枳实中橙皮苷的提取工艺研究

枳实中橙皮苷的提取工艺研究摘要：采用正交试验，以95%乙醇为提取剂提取3次，固液比分别在16、14、14的条件下提取，探讨从枳实中提取橙皮苷的方法。 其最佳工艺条件为温度85、ph5、提取4 h。 粗品再结晶提高橙皮苷纯度，该工艺操作简单可行，对环境污染小。 所得橙皮苷制品用紫外分光光度计测定纯度95%，与标准对照品一致。关键词：枳实橙皮苷； 萃取技术正交实验法abstract : themethodofhesperidinextractionhesperidinbyusingtheorthogonaltest extractionmaterialof 95 % ethylalcoholforreasonthree solid-liquidratioof 1:6、1:4、1:4 extractedunderconditions fructusaurantiimmatrus和drawsthehesperidinthemethod中的theoption ph4和4h有抽取时间1000000000000000000000000000006 ophotometer to test，还有产品keywords : fructusaurantiimmatrus，Hesperidin，Extracting process，Orthogonal test枳实(Frucus Aurantii Immaturus )为芸香科植物(Citrusauantiuml )及其栽培变种的干燥幼果和未成熟果实。 枳实为神农本草经，枳壳为开宝本草，李时珍为本草纲目，两者均称枳实，幼果称枳实，未成熟果实为枳壳1。 虽然主要含挥发油、辛苦苷、橙皮苷等，但有关枳实中有效成分辛苦苷含量测定的报道较多，但对枳实橙皮苷提取工艺的研究并不多见，本试验采用正交试验法优选枳实提取工艺，确定最佳提取条件，采用紫外分光光度计橙皮苷的分子式为C28H34026，分子量为610，熔点： 258-262为淡黄色的结晶粉末，为黄酮类苷，可溶于乙醇、稀碱、吡啶等，不溶于醚、氯仿苯等，紫外光2622nm处于最高峰，吸收系数为160，赫斯橙皮苷是二氢黄酮类，最明显的作用是具有抗氧化性，防止自由基的形成。 自由基不稳定，具有很高的化学活性5。 是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物。 在正常情况下，人体内的自由基不断处于发生与去除的动态平衡。 在代谢中发挥着重要的作用。 但是，如果自由基的发生过多或去除过慢，就会攻击生命的高分子物质和各种细胞器，被细胞膜上的分子夺走电子而自己成对，生成新的自由基，进行连锁反应，损伤细胞和结缔组织，损伤细胞中的脱氧核糖核酸(DNA )，一系列病原因进入细胞，加速生物体的老化在这种情况下，需要通过补充天然抗氧化剂来提高自由基的去除作用。橙皮苷仍是优异的活性除氧剂和抗脂抗氧剂，除去自由基抑制脂质过氧化的机制与超氧阴离子反应阻止自由基反应，与铁离子络合阻止羟自由基的生成，与脂质过氧化基反应阻止脂质过氧化过程。 因此，可以提取橙皮苷作为功能因子加入食品中，制备具有抗自由基的功能性食品13。随着科技的进步，人们的生活水平不断提高，延缓衰老，消除老人斑，防治疾病的功能性食品日益增多，深受消费者的欢迎。 天然自由基清除剂也广泛应用于食品，有数千年积累的中华药膳，引用现代的分离重组技术，无疑是发展功能性食品潜力的宝库。枳实中提取的橙皮苷也是天然产物，它在医学上维持血管正常渗透压，降低血管脆性，降低人体胆固醇含量，降低抗过敏、血压，抑制口腔癌、食道癌、大肠癌等癌变和抗病毒作用4。 橙皮苷氢化得到的二氢化碳是天然甜味剂，其甜度是蔗糖的1000倍，甜度大，性质稳定，口感好，可作为功能性食品5-6。 橙皮苷提取工艺的研究，为综合开发利用枳实，提高原材料利用率，提高经济效益提供了有用的原始数据，具有广泛的应用前景和科学意义。1 .材料、试剂和仪器设备1.1材料和试剂枳实(购买都江堰药房)、橙皮苷对照品(成都特大枳化公司提供)、盐酸、乙醇酐、氢氧化钠1.2仪器设备紫外分光光度计，pH计，电热恒温水浴锅，旋转蒸发器，电热送风干燥盒，电子分析天平，循环水真空泵，普通玻璃仪器。1.3工艺流程干燥粉碎回流提取过滤渣的再回流提取滤液浓缩回收溶剂待命过滤滤液浓缩把滤液合上两次调节PH值静置粗制橙皮苷再结晶精制橙皮苷2 .试验方法和标准曲线测定2.1单元试验2.1.1温度的影响橙皮苷在常温下微溶于乙醇，提高温度有利于橙皮苷的提取，从表1可以看出温度控制在80-90之间，橙皮苷的收率高。表1温度对橙皮苷提取率的影响表温度()65758595橙皮苷收率(% )很少0.350.820.752.1.2浸出时间的影响植物组织内的化学成分随着时间的推移提取量增大，但提取时间过长则杂质含量增加，时间过短则橙皮苷的溶出量少，收率低的结果如表2所示。表2浸渍时间的影响表浸泡时间(h )123456收率(% )8.511.113.113.413.112.82.1.3 PH值的影响不同PH条件下橙皮苷的析出量不同，表3显示，橙皮苷的收率随着PH的增加先增加后减少，PH在35之间显示出高收率。表3 PH值的影响表PH值2.03.03.54.04.55.06.0收率(% )10.812.913.113.313.513.712.5通过上述一系列单因素试验，影响橙皮苷提取的主要因素是提取时间、温度和PH。