培养基的制备与灭菌实验报告

陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告标题培养基的制备及杀菌声明有委学号专业生物学配置/楼层指导教师学习中心培养基的制备及杀菌一、目标要求1.掌握微生物实验室常用的玻璃器皿的清洗和包扎方法。掌握徽章的组成原理和方法。掌握蒸压操作方法和注意事项。二、基本原理牛肉奶油蛋白胨培养基：应用最广泛，最常见的细菌基础培养基，有时也称为一般培养基。这个培养基包含了一般细胞生长和繁殖所需的最基本的营养素，因此可以用于细菌的生长和繁殖。蒸压：主要通过变暖使蛋白质变质，杀死微生物的效果。将灭菌中的东西密封，放在加压灭菌锅里加热，在灭菌锅里烧水，产生蒸汽。蒸汽将锅里的冷空气从排气阀中抽出，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增加，沸点升高，达到100以上的温度，菌体蛋白质就会凝固变质，达到灭菌目的。三、实验材料1.药物：牛肉奶油、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L用NaOH和HCl溶液。2.器具及玻璃器具：秤、高压蒸汽灭菌锅、吸管、试管、燃烧器、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3.其他项目：药勺、计量纸、pH试卷、记号笔、棉等。四、程序(a)玻璃产品的清洗和包装1.玻璃器皿洗涤玻璃器皿使用前必须洗干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸泡在含有洗涤剂的水中。用刷子擦拭后，用自来水和蒸馏水冲洗。吸管浸入含有洗涤剂的水中，用自来水和蒸馏水冲洗。把干净的玻璃制品放进烤箱烘干后准备。灭菌前玻璃制品包装(1)培养皿的绷带：盘子由一个底部组成，可以用报纸包装几个盘子，也可以直接放在特殊的铁皮圆筒里消毒。包装的培养皿只有灭菌后才能使用。(2)吸管的绷带：在吸管顶部缝上一小片棉花(不使用脱脂)，以避免外部和口腔的杂菌进入管子，防止细菌进入细菌液等吸入口。(。放入这个小棉花，喷嘴约0.5厘米，面本身长度约1 1.5厘米。插棉花的时候。周围有笔直的夹子，一些棉花可以钉在管球上。棉要塞绷得紧紧的，兜风可以通风，不滑倒棉花是优先的。先把报纸裁剪成宽5厘米左右的长纸条，然后将已经包好棉花的吸管端折成长报纸一端约45 的角度，折叠纸条，用左手抓住吸管，如果有手的话，请紧紧按住吸管。从桌面向前搓，螺旋缠绕。上残留纸条，折叠结，准备灭菌。(b)液体和固体培养基的制备准备液体徽章(1)计量(假定准备1000ml徽章)3.0g牛肉奶油，10.0 g蛋白胨，5.0gNaCl在烧杯(或1000ml尺度搪瓷杯)上完全按照配方比例。牛肉奶油放在小烧杯或表面碟子等，用热水融化，然后倒入烧杯里。(2)融化加入比这个烧杯需要的量少的水(约700毫升)，用波峰搅拌好，然后在石棉网上加热融化后，将药完全溶解后所需的总体积(1000毫升)补充水。制作固体培养基时，琼脂释放溶解的药物，加热融化，然后补充失去的水分。(3) pH调整pH调整：徽章的pH值通常用PH测试条测量。用剪刀剪下pH测试条片，然后用镊子夹起pH测试条，查看中间pH范围(如偏酸或部分碱)时，可以用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行控制。控制PH时，应添加一滴NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基的组成。将pH测试条插入并搅拌到7.4-7.6。而是调整为1 mol/lhcl。固体培养基的制备制造固体培养基时，应加热并煮沸已配好的液体培养基，然后添加好的琼脂(1.5-2%)进来用圆珠笔继续搅拌，以免地板烧焦。持续加热，直到整个琼脂融化，最终因蒸发失去水分。(c)徽章的装扮根据需要分发试管或三角瓶中培养的培养基，但保管时注意不要污染喷嘴或瓶口。