食用菌菌种制作.pptx

食用菌菌种制作,Loremipsumdolorsitamet,consecteturadipisicingelit.,菌种制作的一般流程,第一部分：培养基制备一、试管PDA（母种）培养基制备1.所需原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂17克、水1000克,马铃薯,葡萄糖,琼脂,2.所需设备工具手提高压灭菌锅、煤炉或电磁炉、汤锅、试管、棉塞、分装装置,手提高压灭菌锅,试管,橡胶塞,简易分装装置,3.制作步骤,放入汤锅中加入适量清水煮沸15分钟，用纱布过滤，留滤汁备用,马铃薯200克去皮切块（1厘米见方）,滤汁倒入汤锅，先加入17克琼脂，加热搅拌，融化后，再加入20克葡萄糖，融化，用量杯定容至1000毫升,试管分装：将溶液加入试管中，每管加入到1/5处，加盖棉塞,高压灭菌：将分装好的试管放入灭菌锅中灭菌，达到1.05kg/cm2压力时（121摄氏度），保持15-30分钟,摆斜面：将灭好菌的试管取出，按一定倾斜度摆好，带培养基凝固后备用,示意图：,二、原种、栽培种培养基制备1.所需原料（1）主料：木屑、棉籽壳、玉米芯等（2）辅料：麦麸、玉米粉等2.配方（以平菇为例）：（1）木屑78%，麸皮20%，石膏1%，石灰1%。（2）棉籽壳88%，麸皮10%，石灰2%。3、流程：,配料,拌料,装袋（瓶）,灭菌,接种,培养,4、所需设备、材料拌料机、菌种袋（瓶）、装袋机、灭菌设备（高压灭菌、常压灭菌）,5、场地：地面清洁、准备冷却室,拌料机,菌种袋,装袋机,常压锅炉,常压灭菌现场,高压灭菌锅炉,第二部分：接种,一、所需工具、材料,超净工作台、接种箱、接种钩（铲、钯、镊子）、酒精灯、气雾消毒剂（臭氧消毒器）,超净工作台,接种箱,臭氧灭菌器,接种工具,二、无菌操作无菌操作是食用菌制种工作成败的关键，它包括两方面内容，一是制种过程中使用的全部材料是无菌的二是必须采用无菌操作方法(也包括培养条件)两者结合起来，才能保证制种的全部过程是无菌的，才能培养出纯菌种。1.高温灭菌（1）常压蒸汽灭菌（用于菌种灭菌）将灭菌物品(培养料)放在蒸笼内蒸煮，从开锅(100)开始算起连续加热开锅4-12h达到彻底灭菌，个体户或菌种厂自制的灭菌灶，在生产原种、栽培种或栽培菌袋时，均采用此法灭菌，此法简单，适用，成本低。（2）高压蒸汽灭菌（用于菌种灭菌）高压蒸汽灭菌是生物灭菌技术中应用最广，灭菌时间短，效果最佳的灭菌技术，原理是根据蒸汽温度随压力增加而提高，压力越大温度越高的原理。水在封闭的灭菌器中(高压灭菌锅中)，通过加热使灭菌器中的水产生水蒸汽，在排除灭菌器内冷空气后，关闭排气阀，蒸汽不能逸出，增加了灭菌器中的压力，水的沸点或蒸汽的温度随之上升，因而获得了比100更高的温度，达到有效灭菌的目的。一般培养基在高压灭菌器中待压力升到1.05kg/cm2(121)时灭菌40min，也可在1.5kgcm2(126)灭30min，达到彻底灭菌，如灭固体培养料在1.5kgcm2灭菌1-2h即可；高压灭菌器有手提式、立式、卧式等多种型号，热源有电源，煤，煤气，蒸汽等等。,（3）火焰灭菌（用于接种时接种工具灭菌）接种环，接种钩，接种铲镊子等金属器皿可直接在酒精灯火焰上烧灼灭菌，试管口，瓶口也要通过火焰达到灭菌目的，方法简单迅速，灭菌彻底。2.