第二章-生物工程的一般技术

第二章生物工程的一般技术细胞培养环境动植物细胞的培养在人工环境中进行。这种人工环境不仅要满足培养的生物机体正常生长和分裂所需的营养，还要保证清洁，不受其他微生物和有害因素的影响。换句话说，细胞培养过程在无菌条件下进行。细胞培养中的常见污染物和危害1。革兰氏阳性菌：枯草芽孢杆菌等。大多数化脓性球菌属于革兰氏阳性菌，能产生外毒素引起疾病。常见的革兰氏阳性菌包括葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、炭疽、白喉、破伤风等。可以选择青霉素和头孢曲松钠。革兰氏阴性菌：大肠杆菌、假单胞菌等。大多数肠道细菌属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素并通过内毒素使人生病。常见的革兰氏阴性菌包括痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌和脑膜炎球菌。革兰氏阴性菌对青霉素不敏感，可以选择氟喹诺酮类药物如诺氟沙星和左氧氟沙星，也可以选择大环内酯类药物如克拉霉素和罗红霉素。革兰氏染色法，用结晶紫溶液和碘溶液染色，然后用95%酒精脱色，然后用稀红色液体染色。经过这样的处理，一些细菌被染成紫色，革兰氏阳性菌，一些被染成红色，革兰氏阴性菌。被细菌污染后，培养液会变浑浊，ph值会发生变化，细胞的正常生命活动会受到影响，生理病理会发生变化，最终会发生死亡。真菌是真核生物。生活中最常见的真菌是各种蘑菇，真菌还包括霉菌和酵母。真菌污染的危害接受真菌污染后，培养基通常不混浊，但在培养基中可以看到白色或黄色的点或球。在显微镜下观察这些点，丝状、管状或树枝状菌丝紧密交错。培养基中的真菌会利用培养基中的营养物质快速生长，从而减缓培养细胞的生长，并最终由于营养物质缺乏和毒性作用而死亡。其他污染因素支原体病毒不是同一物种的细胞，因此控制污染是细胞培养的关键。第一节细胞培养的无菌操作及常用设备定义：培养系统无菌条件及防止微生物进入无菌范围的一系列操作技术1。细胞培养无菌操作简介：1 .无菌操作前，你必须戴上帽子和口罩，用清洁剂洗手，并擦干。2.无菌操作前，用70%酒精消毒手和手臂。手术应该是轻的。无菌镊子夹住物品。打开火焰周围的盖子并消毒。4.手术期间不要说话或打喷嚏。5.每次操作时应注意接种针和手术刀在酒精灯火焰上的点火。请注意，移液器吸头是一次性的，每次都必须更换。不小心触摸手或其他物品时，应将其丢弃。每次操作结束时，接种针应在火焰上燃烧。清洁台面，并用消毒泡沫纱布擦拭台面。7.用于细胞培养的物品必须彻底清洗和消毒，溶液必须经过高压灭菌或过滤灭菌。吴军物品必须储存在无菌袋或容器中，不得暴露在空气中。无菌和细菌分开放置。无菌袋打开后不能被认为是绝对无菌的，应该尽快使用。已经取出的无菌物品不能放回无菌容器，即使它们没有被使用过。无菌袋应按照消毒日期的顺序放置在固定的柜内，保持清洁干燥，与非无菌袋分开放置，并检查无菌袋或容器是否过期。9、无菌生理盐水和酒精，新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器敷料如干棉球、纱布块等。不能装得太满，以免在使用时碰到容器外面被污染。10.保持无菌手术室干净、干燥、新鲜。定期对手术室和剩余的无菌器具进行消毒。细胞培养的常用设备和灭菌方法。玻璃设备。第一次使用的玻璃设备：自来水-1%稀盐酸浸泡过夜-自来水。可重复使用的玻璃设备：用软刷和中性洗涤剂擦洗-加入洗液(K2Cr2O7和浓H2SO 4)12-24小时-自来水10次以上-单蒸水3次-双蒸水1次，干包装-121度高压蒸汽灭菌20分钟。2.首次可重复使用的塑料设备自来水如塑料设备培养皿吸头多孔培养板可直接使用，并干燥-浸泡在3%盐酸或2%氢氧化钠中过夜-自来水-双蒸水3次-干燥-紫外线灯照射。橡胶设备塞子和盖子1新橡胶设备自来水-5%氢氧化钠煮沸15分钟-自来水8次-4%盐酸煮沸15分钟-自来水8次-单蒸馏水3次-双蒸馏水1次。2旧橡胶制品自来水-洗衣粉煮沸10分钟-自来水洗涤和搅拌-蒸馏水煮沸15分钟两次-单蒸馏水两次-双蒸馏水一次。3包或as为高压蒸汽灭菌铝盒20分钟，4个金属镊子，剪刀针，新金属纸擦拭油-洗衣粉煮沸(或1%碳酸氢钠)煮沸15分钟，-95%酒精纱布擦拭-包装或铝盒-高压蒸汽灭菌20分钟，旧金属酒精-铝盒包装-高压蒸汽灭菌20分钟，5，其他用品注射器自来水数次-单蒸馏水2，3次-95%酒精冲洗3次-包装高压蒸汽灭菌20分钟纱布自来水-单蒸馏水-单蒸馏水煮沸镊子翻转-单蒸水洗2次-风干后包装成8层-高压灭菌20分钟培养基和其他液体-高压灭菌20分钟-高压灭菌血清56度水浴灭活敏感成分如iaa细