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文档简介
第一章细胞的分子组成,第三节有机化合物和生物大分子,实验1 :生物组织中的糖类,脂肪和蛋白质,实验:生物组织中的糖类,脂肪和蛋白质,实验原理:某些化学试剂使生物组织中的相关有机化合物发生特定的颜色反应。 化学试剂有机化合物特定颜色,还原糖菲林试剂砖红色沉淀脂肪苏丹iii (或苏丹iv )染色液橙黄色(或红色)蛋白质双缩二脲试剂紫色淀粉碘蓝色、水浴加热,一、可溶性还原糖的检测: (1)原理:还原糖菲林试剂砖红色沉淀。 (2)选材料:苹果、梨、萝卜。 糖度高,颜色接近白色或白色的植物组织。 (3)检测过程:水浴加热:振荡混合,5065水浴加热2min,2mL组织样品液,刚制备的茶碱试剂2mL呈淡蓝色,砖红色(Cu2O ),还原糖:含半缩醛羟基的糖类,主要为葡萄糖、果糖、麦芽糖。 蔗糖、淀粉和纤维素是非还原糖。将质量浓度0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后,立即生成浅蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热,可生成砖红色的Cu2O沉淀。 因此,利用该反应证明试样液中含有可溶性还原糖。rCHO2u(oh)2rcoohCu2o2h2o、甲液乙液等量混合,现配制,不得分别滴加或放置后使用。 取组织样品液、梨或苹果、研磨、5g放入乳钵,洗净、剥皮、切片、过滤、滤液、(用单层纱布)、显色反应,向试管中加入2ml组织样品液,向试管中加入2ml新调制的菲林试剂或贝尼迪试剂,振荡混炼,在5065水浴中加入2min 观察了溶液颜色的变化:水色茶色砖,结论:生成砖红色沉淀,说明梨和苹果中含有还原糖。 砖红色糖(还原糖)非(菲林试剂)非常好吃,2ml组织样品液,新制备的菲林试剂,在5065水浴中加热约2min,观察颜色的变化,砖红色、淡蓝色、茶色、【菲林试剂】:甲液:0.1g/mL的NaOH溶液,乙液:0.05g/使用mL的CuSO4溶液,使用之前等的体积混合均匀(生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液),现在配合(时间变长,Cu(OH)2沉淀在溶液的底部不发生)。 需要水浴加热。还原糖的检测结果表明,茶碱试剂和可溶性还原糖在水浴热条件下生成砖红色的Cu2O沉淀。 -CHO Cu(OH)2悬浊液、-COOH Cu2O(砖红色)、二、脂肪检测、(1)材料:浸种花生种子。 (2)检查过程:将电影、最薄的片放置在清洁的载玻片中央,制作假装片:蒸馏水12滴、盖玻片,染色:片上洗涤苏丹iii染色液23滴、染色23min、浮色:用吸水纸吸取染色液,滴加体积分率50%的醇12滴,镜子苏三(苏丹iii )寄来橙红(脂肪),切片:花生种子(浸渍3-4h ),去皮,子叶削薄。视野中有橙色粒子,橙色小圆形粒子为脂肪粒子,脂肪苏丹(或苏丹)染色液橙色(或红色)、注意事项: (1)以花生种子为实验材料,浸渍时间短,浸渍时间长,组织柔软,切片应尽量薄(2)染色后必须用50%的酒精溶液洗去浮色(酒精溶解苏丹iii ),染色和洗去浮色的时间不太长。、三、蛋白质检测: (1)原理:蛋白质双脲试剂紫色配合物,(2)材料:大豆、蛋白(稀释)、牛奶、豆浆、(3)检测过程:2ml组织样品液、2ml双脲试剂a液、摇均、(3-4滴双脲试剂b液、摇均、色变观察、紫色、双(双脲)子(紫色)弹(蛋白质) 反应式为:双缩二脲(H2NOC-NH-CONH2 )在碱性环境(NaOH )中与Cu2作用生成紫色络合物称为双缩二脲反应。 蛋白质分子中的肽键结构与缩二脲结构相似,因此蛋白质也与缩二脲试剂发生颜色反应。 