如果不小心，当徽章污染喷嘴或喷嘴时，可以用钳子夹住小面具，擦壶嘴或壶嘴的徽章，以去除面具。1.试管装扮拿一个玻璃漏斗，铺在铁架上，在漏斗下连接橡胶管，将橡胶管底部与另一个玻璃管连接，在橡胶管中央添加弹簧夹。分放时，用左手抓住空试管的中间，将漏斗下的玻璃管放入试管，用右手拇指和食指打开弹簧夹，用中指和无名指拧紧玻璃管，使培养基直接进入试管。试管培养基中容纳的量取决于试管大小和需要，如果试管大小为15150毫米，最好将液体培养基放在试管高度的四分之一左侧。分离固体或半固体培养基时，应在琼脂完全溶解后热时在试管中分发。用于制作坡度的固体培养基的化妆量为管高的1/5(约3-4毫米)，半固体培养基的化妆量为管高的1/3为宜。2.三角瓶装扮图8-2卸下徽章振动培养微生物时，可以在250 m1三角瓶上添加50 m1液体培养基。用于创建时平板培养基在250 m1三角瓶中加入150ml培养基，加入3g琼脂粉(计算2%)，可作为灭菌过程中琼脂粉同时熔化的方式使用。(d)棉塞生产和试管、三角瓶绷带要培养良好的空气性微生物，在提供良好的通风条件的同时，为了防止杂菌污染，必须对通过试管或三角瓶的空气进行事先过滤。通常的方法是在试管和三角瓶中添加棉塞。试管棉塞生产制作棉塞的时候，要选择大小和厚度适当的一个普通棉，展开在左手拇指和食指的搭扣做成的团孔里，用右手食指从中央的挤压槽中挤压棉花制成，然后直接推入试管或三角瓶。可以借用玻璃棒夹住，也可以用折叠拳法做棉签。制作的棉塞应紧贴管子壁，防止外部微生物沿缝隙侵入，棉塞过紧或密封松后，搬运管最好不要脱落。棉花塞的三分之二在试管里，三分之一在试管外。有时，硅塞代替棉花塞直接复盖在试管口上。安装徽章，将镶有棉塞或硅胶的试管捆成束，在外面加牛皮纸。徽章名称和准备日期，使用灭菌。2.用三角瓶棉签制作通常在棉签上外包纱布，戴在瓶口上。为了液体振荡培养而增加通风，有时用8层纱布代替语料库包裹瓶口，现在用硅胶插头直接复盖瓶口。在8层纱布或硅胶复盖的三角形瓶盖上填充徽章，裹上用实线捆绑的牛皮纸，灭菌。(e)徽章的杀菌以上培养基为0.103MPa，l21，20min高压蒸汽灭菌。灭菌过程：1.烧水：最好先拿出里面的锅，在外面的锅里放入适量的水，使蛇管与三角形搁板平，以免水面加热。检查水位，添加太少的水，不要忘了灭菌锅会着火，发生裂纹事故。2.装载：放回内部锅里，装上正在灭菌的物品。注意不要太咸，以免妨碍蒸汽流通，影响灭菌效果。装有徽章的容器不要液体溢出，三角瓶和试管口端都不要接触桶壁，以防止冷凝液弄湿用绷带包裹的纸，防止其通过插头。3.将连接到盖子和排气口的排气软管放入内部锅的排气罐中，纠正锅盖上方，对准螺柱，对称地同时转动两个相反的螺栓，拧紧螺栓，防止泄漏，打开排气阀。4.排气：打开电源加热灭菌锅，烧水，让锅里的冷空气和水蒸气一起排出。排出的气流很强，有嘘嘘的时候，一般认为锅里的空气沸腾沸腾后大约需要5分钟。5.助推器：冷空气完全排出后，关闭排气阀，继续加热，风扇内的压力开始增加。6.压缩：压力表指针达到所需压力时，控制电源、开始计时和保持压力所需的时间。在本实验中使用0.1Mpa，121.5，20分钟灭菌。杀菌的主要因素不是压力，而是温度，所以锅里的冷气必须完全排出，才能关闭排放阀，保持所需的压力。7.巴克：到了灭菌所需的时间，切断电源，使灭菌锅温度自然下降，压力计的压力下降到“0”，打开排气阀，排出剩下的蒸汽，打开螺栓，打开盖子，取出灭菌物品，把剩下的水倒进锅里。压力必须降到“0”，才能打开排气阀，打开盖子。否则，锅内的压力会突然下降，容器内的培养基或试剂可能因内部和外部的压力不平衡而出现在容器外，污染瓶盖，甚至烧伤的工人。(VI)斜坡和板的生产1.斜面制作消毒含有琼脂培养基的试管后，放在餐具或保杆上，以适当的倾斜凝固，然后倾斜。建议坡度长度不要超过试管长度l/2。制造反单体或固体深层培养基时，灭菌后要垂直凝固。2.平板制作将三角瓶或试管中杀菌的琼脂培养基融化，然后倒入50 杀菌的培养皿。温度太高，盘子的盖子上凝结的水太多。温度低于50 时，培养基容易凝固，不能做平板。必须在火边制作分流器。左手用盘子，