第七讲--芳胺类药物分析PPT课件

.,1,第七章芳香胺类分析,.,2,基本要求,一、掌握芳胺类药物的鉴别试验方法和含量测定的亚硝酸钠滴定法。二、熟悉芳胺类药物的特殊杂质检查和含量测定的非水滴定法和分光光度法；熟悉苯乙胺类药物的鉴别、检查和含量测定方法；三、了解本类药物的结构和性质。,.,3,R1HN,C,O,OR2,对氨基苯甲酸酯结构通式,第一节芳胺类药物的分析,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要性质,.,4,H2N,COOC2H5,苯佐卡因,H2N,COOCH2CH2N(C2H5)2,盐酸普鲁卡因,HCl,CH3(CH2)2NH,COOCH2CH2N(C2H5)2,HCl,盐酸丁卡因,.,5,结构与分析方法芳伯氨基，显芳伯氨基特性。脂烃胺侧链，游离碱多为碱性油状液体或固体，与生物碱沉淀剂反应。有酯键（或酰氨键），易水解，尤其受碱或光、热的影响能促进水解。水解产物限量控制。,.,6,酰胺类药物结构通式,R1,R3,R4,NH,C,O,R2,二、酰胺类药物的基本结构与主要性质,.,7,HO,NHCOCH3,对乙酰氨基酚,CH3COHN,S,O,O,NHCOCH3,醋氨苯砜,H3C,CH3,NHCOCH2N(C2H5)2,HClH2O,NHCO,N,CH3,CH3,C4H9,HCl,盐酸利多卡因,盐酸布比卡因,.,8,结构与分析方法酰氨结构，可水解为芳伯氨基，重氮化偶合。空间位阻影响水解。有酚羟基或水解产生酚羟基，可与三氯化铁显色。脂烃胺侧链，显弱碱性，与生物碱沉淀剂或重金属离子反应。,.,9,三、鉴别试验,（一）重氮化-偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。,Ar-NH2,HCl,NaNO2,重氮盐,OH-,-萘酚,橙黄猩红色,.,10,直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺,间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜,利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。,.,11,丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N亚硝基化合物的乳白色沉淀。,（可与具有芳伯氨基的同类药物区别）,.,12,.,13,盐酸普鲁卡因ChP（2005）鉴别（4）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）取供试品约50mg，加稀盐酸1mL，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,.,14,（二）与三氯化铁反应,对乙酰氨基酚+FeCl3,蓝紫色化合物,.,15,对乙酰氨基酚ChP（2005）,鉴别（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。,.,16,1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。,（三）与金属离子反应,.,17,.,18,2.羟肟酸铁盐反应（基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构）,.,19,3.与汞离子反应,盐酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2,黄色,对氨基苯甲酸酯H2NO3+Hg(NO3)2,红色或橙黄色,.,20,1.盐酸普鲁卡因的鉴别,(四)水解产物反应,.,21,.,22,2.苯佐卡因的鉴别,苯佐卡因+NaOH,乙醇,乙醇+I2+NaOH,CHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）,.,23,(五)制备衍生物测熔点,1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因,.,24,2.硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因,.,25,(六)紫外特征吸收光谱法,1.在max处测定供试液的百分吸收系数。例如：对乙酰基酚在0.4%NaOH中于max=240nm;E1%1cm=715在HCl(0.1nol/L)-甲醇于max=249nm;E1%1cm=880,2.在规定的浓度测定max例如：醋氨苯砜5g/ml;max=256nm;284nm再例如：盐酸普鲁卡因胺5g/ml;max=280nm,(七)红外吸收光谱法,.,26,（一）对乙酰氨基酚中的杂质检查（化学合成工艺）A、对硝基氯苯水解对硝基酚还原对氨基酚乙酰化B、酚亚硝化、还原对氨基酚，乙酰化1）酸度来源：生产过程，水解要求：本品1%溶液pH应为5.56.5。,四、特殊杂质检查,.,27,2）乙醇溶液的澄清度与颜色本品为白色结晶或洁净性粉末，易溶于乙醇，溶液澄清。来源：中间体对氨基酚氧化产物。要求：不得比棕红色2号更深来源：生产中还原剂（铁粉）。要求：不得比1号浊度标准液更浓。,.,28,检查方法取本品的细粉1.0g，置具塞离心管或试管中，加乙醚5ml，立即密塞，振摇30分钟，离心或放置澄清，取上清液作为供试品溶液；另取每1ml中含对氯乙酰苯胺1.0mg的乙醇溶液适量，用乙醚稀释成每1ml中含50g的溶液作为对照液。吸取供试品溶液200l与对照溶液40l，分别点于同一硅胶GF254薄板上。以氯仿丙酮甲苯（13:5:2）为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深。,3）有关物质对氯乙酰苯胺,.,29,4）对氨基酚检查方法取本品1.0g，加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液（临用配制）比较，不得更深（0.005）。,.,30,（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查检查方法精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1ml中含30g的溶液,作为对照品溶液。取上述两种溶液各10l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯冰醋酸丙酮甲醇（14:1:1:4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。,.,31,2）对氨基苯甲酸,.,32,原理芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。潜在芳伯氨基，可通过水解或还原得到芳伯氨基。,（一）亚硝酸钠滴定法,五、含量测定,.,33,重氮化反应历程：,NaNO2+HClHNO2+NaCl,HNO2+HClNOCl+H2O,Ar-NH2,NOCl,Ar-NH-NO,Ar-N=N-OH,HNO2+HBrNOBr+H2O,快,快,慢,Ar-N2+Cl-,（1）K1,（2）K2,K1300K2加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度,.,34,注意条件：1.溴化钾的作用：催化剂。与亚硝酸生成NOBr，可加大NO+浓度。2.酸的种类及其浓度：重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基化合物，影响测定结果强酸性下可加速反应，但酸度过高，会使芳伯氨基游离受阻，影响反应速度。