GB 22943-2008蜂蜜中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法-国标

ICs 67.050【 04中 华 人民 共 和国 国 家 标 准GB/T2294-2008喁蜞蜂蜜中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determination of trimethoprim residues in honey-LC-MS-MS method2008-12-31发布2009-05-01实施中华人民共和国国家质量监督捡验检儇 疒垦 发布中 国 国 家 标 准 化 管 理GB/T229432008目 刂 舀本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准 由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位 :中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局 。本标准主要起草人 :曹彦忠 、 贾光群 、 杨志伟 、 石玉秋 、 孙海侠 、 庞国芳。GB/T22943-2008蜂蜜中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定 了蜂蜜中三 甲氧苄氨嘧啶残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 。本标准适用于蜂蜜中三 甲氧苄氨嘧啶残留量的测定 。本标准的方法检 出限为2.0u g /k g 。2 规范性引用文件下列文仵 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件 ,其 随后所有的修改单(不 包括勘误 的内容)或 修订版均不适用于本标准 ,然而 ,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件 的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件 ,其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1 测量 方 法 与 结 果 的 准 确 度 (正 确 度 与 精 密 度 ) 第1部分 :总 则 与 定 义(GB/T6379.12004,ISO5725:1994,IDT)GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分 :确 定标准测量方法重复性 与 再 现 性 的 基 本 方 法 ( G B / T 6 3 7 9 . 2 - 2 0 0 4 , I S O 5 7 2 5 2 : 1 9 9 4 , I D T )G B / T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 ( G B / T 6 6 8 2 0 8 , I S o 3 6 9 6 : 1 9 8 7 , M O D )3 原理蜂 蜜 中残 留的三 甲氧苄氨嘧啶用磷酸盐缓 冲溶 液 (p H=9)提取 ,过 滤后 ,经 0a s i s HLBl )柱或相 当的固相萃取柱净化 ,用 甲醇洗脱并蒸干 ,残 渣用流动相溶解 ,过0.2u m 滤膜后 ,样 品溶液供 液相色谱-串联质谱 仪测定 ,外 标 法定 量 。4 试剂和材料4 . 1 水: G B / T 6 6 8 2 , 一级。4.2 甲醇 :色谱纯 。4.3 乙腈 :色谱纯 。4 . 4 磷酸氢二钾( K 2 H P O 4 3 H 2 O ) : 优级纯。4.5 磷酸二氢钾 :优 级纯 。4.6 氢氧化钠 :优 级 纯 。4.7 甲酸 :优 级纯 。4 . 8 2 。O mol/ L 氢氧化钠: 称取8 . 0 g氢氧化钠( 4 . 6 ) , 定容至1 0 0 mL 。4 . 9 0 . 1 % 甲酸溶液: 吸取1 . 0 mI 甲酸( 4 . 7 ) , 用水稀释至1 0 0 0 mL 。4 . 1 0 淋洗液: 甲醇溶液( 2 + 3 ) 。量取4 0 mL 甲醇( 4 . 2 ) 与6 0 mL 水混合。4 . 1 1 0 . 2 mol/ L 磷酸盐缓冲溶液: 称取焖. 8 6 g磷酸氢二钾( 4 . 