血涂片的制作和血细胞的观察-计数-血型鉴定.ppt

实验三血涂膜的制作和血细胞的观察、计数、血型鉴定、普通生物学 、实验目的、掌握血涂膜的制作，掌握各种血细胞的结构特征，掌握人体微量采血和血细胞计数板细胞直接镜检测计数方法的ABO血型鉴定方法、材料和用品、材料人血液和兔血液的主要用品生物显微镜、采血针、 双凹载玻片血细胞计数板红细胞稀释液(氯化钠、硫酸钠、氯化高汞)白细胞稀释液(冰醋酸、龙胆紫)标准a、b血清瑞氏(Wright )染色液，实验内容和方法，(1)abo血型检定，1 .实验原理红细胞膜有血型糖蛋白， ABO血型(也称为抗原)由红细胞表面抗原决定，血型根据红细胞是否有a抗原和/或b抗原而分为a型、b型、AB型和o型4种。 血清中含有相应的特异性抗体称为凝集素。 凝集原与相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集，引起红细胞破裂，产生溶血。 ABO血型检定的原理是利用红细胞凝集试验，将测定对象的血液分别与含有a抗体和b抗体的标准血清混合，观察凝集现象是否发生，通过判断测定对象的血液红细胞中存在哪种抗原来决定测定对象的血型。 ABO血型分类，ABO血型正反定型结果，(1)ABO血型检定，2 .血型检定方法标志照片：左上角为a，右上角为b。 将标准a血清和标准b血清分别一滴一滴地吸入双凹载玻片的左端和右端。 采血针刺入左手无名指尖，等待血液流出后，用两根细管吸取血液，分别放入玻璃片左右血清，用牙膏搅拌，将标准血清与血液混合。 (不要把毛细血管和牙签混在一起！ )拿着玻璃板旋转数圈，旋转时将玻璃板保持在水平面上，室温下放置5min，观察结果。 肉眼观察：外观略呈花边状或锯齿状，呈沉淀状时，凝聚较多，血滴处于均匀状态，边缘整齐则不凝聚较多。 此外，低倍镜下观察：低倍镜下观察到红细胞凝集块时，或者还有少数游离细胞时，如果凝集现象即红细胞全部为游离状态，则不凝集。 根据镜子下有无凝聚现象来判定血型。 (2)血涂片的制作和血细胞的观察，1 .血涂片的制作是用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血针刺入指尖，从采血针的孔中挤出绿豆大小的血滴，用清洁的玻璃片的一端轻轻地接触血滴，使血滴附着在玻璃片上(如果不注意不接触皮肤，血就会落到玻璃片上) 用左手拿住其片的两端，立即用右手拿住另一片玻璃片的一端，用血滴从前到后接触左手的载玻片，使两片载玻片成约45角轻轻移动，使血滴成一条直线后，从前到后按压使均匀的薄片涂膜在空气中干燥后，放置在染色架上，滴下瑞氏染色液用染色液包复1分钟后，将等量的缓冲液加入染色液中浸染约58分钟时，涂膜表面呈古铜色用蒸馏水迅速冲洗，涂膜变成粉红色后自然晾干，(二)血涂片的制作和血细胞的观察，二.血细胞观察制作的良好血涂片的厚度适当，血膜分布均匀，针脚均匀选择厚度薄的适当部位用显微镜观察。 首先用低倍镜观察全片，调查涂膜染色、细胞分布情况，用油镜观察(1)红细胞数最多、体积最小、圆、均匀分布，呈红色圆盘状，边缘厚、着色深、中央薄、着色浅、无核、细胞器，细胞质内充满血红蛋白。 (2)白细胞数比红细胞数少，但细胞大，细胞核明显，易与红细胞区别。 中性粒细胞是白细胞的多种，约占白细胞总数的50-70%。 体积大于红细胞，主要特征是细胞质中特殊粒子小，分布均匀，淡紫红色。 细胞核为深紫红色，一般分为35叶，叶间用染色质丝连接。核分叶的多少与该细胞年龄有关，核为棒状则是中性粒细胞的幼稚型。 嗜酸性粒细胞略大于嗜酸性粒细胞，数量少，约占7%以下。 