甘油管冷冻保藏方法收集-2

应变管由传统的玻璃应变管改为0.5毫升带盖塑料离心管。方法：(1)将塑料离心管放入耐高压的塑料离心管盒中，用双层报纸包裹，用高压蒸汽灭菌15磅15分钟，在80烘箱中干燥。(2)在净化工作台中，用一个长的毛细管玻璃滴管将脱脂牛奶清洗过的厚细菌悬液添加到塑料离心管的底部，每个大约0.2毫升。记住不要用牛奶污染离心管管口。(3)将加入菌液的离心管箱放入-20的冰箱中进行预冻，预冻后放入冷冻干燥机的干燥箱中进行冷冻干燥。(4)冻干后，不抽真空，将离心管套压在纯化工作台上。用密封膜标记并密封离心喷嘴。储存在-20冰箱中。改进后的方法具有以下优点：(1)大大简化了操作过程，不需要溶解和密封过滤器的喷嘴，也不需要抽真空。(2)应变管具有优异的抗断裂性能；(3)应变管体积极小。(4)成本低，易于商业化生产和推广。作者使用这种改进的方法已近7年，在该省分布的数万株菌株没有受到破坏。好几次，嗜血细菌、链球菌、奈瑟菌和其他苛求细菌被分布并生长良好。近年来，我们还向中国东部的一些兄弟省份提供了40，000多个实验室基质菌株，取得了令人满意的结果。实验微生物菌种的常规保存方法报名时间：11-4-13 9:337资料来源：天津农业大学精品课程菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是微生物的一项重要基础工作。菌种保藏是利用一切条件使菌种不朽、持久、不变，以利于研究和应用。目的1.1了解菌种保藏的基本原理1.2掌握几种常见的菌种保藏方法。原则2有许多方法可以保存菌株。原理是一样的，无非是创造一个适合优良菌株长期休眠的环境，即干燥、低温、缺氧和营养缺乏等。微生物的代谢活性保持在最低限度，但不会死亡，从而达到保存的目的。根据不同的菌种或不同的需要，应选择不同的保藏方法。一般来说，斜坡保存、半固体穿刺、石蜡油保存和砂管保存是常用的且易于制作。3种材料3.1应变要保存的适合年龄的应变的倾斜平面3.2中等蛋白胨肉汤斜面，半固体和液体培养基。3.3试剂10%盐酸无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。3.4电器几个小试管(10 * 100毫米)、5毫升无菌吸管、1毫升无菌吸管等。灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、喇叭勺等。用于菌种保藏。4流程斜坡保存半固体穿刺保存石蜡油保存砂管保存5步5.1倾斜保存5.1.1流程标记试管接种培养保存5.1.2步骤5.1.2.1标签取几个无菌肉汤蛋白胨斜面。在距试管口2-3厘米的斜面顶部贴上标签。待接种细菌的名称、培养基的名称和接种日期应在标签纸上标明。5.1.2.2斜面接种在无菌操作中，用斜面上的接种环划线接种待保存的细菌。5.1.2.3文化在37培养箱中培养48小时。5.1.2.4的保存斜面生长后，直接储存在4的冰箱中。这种方法在船上可以保存三个月到六个月。5.2半固体穿刺保存5.2.1流程标记试管穿刺接种培养保存5.2.2步骤5.2.2.1标签取几个直柱，如无菌半固体肉汤蛋白，并贴上标签，注明细菌名称、培养基和接种日期。5.2.2.2穿刺接种用接种针从细菌斜面上挑取菌株，以无菌方式保存，将它们直刺到试管底部的立柱中心，然后沿在无菌操作下，应向培养的菌株中加入5 ml石蜡油，加入量应高于斜面或垂直柱1 cm。5.3.5保存：石蜡油密封后，也存放在4的冰箱中。也可以直接储存在低温干燥的地方。这种方法的保存期限一般为一至两年。5.4砂管保存5.4.1流程制作砂管，灭菌，制成菌液，加入样品，干燥，保存5.4.2步骤5.4.2.1制砂管用40目筛挑选黄沙，酸洗，水洗至中性，干燥备用；黄土过120目筛备用；按照1份土和4份砂的比例，将它们混合均匀，放入一个约1cm的小试管中。5.4.2.2的绝育加压蒸汽灭菌，直至检测到无菌状态。5.4.2.3菌液的制备取3毫升无菌水至待保藏菌株的斜面，用接种环轻轻刮去真菌苔藓。