4 ) 和1 . 0 5 g磷酸二氢钾( 4 . 5 ) , 放人1 0 0 0 mL 烧杯中, 加入8 0 0 mI 水溶解, 用氢氧化钠( 姓. 6 ) 调至pH 值为9 . 0 , 再用水定容至1 0 0 0 mL 。4 . 1 2 流动相: 乙腈峋. 1 % 甲酸溶液( 7 + 1 3 ) 。l ) Oa s i s H1B固相萃取柱是Wa t e r s 公司产 品的商品名称 ,给 出这一信息是 为 了方便本标 准的使 用者 ,并 不是 表示对该产 品的认可 。如果其他等效产品其有相 同的效果 ,则 可使用这些等效产 品。GB/T22943-20084.13 标准物质 :三 甲氧苄氨嘧啶 (CAS:73870-5),纯度99%。4.14 0.1m g /m L标准储 备溶 液 :准 确称取适 量 的三 甲氧苄氨 嘧啶标 准物质 (4.13),用甲醇配 成0.1m g /m L的标准储备溶液 。标准储各溶液在4保存 。4.15 标准工作溶液 :吸取标准储备溶液(4.14)0。l m L移至10m L容量瓶 中,用 甲醇稀释至刻度 。该溶液在4保存 。4.16 基质标准工作溶液 :吸 取不 同体积标准工作溶液 (4.15),用空 白样 品提取液配成2.0n g /m L、5 . 0 ng/ mL 、1 0 . 0 ng/ mL 、. O ng/ mL 、5 0 . 0 ng/ mL 不同浓度的基质标准工作溶液。当天配制。4 . 1 7 0 a s i s H L B 固相 萃 取 柱 或 相 当 者: 5 0 0 m g , 6 m L 。使 用 前 依 次 用5 m L 甲醇 和1 0 m L 水预 处 理,保持柱体湿润 。4 . 1 8 滤膜: 0 . 2 um。5 仪器5.1 液相色谱-串联 四极杆质谱仪 :配有电喷雾离子源。5 . 2 分析天平: 感量0 . l mg和0 . O l g。5.3 氮气浓缩仪 。5.4 液体混匀器 。5.5 固相萃取装置 。5 . 6 贮液器: 5 0 mL 。5.7 真空泵 :真空度应达到80k Pa 。5.8 p H计。5 . 9 吹干管: 1 0 mL 。6 试样的制备与保存6.1 试样的制备对无结晶的实验室样品 ,将其搅拌均匀 。对有结晶的样品 ,在密闭情况下 ,置于不超过60的水浴中温热 ,振荡 ,待样 品全部融化后搅匀 ,冷却至室温 。分出0.5k g 作为试样 。制各好的试样置于样品瓶中,密封 ,并做上标记 。6.2 试样保存将试样于常温下保存 。7 测定步骤7.1 提取称取2g 试样 ,精确至0.01g 。置于150m I三角瓶 中,加入25m L磷酸盐缓 冲溶液 (4.11),于液体混匀器(5.4)上快速混匀l m i n ,使试样完全溶解 。7.2 净化将塞有玻璃棉 的玻璃贮液器 (5.6)连到Oa s i s HLB田相萃取柱 (4.17)上,把样液倒人玻璃贮液器中,调节流速小于3m L/m i n ,使样液通过Oa s i s HLB固相萃取柱 ,待样液完全流出后 ,依次用5m L水和5m L淋洗液(4.10)洗柱 ,弃去全部流出液。减压抽干 90m i n ,然后用5m L甲醇洗脱 ,收集洗脱液于10m L吹干管中。用氮气浓缩仪于50吹干 。准确加人1.0m L流动相 (4.12)溶解残渣 ,过 0.2u m滤膜后 ,供液相色谱-串联质谱仪测定 。按上述操作步骤 ,制各用于配制系列基质标准I作 溶液的空 白样品提取液。2GB/T22943-20087.3 测定 条件7.3.1 液相 色谱 参考条件a ) 色谱柱: A t l a n t i s C I : , 3 u m , 1 5 0 m m 2 . 1 m m ( 内径) 或相当 者;b ) 流动相 :乙腈0.1%甲酸溶液(7+13);c) 流速: 0 . 2 mL / min;d ) 柱温 :30;e) 进样量: zO uL 。7.3.2 质谱参考条件a ) 离子源 :电喷雾离子源 ;b ) 扫描方式 :正离子扫描 ;c ) 检测方式 :多反应监测 ;d ) 电喷雾 电压 :5500V;e ) 雾化气压力: 0 . 0 7 6 M P a ;D 气帘气压力: 0 . 0 6 9 M P a ;g ) 辅助气流速 :6L/m i n ;h ) 离子源温度 :450;i ) 定性离子对 、 定量离子对 、 碰撞气能量和去簇 电压见表1。