太浓亚硝酸分解,在不同酸中重氮化反应的速度为：HBrHClH2SO4HNO3,盐酸1:2.56,过量盐酸作用,.,35,3.温度：温度升高，反应速度加快，而生成的重氮盐的分解也加速，亚硝酸钠滴定液也易分解逸失。滴定应在室温条件4.滴定速度：（先快后慢）反应为分子反应，滴定不宜过快，要不断搅拌。将滴定管尖端插入液面下2/3处，滴定液一次大部分放下，近终点时方改为慢速滴定，加入最后一滴滴定液后，搅拌15分钟方能确定终点。5.电极活化：用浓硝酸（加12滴三氯化铁试液）温热活化。,.,36,永停滴定法：铂铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流通过，电流计指针指零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中遂有电流通过，此时电流计指针突然偏转，并不再回复，即为终点。,终点的指示方法,.,37,外指示剂法：常用碘化钾淀粉糊剂或指示液，滴定到达终点时，稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘遇淀粉即显蓝色,终点的指示方法,KI淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,.,38,本品在稀碱溶液中，在257+1nm波长处有最大吸收,（二）紫外分光光度法,对乙酰氨基酚ChP（2005）取本品约40mg，精密称定，置25ml量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液10m1，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数为715计算，即得。,.,39,苯乙胺类药物基本结构,R1,C*H,OH,CH,R3,NH,R2,HO,HO,R1,R2,R3,CH3,H,肾上腺素,H2N,Cl,Cl,H,CH3,盐酸克仑特罗,第二节苯乙氨类药物的分析,.,40,结构与分析方法酚羟基，易氧化。脂烃胺侧链，显弱碱性。芳伯氨基。手性碳，光学活性。,.,41,一、与三氯化铁反应,.,42,二、与甲醛硫酸反应,.,43,苯乙胺类药物多数含有多羟基酚，更易被氧化显不同颜色。肾上腺素血红色异丙肾上腺素橙黄色重酒石酸去甲肾上腺素黄色盐酸去氧肾上腺素无色盐酸甲氧明无色,三、还原性（氧化呈色）反应,.,44,四、UV吸收光谱特征,.,45,特殊杂质与检查,一、酮体检查,生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。降解产物,肾上腺素红,多聚体,.,46,一、酮体检查,肾上腺素（）中肾上腺酮（）的检查,260280300320,A,.,47,紫外分光光度法检查酮体的条件及要求,.,48,二、有关物质的检查,肾上腺素HPLC盐酸苯乙双胍纸色谱法盐酸去氧肾上腺素TLC,.,49,含量测定,原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法,.,50,一、非水溶液滴定法(一)基本原理,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,BH+A-,+,HClO4,BH+ClO4,+,HA,游离碱类盐,被置换出的弱酸,因此，要根据不同情况采用相应测定条件。,.,51,(二)一般方法,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结果,高氯酸滴定液滴定,以空白试验校正,.,52,1.适用范围主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为813的弱碱性药物采用本法滴定。一般来说：Kb为10-810-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；(药物)Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。,(三)问题讨论,.,53,2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硫酸氢根硝酸磷酸消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2量不足终点不明显，结果偏低。2BHX+Hg(Ac)22BHAc+HgX2,过量(13倍)不影响测定结果,(三)问题讨论,.,54,3.滴定剂的稳定性非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差未超过10时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：4.终点指示方法常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。,(三)问题讨论,.,55,例：重酒石酸去甲肾上腺素直接滴定盐酸克伦特罗加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点硫酸沙丁胺醇加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂,(四)应用实例,.,56,二、溴量法,1、游离溴及碘极易挥散，操作过程中防逸失2、不能加入太过量的溴液，以防酚羟基氧化或溴化。一般以过量2为宜。3、平行条件作空白，校正操作中溴及碘挥发。,.,57,三、提取酸碱滴定法(溶解性差异),方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。,硫酸苯丙胺加水溶解加氢氧化钠试液8ml加氯化钠使饱和乙醚多次提取合并乙醚液精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇低温蒸去乙醚放冷至室温加甲基红指示液2滴用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2H2SO4。,.,58,四、UV和比色法,五、HPLC法,六、体内药物分析(GC-MS),.,59,盐酸克仑特罗的测定取本品约0.25g，精密称定，加冰醋酸20ml，微热使溶解，放冷，加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于31.37mg的C12H18Cl2N2OHCl。,.,60,硫酸沙丁胺醇的测定取本品约0.4g，精密称定，加冰醋酸10ml，微热使溶解，放冷，加醋酐15ml和结晶紫指示液1滴用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于57.67mg的（C13H21NO3）2H2SO4,.,61,比色法测定原理加氯仿使栓剂基质溶解后，用盐酸液（9100）提取盐酸克仑特罗，加亚硝酸钠试液后，则分子中的芳伯氨基重氮化，在酸性溶液中，与N（1萘基）乙二胺偶合显色，在500nm波长处进行比色测定。,N2+Cl-,Cl,Cl,CH(OH)CH2NHC(CH3)3,NHCH2CH2NH2,.,62,供试品溶液的制备:取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液（9100）振摇提取3次（20、15、10ml），分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸液（9100）稀释至刻度，摇匀，滤过，