核子经常分成两片叶子，呈紫蓝色。 主要特征是细胞质内充满粗大、圆形粒子，颜色为红色或橙色。 嗜碱性粒细胞的数量很少，约占1%以下。 在一般的血涂膜中找不到，体积比上述两种白细胞略小。 细胞质中分散着大小不同的浓紫蓝粒子。 细胞核的形状不定，圆形和分叶也染成紫色，染色稍浅，一般被粒子复盖，形状不清楚。 淋巴细胞数量较多，约占20%-40%，可见中、小型、淋巴细胞。 其中，小淋巴细胞最多，略大于红细胞。 核又大又圆，几乎占据了整个细胞，染成深蓝紫色。 细胞质极少，只有细胞核一侧出现线状天蓝色和浅蓝色的细胞质。 中淋巴细胞大于红细胞，细胞质小的淋巴细胞略多，着色浅。 核圆形和卵圆形位于细胞中间，染成深蓝紫色。 单核细胞数量少，约占2%-8%，是细胞中体积最大的一种，细胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞侧，着色比淋巴细胞浅。 血小板为不规则形状的细胞小体，周围为淡蓝色，中央有细紫色颗粒，常组织成群分布于红细胞之间。 高倍镜下一般只能看到紫色粒子堆，油镜下可以看到粒子周围明亮的细胞质部分。 (3)血细胞计数，1 .血细胞计数板的结构计数板是特殊的长方形厚玻璃板，板面的中央部有4条直沟，内侧的两沟的中央部有横沟，中央部有分隔成2个长方形的平台。 载物台比玻璃板整体的平面低0.1mm，载置玻璃盖时，载物台与玻璃盖之间的距离(高度)为0.1mm。 平台的中心部分别以3mm的长度、3mm的宽度正确分为9个格子，称为计数室，各格子的面积为1mm3，体积为0.1mm3。 方块大方格，分别分为16方格，适合白血球数。 中央方格用双线分成25个方格，各方格的面积为0.04mm3，体积为0.004mm3。 各中方眼各分为16个小方眼，适用于红细胞的计数。2 .血球计数、(1)兔血稀释1.5ml塑料离心管：将0.38ml白血球稀释液放入小试管的兔血5ml塑料离心管：将3.98ml红血球稀释液0.02ml兔血放入试管底部，在滴入计数室前摇动试管，摇动1-2min。 把玻璃盖放在计数板的正中间，吸取用白小号的Tip振动的稀释血液，使少量的血液滴到玻璃盖边的玻璃板上，通过毛细管现象使稀释血液自动流入计数室内。 滴水过多时，溢出流入两侧的深槽，盖玻璃浮起，改变体积，影响计数结果，因此需要用滤纸片吸出多馀的溶液，深槽中最好没有溶液。 滴下的溶液过少的话，容易多次填充液体变成气泡，所以要清洗计数室，干燥后重新制作。 红细胞和白细胞的计数分别使用计数室。 将血液稀释液滴入计数室后静置2-3min，用低倍显微镜计数。 2 .血细胞计数；(2)在计数白细胞的情况下，数四边形的四个大眼睛的白细胞总数计数红细胞；在计数数中央大眼睛的四角的四个中方眼睛和中央的一个中方眼睛(共计五个中方眼睛)的红细胞总数的情况下，沿着一定的路径，按照“不计数而不计数”的原则对跨越刻度的血细胞进行计数。 计算白细胞时，如发现各大格白细胞数不同8个以上，计算红细胞时，若各中方眼的红细胞数不同20个以上，则表示血细胞分布不均匀，应摇动稀释液再次计算。2 .血球计数，(3)计算细胞数=相当于计数板方格内细胞数稀释倍数1/计数室总体积白血球数=第4方格内数时白血球总数的20倍1/110.14mm3，即mm3血中的白血球总数红血球数=中央方格中的第5方格内数时红血球总数的200倍1/0.20.15mm3，即10倍000 mm3血中红细胞的总数是现在临床上血细胞计数所采用的共同单位，将以上得到的血细胞数换算成各血细胞的血中数，2 .血细胞计数，(4