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文档简介
流式细胞术的基本原理和应用,漆冬梅、流式细胞仪(flowcytometer )是集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机和细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术于一体的新型高科技仪器。 利用台式机、临床型、大型机、科研型、当前最新型流式细胞仪、流式细胞仪,对处于快速直线流动状态的单列细胞和生物粒子进行多参数、快速定性、定量分析和筛选的技术。 流动室和液流系统、光源和光学系统、信号采集和信号转换系统、计算机和分析系统、分选系统、流式细胞仪的基本结构、流式细胞仪的液流系统、激光器、流动室、检测点、流式细胞仪的光学系统、光电转换装置、流式细胞仪的光信号、1 .色散侧向角色散(SideScatter,SSC)90色散与细胞内颗粒结构的质量基本呈直线关系。 物理属性:为区别不同细胞群的基本形态差异,可利用FSC/SSC对混合细胞进行分组,R1粒细胞群R2淋巴细胞群R3单细胞群R4红细胞分裂碎片和少量血小板,图注:外周血白细胞群的情况。 由于淋巴细胞体积小,细胞内颗粒少,其分布在FSC、SSC均小的区域,即R2区域的颗粒体积大,细胞内颗粒多,因此其分布在FSC、SSC最大的区域,即R1区的单核细胞体积大,细胞内颗粒少于颗粒,淋巴细胞多2 .与荧光信号荧光素特异抗体结合的荧光素吸收激光能量,产生能量转移,通过特定波长的光学元件将所产生的荧光信号传送到信号收集器(PMT ),形成信号脉冲。 每个颜色的荧光占用特定波长的光电检测器,即荧光通道。 化学属性,荧光标记抗体与细胞的结合原理示意图,常用抗体标记荧光染料的特性及其应用,BDLSR,4种激光355nm405nm488nm633nm,最高10色以上的多色荧光分析, 流式细胞术应用细胞表面分子细胞内或细胞核内抗原细胞凋亡DNA含量的检测和细胞周期的分析细胞增殖细胞毒的检测和可溶性蛋白分子报告基因的分析、样品处理、全血直接标记法溶血:红细胞裂解液膜表面抗原染色:孵化温度、时间、对照固定和透膜:固定剂、透膜剂细胞内抗原染色:透膜机检测: PBS200-500l 如果不能马上检查的话,
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