分解纤维素的微生物的分离推荐PPT精选文档

1,课题3分解纤维素的微生物的分离,2,一、基础知识,1.纤维素,纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。,（一）纤维素与纤维素酶,3,纤维素：棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物；木材、作物秸秆等也富含纤维素。,植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布植物的根、茎、叶中。,4,土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。,5,2.纤维素酶纤维素酶是一种，一般认为它，即，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,一、基础知识,复合酶,至少包括三种组分,C1酶(外切酶)、,和葡萄糖苷酶,CX酶(内切酶),6,在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；,思考1实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？,滤纸崩溃法,7,（二）、纤维素分解菌的筛选,阅读课本课本28页相关部分，回答下列问题：,1.纤维素分解菌的筛选方法,2.纤维素分解菌的筛选方法的原理,阅读课本课本28页相关部分，回答下列问题：,8,（二）、纤维素分解菌的筛选,1、筛选纤维素分解菌的方法_。该方法可以通过_反应直接筛选。,刚果红染色法,颜色,2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被_分解后，红色复合物无法形成，出现以_为中心的_，可以通过_来筛选纤维素分解菌。,红色复合物,纤维素酶,纤维素分解菌,透明圈,是否产生透明圈,9,可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,10,练一练：,1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是,A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,11,2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是,A.刚果红能与纤维素形成红色复合物B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌,12,(三)、实验设计,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别培养基,挑选菌落,什么样的环境取样?,培养的目的?选择培养基的特点?,挑选什么样的菌落?,鉴别培养基的特点?如何鉴别?,根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找,目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。,刚果红染色法,13,技巧归纳寻找纤维素分解菌的方法1.在富含纤维素的环境中如腐殖质中寻找。2.人工设置富含纤维素的环境。将富含纤维素的物质，如滤纸等埋在土壤中。经过30d左右，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解酶。,14,1、纤维素分解菌选择培养基属于_（固体、液体）培养基，原因是_,【资料二】选择培养,阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题：,液体,没有添加琼脂,2、该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是_,具有,以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；,15,若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将_改为_。,3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？,葡萄糖,纤维素粉,提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。,16,说明：分析“纤维素分解菌的选择培养基配方”可知，该配方中的酵母膏也能够提供少量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中生长繁殖。只不过，由于酵母膏的含量极少，因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量繁殖。,17,操作方法：,将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养12天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养,18,在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。,为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？,19,【资料三】刚果红染色法,方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应,方法二：在倒平板时就加入刚果红,20,鉴别纤维素分解菌的培养基,(水溶性羧甲基纤维素钠),21,颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用,操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便，不存在菌落混杂问题,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,思考：这两种方法各有哪些优点与不足,22,挑选产生透明圈的菌落,挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C370C培养，可获得纯培养。,23,思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？,本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。,24,四、结果分析与评价,1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。,25,为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_实验，纤维素酶的发酵方法有_发酵和_发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的_含量进行定量测定。,发酵产纤维素酶,液体,固体,葡萄糖,五、课题延伸,26,分解纤维素的微生物的分离,纤维素酶,种类、作用、催化,刚果红染色,筛选原理,实验设计,土壤取样,选择培养,涂布培养,纯化培养,前置染色法后置染色法,富含纤维素土壤,增大分解菌含量,染色鉴别,分离出分解菌,课堂总结,27,1.纤维素、纤维素酶、控制纤维素酶合成的基因的基本单位依次为葡萄糖、氨基酸、脱氧核苷酸。2.纤