微生物实验操作ppt课件

选修1专题二,课题1微生物的实验室培养,1,课题1微生物的实验室培养,微生物的实验室培养条件：,（1）合适的营养和环境条件,（2）确保其他微生物无法混入,一.培养基,1.概念：,按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,2,2.种类：（按物理形态分）,液体培养基、半固体培养基固体培养基,应用微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面,按照培养基用途分,选择性培养基鉴别培养基,按照培养基的成分来分,合成培养基、天然培养基、半合成培养基,3,3.成分：,思考：各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？,水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）,+满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求,C,4,二.无菌技术,思考：1.什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？,无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防止杂菌污染的方法。,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,5,C,返回,6,3.常用的消毒方法：,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法,常用的灭菌方法：,灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa12115-30min,判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。（1）豆浆（2）游泳池（3）超净工作台（4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶（5）培养细菌用的培养皿（6）无菌水（7）牛肉膏蛋白胨培养基（8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手,牛奶,接种室、接种箱或超净工作台,接种工具，接种环、接种针或其他金属用具,玻璃器皿（吸管、培养皿）,7,三.实验操作-大肠杆菌的纯化培养,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化灭菌倒平板（二）纯化大肠杆菌最常用的接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法,（冷却至50）,8,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,9,菌种的保存,1、临时保藏法：对象：温度：缺点：2、甘油管藏法：对象：温度：,结果分析与评价课题延伸,（P20）,频繁使用的菌种,4（冰箱）,容易被污染或产生变异,长期保存的菌种,-20（冷冻箱）,10,返回,11,接种环,接种针,返回,12,倒平板,讨论1，2,讨论3，4,13,平板划线法,讨论2，3,14,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,操作的第一步灼烧接种环：每次划线前灼烧接种环：划线结束后灼烧接种环：,避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；,杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,15,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落,返回1,16,涂布器,17,1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基,返回1,返回2,18,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,不要空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,返回,19,选择培养基,不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养