7.4 液相色谱-串联质谱测定7.4.1 定性测定被测组分选择1个母离子 ,2个 以上子离子 ,在 相 同的试验条件下 ,样 品中待测物质 的保 留时间与标准溶液中对应 的保 留时间偏差在2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行 比较 ,若偏差不超过表2规定的范围,则可判定样品中存在对应的待测物。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表 示7.4.2 定量测定用标准工作溶液 (4.16)分别进样 ,以标准峰面积为纵坐标 ,以标准工作溶液浓度为横 坐标 ,绘 制标准工作 曲线 。用标准工作曲线对样品进行定量 ,样 品溶液中三甲氧苄氨嘧啶的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下 ,三 甲氧苄氨嘧啶的参考保 留时问为2.39m i n 。三 甲氧苄氨嘧啶的标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录中的图A.1。本方法的添加平均 回收率数据参见附录B中的表B.1。7.5 平行试验按 以上步骤 ,对 l r ,l 试 样进行平行试验测定 。7.6 空白试验除不称取 试样外 ,均按上述步骤进行。表1 定性离子对 、 定量 离子对 、 碰撞气能量和去簇 电压化合物中文名称化合物英文名称定性离子对(9t /z )定量离子对 (,J/z )碰撞气 能量/V去簇 电压/V三甲氧苄氨嘧啶trimethoprim291/230291/123291/275291/2303 54 03 5相对离子丰度)5020(5010(2010允许最大偏差 2025 30 50GB/T22943-20088 结果计算蜂蜜中三 甲氧苄氨嘧啶残留量 的测定结果按式(1)计 算 。x= c券托黠 ( 1 )式 中:X试样 中被测组分残 留量 ,单位为微克每千克(u g /k g );c 从标准工作 曲线上得到的被测组分溶液浓度 ,单位为纳克每毫升(n g /m L);V样品溶液定容体积 ,单位为毫升(m L);勿样品溶液所代表试样的质量 ,单位为克(g )。计算结果应扣除空 白值 。9 精密度9.1 一般规定本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定 的,其 重复性和再现性 的值是以95%的可信度来计算 。9.2 重复性在重复性试验条件下 ,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限/,蜂蜜中三 甲氧苄氨嘧啶添加浓度范围及重复性方程见表3。表3 添加浓度范围及重复性和再现性方程 单位为微克每干克如果差值超过重复性限r ,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 。9.3 再现性在再现性试验条件下 ,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,蜂蜜中三甲氧苄氨嘧啶的添加浓度范围及再现性方程见表3。化合物名称添加浓度范 围重复性限再现性 限R三甲氧苄氨嘧啶2.0 50.0E r:O.878 0 lg m-1.212 9 lg R:1.311 9 lg m-0.978 7注 :仞 为两次测定值 的算术平均值 。GB/T229432008附 录 A(资 料性 附录)标准物质 多反应 监测 (MRM)色谱 图三 甲氧苄 氨 嘧啶标 准物质多反应监测 (MRM)色谱 图见 图A.1。5 Oe 4走 酉 4Oe 4u叠3 0e 42 0e 41.Oe 40 0图A.1 三甲氧苄氨嘧啶标 准物质 多反应 监测 (MRM)色谱 图0GB/T229432008附 录 B(资 料性 附录)回 收 率本 方法 中三 甲氧苄 氨嘧啶添加浓度及平均 回收率 的试验数据见表B.1。表B.1 三甲氧苄氨嘧 啶添加 浓度及平均回收率的试验数 据化合物名称溜孓力 口 冫 &涯 窆 /(FIg /k g )平均 回收率/%三甲氧苄氨嘧啶2 . 05 . 010.050.0104.199.0101.8104.3oo丨淌寸o卜臼0GB/T 229432008打 印 日期: 09年 4月 28日中华人民共和国国家标准蜂 蜜中三甲氧苄氨嘧啶残 留量 的测定液相色谱串联质谱法G B / T 2 2 9 4 3 2 0 0 8中 国 标 淮 出 版 社 出 版 发 行北京复兴 门外三里河北街16号邮