缩二脲试剂、无色、紫色、(提供碱性条件)、(Cu2)、缩二脲试剂B3-4滴、缩二脲试剂A2mL、2mL组织样品液在碱性条件(NaOH )下,蛋白质中的肽键(-NH-co-)与Cu2作用呈紫色络合因此,加上a后再加上b,a多b少的话,b多的话,就会遮住Cu2的蓝生成的紫色。组织样品液、大豆组织样品液(或鸡蛋清稀释液)、大豆、浸渍、研磨、过滤、滤液、去皮、切片、蛋黄、鸡蛋清稀释液、稀释、显色反应、试管为2ml组织样品液、试管为2ml双脲试剂a、3-4滴双脲试剂b, 观察现象,观察颜色变化:无紫色,结论:双脲试剂a加入后,颜色无色,b加入后,说明紫色,鸡蛋清有蛋白质,蛋白质检测结果,注意事项: (1)以蛋白为材料,必须充分稀释。 否则,反应后的产物会粘在试管的内壁上,反应不完全,试管难以清洗干净。 (2)【缩二脲试剂】: a液:0.1g/mLNaOH、b液:0.01g/mLCuSO4。 先加入a液再加入b液,因为b不能过剩,所以没有必要加热。 (3)过量的缩二脲试剂b与试剂a反应,使溶液变蓝,隐藏生成的紫色。 (4)首先加入a液2ml,加入均匀振荡的b液34滴,均匀振荡。四、淀粉的检查: (2)材料:马铃薯匀浆,(1)原理:淀粉碘蓝,(3)检查过程:2ml组织样品液、碘液、颜色变化观察、蓝、蓝(蓝)点(淀粉)点(碘)、组织样品液、马铃薯块茎、试管注入2ml组织样品液, 加入碘-碘化钾5滴,观察现象,观察溶液颜色变化:无色蓝色,结论:溶液变蓝,表明马铃薯组织中存在淀粉。苹果、梨、萝卜、菲林试剂、砖红色沉淀、花生种子、苏丹iii染液、苏丹iv染液、橙色、红色、豆乳、牛奶、鸡蛋清、双缩二脲试剂、紫色、小麦粉、马铃薯均匀浆料、碘液、蓝色、注:为了鉴定还原糖需要加热脂肪的鉴定、五、观察细胞中DNA、RNA的分布,实验原理: (1)DNA主要分布于核内,RNA大部分存在于细胞质中。 (2)甲绿和吡咯红染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲绿使DNA为绿色,吡咯红使RNA为红色。 (3)用甲绿和吡咯红混合染色剂染色细胞,可显示细胞中DNA和RNA的分布。 (4)盐酸可改变细胞膜通透性,加速染色剂进入细胞,同时分离染色体中的DNA和蛋白质,有利于DNA与染色剂的结合。 甲绿通过使DNA为绿色,吡咯红通过使RNA为红色,观察2色部位,判断DNA和RNA在细胞中的分布。、方法步骤: (1)采访和制作,在清洁的载玻片上滴加0.9%NaCl溶液,用消毒的牙签刮擦口腔内侧壁后涂抹液滴,用酒精灯干燥涂抹了口腔上皮细胞的载玻片,(2)水解:将干燥的载玻片放入30ml的加了8%盐酸的小烧杯中, 在30水浴中保温5min,(3)洗涤切片:用蒸馏水缓水流洗涤载玻片10秒钟(4)染色,吸水纸吸取载玻片上的水分,在载玻片上滴加2滴,吸取吡咯、甲基绿色染色剂、染色5分钟,吸取多馀的染色剂,盖上玻璃罩后高倍镜:观察细胞核和细胞质染色情况。 0.9%生理盐水? 人口腔上皮细胞、8%盐酸? 保持、蒸馏水、30水浴、和、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、或、 (2)8%盐酸的作用是什么? 杀死细胞,改变细胞膜的透过性,加速染色剂进入细胞分离染色体中的DNA和蛋白质,有利于DNA和染色剂的结合。 (3)吡咯红甲基绿染色剂目前必须配伍。 本实验不应选择绿色植物叶肉细胞(有色)和其他有色细胞(鸡血细胞等)作为实验材料,而是妨碍观察颜色。双脲反应:两个以上含肽键的化合物与碱性硫酸铜起作用,产生蓝紫色复合体,茶碱试剂与双脲试剂的比较,茶碱试剂采用甲液和乙液配合,目前应均匀混合,水浴加热。 双缩二脲试剂使用a液和b液,加入a液,滴加b液,不用水浴加热。茶碱试剂和缩二脲试剂由NaOH和CuSO4构成,两者有溶液浓度不同的3点。 菲林试剂中的NaOH浓度为0.1g/mL,CuSO4浓度为0.05g/mL的双缩二
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