实验_紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt_第1页
实验_紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt_第2页
实验_紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt_第3页
实验_紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt_第4页
实验_紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt_第5页
已阅读5页，还剩9页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

分光光度法,分光光度法的原理,Lambert-Beer定律（光吸收定律）溶液的质量浓度（C）越大，液层厚度（L）越厚，则溶液对光线吸收得越多。当入射波长、液层厚度和溶液温度一定时（即K吸光系数为定值），溶液对光线的吸收与溶液中吸光物质的浓度成正比。所以可通过测量溶液的吸光度来求得被测组分的含量。,ItI0TT（transmittance）称为透光度，表示透过光的强度是入射光强度的百分比。,分光光度法的应用,用标准管法计算待测液浓度在相同条件下测定已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS），及未知浓度（CU）溶液的吸光度（AU），根据定律得：AU=KUCULU；AS=KSCSLS因为KU=KS，LU=LS所以AS与AU之比值也等于两浓度之比值即AU/AS=CU/CS，CU=,分光光度法的应用,用标准曲线法求出待测溶液的浓度先配制一系列已知浓度的测定物溶液，分别测得各管的吸光度。以各管吸光度为纵坐标，测定物含量为横坐标；在方格坐标纸上作图即得标准曲线图。,分光光度法,分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。特点：分光光度法灵敏度较高、精确度高、操作简便、快速。分光光度法所使用的光谱范围主要是波谱图中2001000nm为一段波长的光谱。紫外光区200400nm可见光区400760nm红外光区7601000nm,分光光度计的基本结构,光源,单色光器,吸收池,测光机构,钨丝灯氢灯氘灯,棱镜衍射光栅,玻璃比色杯石英比色杯,硒光电池光电管光电倍增管将光能转变为电能，光电流的强弱与溶液的吸光量强弱有关。,开机，预热2030分钟转动波长旋钮，调所需波长。调零测量并读数结束/关机清洗比色杯，收拾好仪器及配件，盖上防尘盖，登记仪器使用登记本。,分光光度计使用的注意事项,试管架或试剂瓶不得放置于仪器上，以防试剂溅出腐蚀机壳。拉杆动作要轻，防溶液溅出，腐蚀机件。比色杯应与分光光度计相配对，禁止随意挪用。比色杯应持其侧壁的毛玻璃面。盛液时不能太满（约达比色杯2/3体积），外壁如有液体，只能用滤纸沾去水份，再用擦镜纸擦干净。测毕，比色液一般应倒回原试管中，直至计算无误后方可倒掉。,原理,大多数蛋白质都含有色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)。这些氨基酸有苯环共轭双键，在紫外光区280nm显示最大光吸收，且吸光度与浓度成正比。,蛋白质定量紫外分光光度法,试剂配制表（ml）,蛋白质定量紫外分光光度法,1.标准管法（以第三管为标准管）,蛋白质定量紫外分光光度法,结果处理,2.标准曲线法以标准管浓度为横坐标，标
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论