PCR实验室规范化管理与质量控制ppt课件

. PCR实验室标准化管理和质量控制，温州医学院检验医学院温州医学院附属第一医院检验科陶志华，PCR实验室标准化管理，第一部分，1.PCR实验室标准化管理，依据： 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 (卫生医发200210号文) 临床基因扩增检验实验室工作规范卫检字20028号， 1.PCR实验室安装作业场所构成(各区不同颜色的隔离服)试剂准备区、样品准备区、PCR扩增区、PCR产物分析区、样品接收和作业场所构成的设备、仪器等物品专用，2.PCR实验室安装的管理，注意：唯一流向制度问题的物品专用和流动问题，3.PCR实验室人员配置， 相对固定的专家(学历和作用)训练和上岗证PCR检测干扰因素较多，结果分析复杂，其应用需与临床充分交流。 PCR实验室工作人员必须掌握相关学科的知识和应用能力(实验技能、分析能力、沟通能力)，4 .仪器设备的管理，(1)建立管理： a .仪器设备的一般情况b .仪器设备的相关文件c .仪器设备的损坏、故障修理记录d .有问题的仪器设备停止标识e .仪器设备的废弃处理(2) 仪器设备的分类专用(3)仪器设备的校准和检定(4)定期维护和维护5 .实验材料的采购和管理，(1)PCR检测试剂选择：经有关机构检定批准出厂的商品化试剂盒，商品试剂有三证(生产许可证、产品注册证、经营许可证)。 (2)Tip头选项：必须使用带过滤器的PCR专用Tip头，b .内装检查：内装是否损坏、泄漏、内容物齐全、有使用说明书等。a .外包装检查：包装完全无污染，需要查明：厂家名称、品名、批准编号、生产日期、有效期限等。 (3)试剂和消耗品的检查： c .性能检查，a.PCR检查试剂分类：核酸提取液，阴，阳性对照，定量标准及其他样本处理用试剂保存在样本处理区的扩增反应系统试剂保存在试剂调制区。 b.PCR检测试剂存放在-20冰箱中。 c .无菌处理前消耗品存放在试剂准备区，按日常工作量定期定量处理后，放入样品处理区和扩增区。 (4)试剂和消耗品的储存：系统成立后，如果需要更换试剂品牌，实验室主任必须向科技负责人提交书面报告，说明变更理由，经科技委员会讨论，科技负责人签字批准后才能更换。 (5)实验室不能随意变更检测系统，6.PCR检测的标本管理，(1)接收标本时检查标本与检测申请书的一致性，记录标本的状态，并在登记册上签字。 检查申请有不明确的情况，应当立即与临床科和相关人员联系验证，做好记录。(2)标本的唯一标识由3个部分构成-检查项目、标本采集日、该检查批次的标本编号、3个部分之间没有间隔的符号，例如HBV020601a1(项目年月日编号)。 标本的唯一标志必须清楚，必须随便做任何事情，对旧标志加以双线变更，使变更后能够识别旧标志。 (3)标本的废弃处理、确认废弃样品后，将容器保持完整，放置在废弃标本处，密封收集，统一焚烧处理，有记录。7.PCR试验记录的管理，(1)记录方法a .接受样本记录：在书面记录患者信息、样本信息、有无保存的同时，标识样本，在记录人签名的检查时，将标识的样本带入样本处理间处理。 b.PCR放大检查记录：检查结果以明确的唯一标识保存在PCR放大装置的个人电脑指定的文件夹中，定期进行备份和整理。 c .保存的文件夹和文件id号： d .电子保存的软件备份要求：计划在每月电子报告的软件备份的最后一个工作日完成。.记录保存，a .电子数据保存：将病例资料、样本资料、检查结果记录在报告系统中，制作报告书，记录者将b .文书记录保存3360文书记录(病例资料和结果记录)装订保存在报告系统旁边的抽屉中，每月整理，所有记录保存2年，2年后交课，(3)记录的秘密： a.“data”用系统设定密码保护b .结果资料报告系统设定密码保护c .使用及保存的文字记录在实验室职员的监督下，远离本室人员视线监督者存放在上锁的抽屉或文件箱中，钥匙由该职员保管。 d .记录不可篡改。 需要订正的情况下，用红笔在订正内容上加上双斜线，在备注栏进行说明、签字，8.PCR检查结果的报告；(1)报告的要求检查报告书应以正确、明确、客观的(2)报告的形式由各医院定制；(3)报告书的发行和管理(证明书)。 账单)电话报告？ (5)化验单需要邮寄和电子邮件形式发行的管理，9 .投诉的内部处理，(1)接受投诉：医生、患者、其他人、执行人在接受投诉时，记录投诉人的姓名、住所、联系方式、投诉内容(必要时首先要使投诉人的感情稳定)。(2)投诉的处理(投诉)，a .此时可处理的投诉可立即解决并记录。 b .如无法立即答复，则根据逐步授权报告解决。 c .处理投诉的目的是让患者满意，但应以重视科学、重视事实为原则，在不遵循科学原则、医疗行为规范的基础上，获得投诉人的最大理解。 