复习与测试 (5).ppt

点生物学教学，第一，基因工程别名，操作对象，操作水平，操作环境，本质或原理分别是什么，第二，限制酶的作用，第三，DNA连接酶的作用，第四，携带基因的载体必须具备的条件，第五，DNA连接酶具有连接单链DNA的能力(1)目标基因的获取2)基因表达载体的构建3)将目标基因引入受体细胞4)目标基因的检测和鉴定，第一，目标基因的获取，第一，目标基因的概念：目标基因是人们需要转移或转化的基因，主要是编码蛋白质的基因。 苏云金杆菌的抗虫基因、植物抗病(抗病毒、抗菌)基因、种子贮藏蛋白基因、人类胰岛素基因、干扰素基因等。2，目标基因获取方法：利用目标基因未知序列 PCR技术直接合成目标基因扩增化学方法，已知序列，从基因库中获取目标基因：基因库：包含了某一生物的多种基因的多种DNA片段，储存在导入受体的群体中，每种受体细菌分别包含不同的基因，部分基因库：基因库包含一种生物的部分基因，这种基因库称为部分基因。利用PCR技术增强目标基因。原则：DNA双链复制的原理过程：热分解旋转(90 95)底漆和断链的互补耦合(55 60)DNA聚合酶作用延长(70 75)条件：用游离脱氧核苷酸直接合成了相应的基因。第二，基因表达载体的构建，1，工序：1)用特定限制酶切割质粒，产生一个切口，显示粘性末端。(2)用相同的限制性酶切断目的基因，产生相同的粘性末端。(3)将剪切的目标基因片段插入质粒的切口，放入适当数量的DNA结合酶，形成重组DNA分子(重组质粒)。目的基因与运输载体的结合过程实际上是不同来源的基因重组过程。2，目的：在受体细胞中稳定存在目的基因，能向下一代克隆基因，表达和操作目的基因3，构成：目的基因；启动子终结者；标记基因，启动子，终止者，目标基因，标记基因，标记基因，表达向量模式，第三，将目标基因导入受体细胞-转化，1，转化：目标基因进入受体细胞，在受体细胞内保持稳定的表达过程。常用的受体细胞：大肠杆菌，枯草杆菌，土壤亚基帕，酵母，动植物细胞等。以将目标基因注入受体细胞的原理，参考细菌或病毒感染细胞的途径。植物细胞农杆菌转化(感染双子叶植物和裸植物，对大多数子叶植物没有传染性)基因枪法(常用于子叶植物)花粉管途径法(转基因抗虫棉)动物细胞微注射技术(“超级小鼠”)，受体细胞：受精卵，目的基因对微生物细胞第二步是将重组表达载体DNA分子溶解在缓冲液中，与易感细胞混合，在特定温度下从易感细胞中吸收DNA分子，促进转基因过程。第三阶段目的基因在受体细胞内根据繁殖进行克隆，细菌繁殖的速度很快，因此可以在很短的时间内获得很多目的基因。第四，目标基因的检测和鉴定，第一，检测和鉴定目的，目标基因进入受体细胞后是否能稳定和表达其遗传特性。2，水平：检测目的基因是否插入转基因生物的染色体DNA，分子水平检测：检测目的基因是否转录mRNA，检测目的基因是否翻译成蛋白质，个体生物学水平鉴定，目标基因是否插入检测原理：分子杂交技术过程：提取转基因生物的基因组DNA现代生物技术，将苏云金杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，检测实验成功与否的最方便的方法是棉花植物上的抗虫基因b .抗虫基因产品c .新核d .相应性状2。转基因动物转基因受体细胞是()A .受精卵b .精子细胞c .卵子D .体细胞D . A .每瓶练习，3 .人糖蛋白必须