紫外线杀菌（用于接种室、接种箱）波长在2600-2800的紫外线有很强的杀菌能力，电子通过水银蒸汽可产生波长：1357A的紫外线，以此制成的紫外线灯管，杀菌力强而稳定，距被照物体20-30cm照射3-5min，即可杀死细菌的营养体，十几分钟叫杀死细菌的芽孢，紫外线灯管在生产实践中应用较广，用于空气消毒，但穿透力不大，只能用于表面消毒接种室，接种箱，手术室，药厂等均可安装，接种箱安15w，按种室可视大小安30w或100w照射30min即可达到灭菌目的紫外线对眼黏膜，视神经，皮肤等均有杀伤力，故不能在_开着的紫外线灯下工作，必要时需穿防护衣帽，并戴上有色眼镜工作。3，化学药物杀菌(1)甲醛(福尔马林)：40甲醛溶液用于接种箱，接种室，培养室熏蒸消毒，用量6-8mlm3，加热时挥发产生气体对空气杀菌，有两种方法：直接加热熏蒸，关闭门窗，按空间大小称其用量，倒入铁或铝盒中，放在酒精灯上或电炉上加热，挥发出甲醛气体密闭24h，氧化熏蒸：高锰酸钾与甲醛混合熏蒸，因为高锰酸钾是种氧化剂，与甲醛混合时产生氧化还原反应，使甲醛挥发为气体，甲醛与高锰酸钾比例为2：1将甲醛倒入瓷碗中，再按2：1比例加入高锰酸钾，混合后立即产生气体，甲醛熏蒸应在使用前24h进行。甲醛蒸气对眼黏膜，呼吸道有强烈的刺激作用，且有毒，熏蒸后短时间不能入室工作，待甲醛蒸气散消后才能入室工作。,(2)硫磺：常用在按种室，培养室熏蒸，用晕15g、m3，关闭门窗，点燃熏蒸，密闭12h。(3)高锰酸钾：0.1的高锰酸钾，用于T具，器皿和手的消毒。(4)来苏儿(煤酚皂液)：3的来苏儿，用于器皿或室内喷雾消毒。(5)石碳酸：3-5的石碳酸，用于器皿消毒或室内喷雾消毒。(6)新洁尔灭：0.l-0.25的新洁尔灭，用于器皿消毒或室内喷雾消毒。(7)75酒精：接种时用于擦手或瓶口等。(8)石灰：石灰分生石灰和熟石灰两种，熟石灰配成1-3石灰水，用于地面，墙壁消毒，生石灰用于地而墙壁消毒，畦底可撒石灰粉消毒，菌床，菌砖等局部发现杂菌可撒石灰粉消毒。(9)多菌灵或托布津：生料栽培叫用O.1-0.2多菌灵或托布津拌入料中防止杂菌污染。(10)苯菌特：是种高效低毒广谱的内吸杀菌剂，用法同多菌灵。以上消毒药品叫根据情况选用，为避免杂菌产生抗药性，可轮换使用，以提高杀菌效果。,4.无菌室(接种室)的设计与要求无菌室应分里外两间，里间为接种室，面积5-6m2，外间为缓冲问，而积为2-3m2,两间高度均为2-2.5m，过大不易保持无菌状态，房问的地板，墙壁，天棚要平整光滑，便于擦洗消毒，门设拉门，门窗能关严密闭，接种室，缓冲间均应安装紫外线灯，接种室应备有酒精灯，火柴，接种钩，接种铲，剪刀，镊子，75酒精棉球等等缓冲间应备有工作服托鞋，帽子，口罩，消毒药品，喷雾器等等。5.接种箱的设计与要求接种箱是木柜镶玻璃结构，大小不一，一般为100cm70cm50cm，要求严密，操作口要安装套袖，箱上方装15w紫外光灯，两侧设有能开关并且严密的门，以便取放接种物品。接种室、接种箱要保持清洁，使用前进行消毒。消毒方法：(1)熏蒸：用甲醛，硫磺或甲醛与高锰酸钾混合进行熏蒸，按空问大小称其用量，关闭门窗密闭24h，熏蒸完毕，打开门，待甲醛气体扩散后，再入室工作。(2)喷撒：用3来苏儿或5石碳酸向地面喷撒，向空气喷雾以及擦洗桌面进行消毒。(3)超净工怍台：超净工作台是利用多层滤板过滤空气，使操作台上的空气得以净化，是接种的良好设备。操作台安有15w紫外线灯，接种前照射30min，关灯后工作。,6.接种操作在无菌的环境条件下，将优良的菌种移接到灭好菌的培养基中。优良菌种的标准：优良的菌种应该是菌丝浓密洁白，生长均匀，分布一致，有芳香味，无污染。,接种操作,第三部分菌种培养一、培养菌