植物组织培养2.ppt

植物组织培养,接种,一.植物茎的接种：,1.树莓和木枣幼苗的接种：接种前先将试管苗、培养基、酒精灯、蘸瓶、镊子、剪刀、记号笔、酒精棉球等接种用具放入超净台内，具体布局依个人情况而定，然后放好超净台的风幕，打开电源开关，同时打开“紫外”和“通风”开关，要求通风量为125。紫外灭菌30min,待紫外灭菌结束后，关掉“紫外”开关，打开“照明”开关。,在龙头上用香皂将手洗两遍，再在超净台内用蘸有75酒精的棉球将手檫拭，要求指尖指缝要仔细檫拭，然后将剪刀、镊子放入蘸瓶内，待手干时点燃酒精灯，将燃着的火柴头在超净台通风处熄灭，最后将其反着装入火柴盒内。将装有幼苗的瓶口在酒精灯火焰上快速烘一圈，以达到瞬间灭菌的效果。拿走封口膜，再将瓶口在酒精灯上快速烘一圈，要求瓶子不离开酒精灯的热范围。然后从蘸瓶里取出剪刀，将其下垂着在酒精灯火焰上烘干时，放入幼苗内瓶壁上冷却片刻。待最后一,节时，除去老根。瓶子内的幼苗剪好后，放回剪刀，取瓶培养基，瓶口在酒精灯火焰上快速烘一圈，去下封口膜，将其保持原状夹在食指和中指间或侧放在接种台上，不要将近瓶口一侧反向上，避免污染。然后左手将剪好的幼苗瓶和培养基侧向拿好，右手取出镊子，在酒精灯火焰上以同样的方法快速烘烤，待无酒精燃烧时放入培养基瓶内壁处冷却片刻，轻轻将幼苗夹住插入培养基中，每瓶四个。然后将接有幼苗的瓶口再次在火焰上烘一圈，快速盖上封口膜，扎好皮筋，放回超净台。之后以同样的方法依次快速接种,为了减少污染，要求操作过程要快速，镊子和剪刀在火焰上要燃烧彻底，同时冷却要彻底，防止烧苗。试验结果：2010.04.03，接种树莓39瓶共156株,污染3瓶（2瓶为乳白色，1瓶为蓝绿色），幼苗叶片卷曲.干枯有53株，占34；2010.04.18，接种木枣19瓶，19号观察全被污染。实验结果分析：树莓污染从其菌苔形态和颜色推测为放线菌(乳白色的菌丝）和霉菌。,幼苗叶片卷曲，说明接种过程中镊子和剪刀没彻底冷却，出现烧苗现象。木枣主要问题是污染，由于培养时间短，不能判断为哪种菌感染，但从菌在培养基内形成的菌苔分布可以推断污染源主要来自空气，也有部分从幼苗基部开始污染。实验疑问：用同样的方法接种树莓和木枣，为什么树莓污染的少而木枣污染的多？在接种过程中，镊子和剪刀在火焰上灼烧和在瓶壁上冷却到什么程度为宜？,二.晚蜜桃叶芽：,去生长健壮带有叶芽（1cm左右）的晚蜜桃新生枝条，用洗洁净水充分刷洗，再经自来水和蒸馏水漂洗56遍，剪成35cm左右的茎段放在无菌水里，与其它接种用具一同在超净台内灭菌40min，点燃酒精灯，在无菌环境中取出56个茎段放入灭过菌的装有无菌水的容器内，在75酒精溶液中浸泡3040秒，,弃去酒精液，再在混有两滴土温的0.1HgCl2溶液中浸7min，并不停摇动，最后用无菌水漂洗56遍（吸取残留的化学药剂）。然后那两个灭过菌的培养皿，里面放无菌吸水纸。将用酒精棉球檫拭过的接种刀和镊子从蘸瓶取出，在酒精灯上烧片刻，快速取几个茎段于培养皿中，用吸水纸将其吸干，左手持镊子，右手拿接种刀，将叶芽带一点外茎从茎段上轻轻切下来，剥去芽体外老的鳞片，,快速插入培养基中，每瓶接12个，然后快速封上封口膜，用皮筋和细线扎紧，注明名称，接种人和时间，放入培养是进行培养。实验结果：2010.04.10，接晚蜜桃叶39瓶共74个，到04.17日39瓶全部污染（菌苔为乳白色，浅橙色，蓝绿色），叶芽死亡占62.褐化为6.7，污染数占58，成活数占12.2。实验分析：4.6日上午采的外植体，经处理后4.10接，材料在外暴露时间有点长，,污染指数高。由于操作过程较复杂，容器数量较多，易污染。由于操作