2.2正交试验从单因子试验的结果中，以95%乙醇为萃取剂，选择正交试验表，得到最佳工艺条件的结果如表4所示。表4正交试验方案表考试号a (温度)b (时间h )C(PH )11(75 )1(3)1(3.0 )212(4)2(4.0 )313(5)3(5.0 )42(85 )125223623173(95 3标准曲线测量利用分光光度计在特定波长下测定样品的吸收度和透光率的大小，计算橙皮苷含量的方法。准确量取对照品10mg，放入100ml的容量瓶中，用95%的乙醇决定容量，分别将2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、1.2ml的测定对象样品放入10ml的容量瓶中，用95%的乙醇决定容量为10ml，用2602波长测定各溶液的吸光度由吸光度浓度的基准曲线得到回归式Y=0.889x-0.805，由基准曲线得到相关系数r=0.924。表5吸光度-浓度标准曲线测定表浓度(mg/ml )0.20.40.60.81.0吸光度(Abs )0.110.2160.3210.4280.531图2含量测定基准曲线图0.110.2180.3210.4280.53100.10.20.30.40.50.60.70.20.40.60.81.0浓度(mg/ml )吸光度(Abs )2.4样品的测定准确量取样品10mg，放入10ml的容量瓶，用95%的乙醇放入容量瓶，用95%的乙醇放入容量瓶，在2602nm的波长下测定样品的吸光度为0.521，由回归式Y=0.889x-0.805计算出样品含量为97.5%。三.结果和分析3.1分析结果正交试验结果如表6所示。表6正交试验结果分析表考试号a (温度)b (时间h )C(PH )收率(% )11119.53212212.51313313.82421212.45522313.82623111.57731312.23832110.11933212.45T135.8634.2131.21108.49(T )T237.8436.4437.41T334.7937.8439.87表示利用LSD法的方差分析表，进行f检验的结果如表7所示表7方差分析结果因素方差平方和自由度方差f值F(0.01 )F(0.05 )a.a1.620.826.67*99.0019乙组联赛2.2421.1237.33*c.c13.2826.64221.33*误差(e )0.0620.03实验方差分析的结果为F0.05(2)时。 2)FAF0.01(2)。 2 )的情况下，当0.01P0.05、因子a显着，表示为26.67*的F0.05(2)时。 2)FBF0.01(2)。 2 )的情况下，0.01P0.05，因子b显着，在被表示为37.33*的FCF0.01(2)时。 在此情况下，P0.01和因子c非常显着，并且其被表示为221.33*。3.2讨论3.2.1三因素对指标影响的主次关系参照表6、表7，将收率作为优先方案指标，三要素对指标的影响程度为C(pH值)-B (时间)-A (温度)，即，最佳组合为C3B2A2。3.2.2恒温静置时间对收率的影响溶解于乙醇的橙皮苷遇到酸时会析出，但完全析出需要静置。 实验表明静置24-36h效果更好。 同时静置中，不宜温度过高，温度过高时(20以上)，橙皮苷容易被霉菌分解。 因此，静置过程的温度20为宜。3.2.3酶解作用对糖苷提取的影响糖苷和酶多存在于中药中，植物体内有水解糖苷的酶。 该酶促进糖苷酶解生成糖苷和肌苷，在潮湿的空气中粉碎生药原料，或用冷水浸泡生药粉末，使酶与糖苷接触使糖苷水解，失去原状，是提取糖苷成分时应考虑的问题11。 在提取糖苷时，如果不破坏或抑制酶的活性，通常不是提取糖苷，而是提取将糖的一部分水解后的糖苷，甚至是提取糖苷。 因此，要得到中药原苷必须破坏与其共存的酶。 破坏活性的方法很多，通常用60%以上的酒精、甲醇或80以上的热水处理生药原料，使酶改性，破坏或抑制活性，提取糖苷不会发生酶解现象12。 在本实验中，95%的乙醇处理滤液可以有效抑制酶的活性或改性酶。3.2.4溶剂的选择因为糖苷成分的溶解度有可能明显不同，所以提取用溶剂最好与想要提取糖苷的性质一起考虑。 多数情况下，糖苷在甲醇、醇、乙酸乙酯中的溶解度比较大，因此选择这些溶剂很常见，如果糖苷成分的亲脂性强，也可以选择氯仿。 因为易于提出糖苷，可抑制酶活性9。 但是，这些有机溶剂在食品生产时并不安全。 因此，针对上述分析，结合了可持续发展的道路，本次实验采用乙醇作为优先萃取溶剂。四.结论4.1UV/vis扫描分析表明，提取的物质为橙皮苷，含量为0.1%NaOH的75%乙醇溶液中的吸收峰与对照品的吸收峰一致。4.2萃取剂使用95%乙醇，固液比分别为16、14、14的条件下，从枳实中萃取橙皮苷的最佳工艺条件为85下回流萃取4h，将PH调节至5，所得产品纯度为85.7%。 重结晶的纯度可达95.3%。4.3该橙皮苷的提取方法操作简便、成本低廉、环境污染小、适合可持续发展的途径，因此从废枳实中提取橙皮苷具有一定的经济效益和现实意义，是从废变宝中综合利用的方法，适合工业生产。参考文献：1严赞开，严奉伟，曾杨等.从桔皮中提取橙皮苷方法的研究.湖北农学部学报，2000，20 (2):166-1672严赞、王朝辉、徐小万等.从桔皮中提取橙皮苷的优化技术.食品工业技术