颗粒样荧光。 相关疾病：原发性胆汁性相关疾病：原发性胆汁性 肝硬化（肝硬化（PBC）等。）等。 鼠肾鼠肾 鼠肾鼠肾：肾小管周围纤维：肾小管周围纤维 肾小球膜细胞肾小球膜细胞 血管肌层血管肌层 抗平滑肌抗体（抗平滑肌抗体（ASMAASMA） 鼠胃鼠胃：黏膜腺体间收缩蛋白：黏膜腺体间收缩蛋白 黏膜下肌层黏膜下肌层 肌层肌层 相关疾病：为相关疾病：为 AIH 的血清学标志的血清学标志 鼠胃鼠胃 鼠肾鼠肾 抗肝肾微粒体（抗肝肾微粒体（LKMLKM- -1 1）抗体）抗体 鼠肾鼠肾：近端肾小管近端肾小管细胞呈细胞呈 现现胞浆颗粒样胞浆颗粒样，核阴性，核阴性， 而而远端肾小管阴性远端肾小管阴性，呈现，呈现 半阴半阳半阴半阳模式模式 鼠肝鼠肝：肝细胞胞浆肝细胞胞浆呈现荧呈现荧 光，细颗粒到均质状，荧光，细颗粒到均质状，荧 光模型不特异光模型不特异 相关疾病：为相关疾病：为 II-AIH 的的 血清学标志血清学标志 鼠肾鼠肾 鼠肝鼠肝 抗肝溶质抗原（LC-1）抗体 鼠肝鼠肝 鼠肝：肝细胞胞浆荧