(一) 白细胞计数

.,临床基础检验学实验一,牛鲍计数板的使用和白细胞计数南通大学第二附属医院检验医学中心陆永辉,.,实验一、白细胞计数,1.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。2.试剂器材白细胞稀释液：冰乙酸2.0ml10g/L亚甲蓝3滴加蒸馏水至100ml,.,器材改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。,.,.,.,毛细血管采血标准操作程序,操作步骤：1采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。2轻轻按摩采血部位。3用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。,.,4紧捏刺血部位，使其自然充血。5用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度23mm，稍加挤压以血液流出为宜。6用干棉球擦去第一滴血。7按需要依次采血。8采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。,.,微量吸管的使用,1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；6拔出微量吸管弃入污物桶。,.,3.操作步骤（1）加稀释液用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，选择（4）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10），调节光亮。（6）计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。,.,.,血细胞计数板的方格,计数板上下各一个计数池计数区域分为9个大方格四角的大方格各划分为16个中方格中央大方格划分为25个中方格四角的大方格为白细胞计数区中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区,.,结果计算白细胞总数=4大格白细胞数（N）/41020106=N20109/L用.109/L（小数点后一位）表示,.,注意事项,稀释液，小试管、计数板采血充池计数原则WBC过多WBC过少WBC校正显微镜调试,.,5.注意事项,(1).稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。(2).采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。(3).稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。(4).白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。(5).白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。,.,(6).一些贫血患者血液中有核红细胞增多，会计数在白细胞总数内，应校正。校正公式：白细胞校正数/L=M（100/100+N）M为未校正前白细胞数，N为在白细胞分类时，计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。(7).调试显微镜将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内分隔线条为止。,.,6.细胞计数原则,大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，弓形移动,.,7.正常参考值成人：（4.0-10.0）109/L新生儿：（15.0-20.0）109/L,.,8.考核评价a.常规考核标准（RCS）RCS=100%评价：白细胞4.0109/L者，RCS30%白细胞在（4.1-14.9）109/L者RCS20%白细胞15.0109/L者RCS15%超过上述标准者为不合格b.其他方法,四大格所见白细胞最大值最小值,四大格所见白细胞数平均值,.,9.思考题,1、某标本WBC为11.0 x109/L，分类100个WBC见到10个有核红细