10 .传染性防护，(1)来自所有患者的血液和体液都被认为具有传染性。 标本采集、运输过程中应完全保持容器，无泄漏。 (2)处理血液和体液的作业人员必须戴手套、防护服、帽子、口罩。 (3)标本处理过程中，手部及其他部位的皮肤必须在接触血液及其他体液后立即完全清洗干净。 临床基因扩增实验室的质量控制，第二部分，为什么特别强调质量控制？ 易污染-假阳性处理不当-假阴性，假阳性问题：标本、试剂及实验场污染试剂盒的质量问题，ung酶是一个选择，因此，安心加强管理是最重要的优质试剂盒，假阴性问题： 原因：1.标本处理等操作过程问题2 .标本存在抑制剂3 .基因突变解决方法：1.稀释标本2 .点突变检测3 .结合其他方法分析4 .加强与临床的联系和对话，加强临床基因扩增实验室的质量控制，为什么要强调质量控制？ 目前国内使用的核酸定量法受模板浓度、PCR反应系统批次间差异的影响很大。 因此，必须对方法学的精度(批内变异)和重现性(批间变异)进行分析，规范PCR实验室室内质量控制工作室间质量控制，规范临床基因扩增检测的室内质量控制，测前质量控制操作实验过程质量控制统计学处理，测前质量控制标本采集和采集实验室设施， 仪器设备及理想的试剂和操作方法管理人员培训，操作实验过程的质量控制，标本核酸提取质量控制目标核酸提取的质量和效率临床标本以及核酸提取中可能存在的抑制物和干扰物扩增和产物检测质量控制，质量控制管设计， 已知弱阳性样品质量控制阴性样品质量控制试剂空白质量控制，已知弱阳性样品质量控制，监测整个实验过程的有效性，监测阴性血清样品质量控制，实验室以前扩增产物的污染。 实验操作对标本间交叉污染扩增反应试剂的污染。试剂空白管质量控制，监测放大试剂是否产生污染，具有较强的污染鉴别性。 监测反应液样品区及样品工艺是否有污染。为了判别实验室是否发生污染，打开一个或多个管道，在样品调制区静置3060分钟，一边加入扩增反应混合液，一边用水代替核酸样品进行扩增，如果阳性，只含有上述扩增反应混合液的管道为阴性，就说明实验室以前扩增产物的存在。统计质量管理方法、levely-jennings质量管理图方法levely-jennings质量管理图和Westgard多规则质量管理方法、高、低值质量管理血清的制备、通常检查的血清标本按高、低值分类后混合分注(每管一个检查单位)，冷冻保存在-20的冰箱中。 采购、检测结果的质量监测是用通常的方法每天插入高、低值的质量管理血清和阴性的质量管理血清进行定量检测(包括标本预处理、DNA提取等工序)后，分别计算高、低值的血清的平均值(x )、标准偏差(s )和变异系数(CV )，制作L-J动态质量管理图的高值的质量管理血清， 高阳性血清的低值品质管理最好把血清作为阈值血清，结果是.标准曲线的切片和倾斜度的品质管理，标准曲线的倾斜度作为品质管理图，把标准曲线切片作为品质管理图，用同批号的试剂和批号的标准品连续测定20批，试剂a标记探针荧光强度和背景荧光， 试剂b标记探针荧光强度和背景荧光，试剂c标记探针荧光强度和背景荧光，试剂a质量结果，试剂a用于标准HBVDNA荧光定量检查， 用该试剂盒的标准曲线的倾斜度和切片对试剂批次之间的差异进行质量控制的结果如图所示.标准曲线的倾斜度和切片的批次之间的差异， 该批试剂批次间不同批次的试剂批次间的倾斜切片的平均值为3.72445.8083.67144.474标准偏差为0.1160.7850.952变异系数为3.1061.7141.2292.140，试剂a的质量稳定性，该批次的试剂检测量不同批号试剂标准曲线的斜率和截距平均、标准偏差分别为3.671、0.045和44.474、0.952，批次间变异(试剂盒批次间)为1.229%和2.14%。HBVDNA定量PCR标准曲线斜率质量控制图、HBVDNA定量PCR标准曲线斜率质量控制图、优点、试剂盒标准曲线斜率和切片、荧光背景噪声和荧光曲线陡度实施动态质量控制，采用具有简单、实用等优点的试剂盒标准曲线斜率和切片对定量PCR进行室内质量控制的试剂分注质量(反应液酶添加量)和酶活性控制失控4 .临床PCR试剂盒的选择原则，PCR或构成RT-PCR试剂盒的PCR试剂盒的分类影响PCR试剂盒质量的因子PCR试剂盒的质量指标PCR试剂盒的选择原则，1， PCR或RT-PCR试剂盒的构成核酸提取试剂的标准品和质量控制品核酸扩增或逆转录核酸扩增试剂的产物检测试剂(使用全自动分析装置的PCR法由于核酸扩增和检测同时完成，因此没有特别的产物检测试剂)、2、PCR试剂盒的分类、定性测定： pcre Lisa、PCR膜上杂交、荧光PCR法、3、影响PCR试剂盒质量的因素、内在因素：原材料、核酸提取方法、方法学设计外在因素：试剂盒的运输和贮