摇动以获得细菌悬浮液。5.4.2.4样品添加用1毫升吸管将0.1毫升上述悬浮液吸入沙管，然后用接种环充分混合。5.4.2.5很干燥将装有细菌液体的砂管放入干燥器中，或使用真空泵连续抽吸空气，同时干燥。5.4.2.6的保存干燥后的砂管可直接存放在冰箱中；你也可以用石蜡密封棉塞，并把它储存在冰箱里。(2)冷冻干燥保存方法目的1.1了解菌种冻干保存的原理1.2掌握菌种冷冻干燥保存的方法。原则2菌种冷冻干燥保藏可以克服简单保藏方法的缺点。这是迄今为止最有效的菌种保藏方法之一，因为微生物总是通过使用有利于菌种保藏的切割因子而保持在低温、干燥和缺氧的条件下。3种材料3.1应变要保存的各种菌株。3.2试剂2%盐酸；牛奶3.3电器安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花装置。4流程制备安瓿、制备脱脂乳、制备细菌悬液、分装、预冻、真空干燥、保存和活化5步5.1准备安瓿管将安瓿管浸泡在2%盐酸中，洗涤数次并干燥。将标签放入安培管，将棉花塞在管口，消毒后备用。5.2脱脂牛奶的制备鲜牛奶加工或脱脂奶粉与脱脂牛奶混合后，灭菌，灭菌后备用。5.3细菌悬浮液的制备将无菌牛奶直接加入菌种斜面中保存，用接种环刮去菌种，轻轻搅拌，使菌种均匀悬浮在牛奶中形成悬浮液。5.4分开充电使用无菌长滴管将悬浮液分成安瓿管，每个安瓿管的体积约为0.9毫升。(一般来说，装载量是安瓿管灯泡体积的1/3)5.5预冻将分装好的安瓿在-25至-40的干冰酒精中预冻1小时；或者在冰箱的冷冻室里。5.6真空干燥预冻后，将安瓿管放入真空装置中，启动真空泵进行干燥。5.7管道密封在密封导管之前，将安瓿装入歧管。真空度抽至0.01毫米汞柱后，用火焰熔封。密封后，应使用高频火花装置检查每个安瓿管的真空状态。如果试管显示出灰蓝色的光，则保持真空。检查时，高频电火花应对准安瓿管的上半部分。5.8保存制备好的安瓿瓶应低温保存，远离光线。激活如果要从安瓿中取出细菌并再次培养，可以用75%的酒精对试管外壁进行消毒，然后在火焰上加热安瓿试管的上部，然后滴几滴无菌水来打破试管。松散的干燥样品直接用接种针挑取，接种在斜面上。结果6.1简述菌种真空冷冻干燥保存的原理。6.2记录用于液体石蜡密封的大肠杆菌斜面和用于砂管保存的枯草芽孢杆菌的关键点。思考7.1石蜡油在菌种保藏中的作用是什么？7.2对于常用的菌株，哪种保存方法更好(2)在30或37的恒温培养箱中倒置平板24-48小时，直到单个菌落的大小约为3毫米(3)选择单个菌落，接种到含有50毫升的300毫升三角瓶中，在30或37振荡培养10-15小时，直至细菌密度OD600为1.0-1.5。(4)从火焰灭菌接种环中取少量种子液，涂片，革兰氏染色，显微镜下观察菌体形态及有无杂菌。(5)按30%甘油种子溶液11(v/v)的量加入无菌甘油，混合，分装到无菌菌种保藏管(1-2mL/管)中，在-70或液氮中保藏。专家回答甘油管的冷冻保存1.试验方法简介该方法还利用抑制微生物在甘油中的生长和代谢的原理来达到保存的目的。该方法是在高压蒸汽下对80%的甘油进行消毒，以备后用。培养的斜面菌种用无菌水制成高浓度菌悬液(108-1081010/ml)。取1毫升灭菌甘油，放入容器中，与甘油混合，使甘油浓度在10%-30%左右，并在-70冷冻。-20储存时间短。或者采用体积比为82的甘油-生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀，储存在-20的冰箱中2.效果本方法适用于普通细菌的保存，也适用于链球菌、弧菌、真菌等需要特殊保存方法的菌株。它适用范围广，操作简单，效果好，无变化。细菌在甘油-生理盐水保存液中的保存效果优于在甘油原液中的保存效果，这可能是由于添加生理盐水以降低甘油的高渗作用，以及添加肉汤培养物以增加保存液的营养成分，从而更好地保护待保存的细菌。请大侠帮忙我想据说甘油，一种防冻剂，需要被添加以在-80度的斜面上长时间保存醋酸菌