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文档简介
主题3,酵母细胞的固定化,一、基本知识,一、酶制剂的概念和种类,(a)酶制剂,含有酶的产品,定义:多酶精制,酶洗涤剂的蛋白酶和脂肪酶,种类:a,液体酶制剂,特定胃肠疾病治疗剂,2,酶生产,提取,定义:植物、植物或微生物的组织,从细胞中直接提取酶的特定技术的优点:简单,动植物或微生物资源丰富的地区具有应用价值,例如可以从屠宰场提取家畜和胰腺中的胰蛋白酶;水果加工厂可以从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶。缺点:必须有足够的原料,广泛应用受到限制。发酵法,定义:通过微生物发酵获得所需的酶,如果是细胞外酶,可以直接从发酵液中提取;如果是细胞内的酶,就可以分解、提取、纯化细胞,使其容易培养,繁殖快,大量生产也容易。优点:提取方法:化学合成法,缺点:高成本,已知分子结构的酶,提取的酶也可以分离,纯化,添加适量稳定剂和填充物,用于催化化学反应,3,酶提取和分离,纯化等。正版beely qi 7效果集成bb霜50g完美裸体化妆保湿封面购买地址。酶提取,盐溶液提取方法,碱溶液提取方法,有机溶剂提取方法,适当的温度和pH及保护剂,方法:条件:酶分离纯化,沉淀技术(密度梯度离心法),色谱技术,方法:4,酶特性(见教科书P49页),天然酶通常对强酸、强酸、高温、有机溶剂等条件非常敏感,容易失活,溶液中的酶难以回收,不能重复使用,提高生产成本,反应后酶混合在产品中,影响产品质量,难以广泛应用于工业生产。(b)固定化酶,固定化酶是指限制或固定在特定空间位置的酶。特别是通过物理或化学方法处理,使酶不受水的限制或运动的催化作用的酶制剂,(3)固定细胞,在特定空间位置限制或放置细胞的方法称为细胞固定化技术,特定空间位置限制或放置的细胞称为固定化细胞,固定化技术。固定化细胞:(4)使用酶、固定化酶和固定化细胞催化剂的优缺点,(5)酶和细胞固定化方法(见课本第P50页),想:固定化酶或固定化细胞可以采取什么方法?各有什么优缺点?(6)酶和细胞固定方法的选择,(1)酶适合用化学结合和物理吸附法固定,(2)细胞适合用嵌入法固定,(1)方法,2,原因,(1)细胞大,酶分子小,(2)单个大细胞不能吸附或结合,(2)小酶容易从嵌入物质泄漏,(7)固定化酶的应用实例,1,高果糖,原料,葡萄糖生产,葡萄糖是从淀粉转化而来的,是通过酶法糖化淀粉而得到的糖化液,通过葡萄糖异构酶的异构作用将其一部分组成糖果糖,葡萄糖和果糖构成的一种混合糖糖浆,生产机制。生产过程,生产优势,反应器柱可持续使用半年,大大降低了生产成本,提高了果糖的产量和质量。2,实验操作,(a)方法,1,嵌入方法固定化细胞,2,作为容纳酵母细胞的载体,海藻酸钠,(2)固定化酵母细胞的制造,1,激活酵母细胞,过程,1g干酵母,放入50ml小烧杯,蒸馏水10ml。用玻璃棒混合酵母细胞,均匀混合,约1小时左右激活。注意事项,a,选择干燥酵母必须具有较强的活性,在纸张单,b,缺水的情况下,微生物处于休眠状态。活化使处于()状态的微生物恢复正常生活状态,休眠状态,2,将成分物质浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液,工艺,无水CaCl20.83g放入200ml燃烧器内,加入150ml蒸馏水充分溶解后使用。注意事项,防止自来水溶解的溶解物质彻底,以防自来水中的各种离子影响实验结果。3,制备海藻酸钠溶液。加入0.7g海藻酸钠,加入50ml烧嘴,加入10ml水,用酒精灯加热,加热至完全溶解,将海藻酸钠变成明胶形式,用蒸馏水10ml,过程,注意事项,加热时使用。小火,间歇加热,直到海藻酸钠融化。海藻酸钠的浓度与固定细胞的质量有关。如果海藻酸钠的浓度太高,就很难形成凝胶珠。浓度低的话,盖尔比德浸泡的酵母细胞数量就会减少,4,将海藻酸钠溶液和酵母细胞混合,使融化的海藻酸钠溶液冷却到室温,加入活化酵母细胞,充分搅拌,转移到注射器。过程,注意事项a,融化的海藻酸钠溶液要冷却到室温。否则温度会高,杀死酵母。b,充分搅拌,将两者混合,以免影响实验结果。(5)固定酵母细胞,以一定速度慢慢将注射器的溶液放入准备好的CaCl2溶液中,形成的凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30分钟左右,过程。注意事项,a,用海藻酸钠制作凝胶珠,不含酵母,可用作对照组,B,海藻酸钠胶体在电解质(如CaCl2)的作用下凝聚,形成凝胶注,需要稳定约30分钟,(3)用固定化酵母细胞发酵后,将固定化酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次,凝胶珠,刚形成的凝胶珠需要在CaCl2溶液中浸泡一段时间,以形成一定的结构。要检查凝胶珠的质量是否合格,可以使用以下方法:第一,将一个凝胶珠子用镊子夹在实验桌上,用手挤压,凝胶珠子就不会轻易碎,液体不流出来的话,凝胶珠子的制作就成功了。第二种是在实验上用力摔跤凝胶珠,这表明如果凝胶珠能轻易弹开,制造的凝胶比也能成功。将150毫升质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200毫升的锥形瓶后,加入固定良好的酵母细胞,在25C下,好好调节24h,2,注意事项,发酵温度。一般来说,室温25C,发酵时间稍长,效果明显。用无酵母的凝胶珠进行了同样的处理,比较了实验结果。(a)观察凝胶珠的颜色和形状。如果凝胶珠的颜色太亮或太白,则意味着海藻
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