动物细胞融合和单克隆抗体.pptx

动物细胞融合与单克隆抗体,温故知新,植物体细胞杂交技术,2002年12月30日，一场筹备了10年之久“细胞太空婚礼”将在“神舟”四号飞船上举行，其中一对“新人”是黄花烟草原生质体和革新一号烟草原生质体，在太空微重力条件下，细胞间配对与融合的“亲热举动”顺利完成。,思考：1、如何由烟草细胞制备其原生质体？2、诱导植物原生质体融合的的方法有哪些？3、将杂种细胞培育成杂种植株依据的原理及采用的技术手段分别是什么？,特有诱导方式：灭活的病毒,丧失感染能力,保留抗原活性,“太空婚礼”另一对“新人”是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞。,一、动物细胞融合,动物细胞融合（cellfusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,生物膜的流动性植物细胞的全能性,生物膜的流动性,去除细胞壁,诱导融合形成杂种细胞，通过组培成杂种植株,用胰蛋白酶使细胞分散，诱导细胞融合形成杂种细胞,物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇,获得杂种植株,主要用于制备单克隆抗体,电激聚乙二醇灭活的病毒,1.如何获取普通抗体？有什么特点？,二、单克隆抗体,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,浆细胞,动物体内,抗体,抗原,传统方法制备抗体的特点产量低、纯度低、特异性差,如何大量制备化学性质单一的抗体？,1：浆细胞与抗体之间有什么样的关系？体外培养浆细胞会出现什么现象？,2：哪种细胞是可以无限增殖的？,3：能否使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力集合在一个细胞上？,克隆化培养,大量抗体,科勒,米尔斯坦,荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖,1、抗体的制备过程,1、注射特定的抗原蛋白的目的是什么?,2、杂交细胞（只考虑两两融合）有几种类型？怎样筛选出杂交瘤细胞，每一个杂交瘤细胞有何特点？,3、如何检验杂交细胞是否产生特定抗体？,4、如何大量制备单克隆抗体,请阅读66页积极思维内容，回答下列问题,既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体,？,专一抗体检测呈阳性,多孔细胞培养板,？,克隆化培养专一抗体检测,选择培养基杂交瘤细胞,专一抗体检测杂交瘤细胞,例题如图为单克隆抗体制备流程示意图,（1）单克隆抗体制备技术的基础是_。（2）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是_。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的_，以保证生命活动的正常进行。（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到710个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是_。（4）若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是_,2、单克隆抗体的概念,特异性强、灵敏度高，可大量制备,3、单克隆抗体的优点,用单一的杂交瘤细胞（浆细胞与瘤细胞融合产生）进行克隆化培养，得到的细胞群产生的抗体。,4、单克隆抗体的应用,（1）作为诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等,（2）用于治