威远中学菊花组织培养PPT课件

1、专题3、植物组织培养技术，2，1，基础知识，1，植物组织培养，(1)细胞分化，概念：在个体发育中，同一细胞的后代在形态、结构、生理功能上产生稳定性差异的过程，过程：例如受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统，3，特征：(2)稳定性：(3) 全能性： (1)持续性：发生于机体的全生命过程中，在胚胎期达到最大限度，细胞分化稳定，一般不能逆转，分化的细胞还有发育的可能。 4，原因：基因在特定时间和空间条件下选择性表达的结果结果形成不同的细胞和组织： (2)细胞的全能定义：生物细胞具有使后代细胞成为完整个体的特性原理：生物细胞均含有该种特有的遗传物质，均为完整个体所必需的遗传物质但其细胞核仍保持全能性。 由于细胞核内含有这种遗传性所必需的遗传物质，分化的植物细胞仍具有全能性，实例、受精卵生殖细胞、全能性比较：、6、(3)植物组织培养、细胞离体、必要条件：一定的营养物质、激素和其他外界条件、原理： 细胞的全能性外植体：从植物体切取培养的细胞、组织、器官、相关概念：7， 去分化：再分化：愈伤组织：细胞不规则，高度气泡化，变成非晶态的薄壁细胞，8，人参愈伤组织，9，菠萝愈伤组织，10，11，12，2，影响植物组织培养的因素(1)植物材料的选择，烟草和胡萝卜的组织培养容易， 枸杞愈伤组织诱导困难，同一植物材料年龄、保存时间的长短影响实验结果，菊花组织培养一般选择未开花株茎上部新生的侧枝，13、14、(2)对不同离体组织和细胞营养、环境等条件的要求比较特殊， MS培养基的主要成分有： a，大量元素：N，p，s，k，Ca，Mg等，b，微量元素：B，Mn，Cu，Zn，Fe，Mo，I，Co等，c，有机物，植物激素，15，讨论：可以说各种营养物质的作用吗？ 与专题2微生物培养基处方相比，MS培养基处方有何明显差异？ 答：微量元素和大量元素为植物细胞生活提供必需的无机盐蔗糖在提供碳源的同时，能维持细胞渗透压的甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足体外植物细胞在正常代谢途径中受到一定影响后产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。 与微生物培养不同，MS培养基需要提供大量的无机营养，无机盐混合物包括植物生长所需的大量元素和微量元素两种。16、常用植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素、生长素类：2，4 -二氯苯氧基乙酸(2， 4-d )、吲哚乙酸(IAA )、萘乙酸(NAA )、吲哚丁酸(IBA )、细胞分裂素类：生长素(KT )、6-苄基嘌呤(6-BA )、玉米(ZT )、赤霉素类：赤霉素(GA3 )、(3)植物激素的影响，17，硫植物中生长素和细胞分裂素存在生长素时，细胞分裂素的作用呈强化趋势，18、有利于根的分化、有利于芽的分化、抑制根的分化、促进愈伤组织生长，生长素和细胞分裂素联用，用量比例对植物细胞发育方向的影响，(4)pH、温度、光、pH为5c、每日荧光灯12h、19、3、植物组织培养过程：体外组织或细胞、植物体、细胞分裂素生长素、愈伤组织、芽、根、细胞分裂素生长素、植物细胞培养、无用光、必需光、20、1、无病毒植物体培育、2、 提取紫草愈伤组织培养紫草素(治疗烧伤和切伤的药物和染料和化妆品原料)，4、基因工程也需要植物组织培养的方法，4、植物组织培养的应用：3、诱导离体的植物组织形成具有扎根发芽能力的胚状结构，包裹人工种皮制作人工种子，使某作物品种繁殖能力差、结子难、发芽率低21、人工种子。 22，2，实验操作，(1)制备ms固体培养基，ms培养基含有20多种营养成分，实验室一般使用4 . c保存调制的培养基母液进行调制，1、配置各种母液，23、将无机物中的大量元素浓缩为10倍，将微量元素浓缩为100倍，在常温下保存，激素类、维生素类及使用量少的有机物一般以1mg/ml的质量浓度调制母液，用母液调制培养基时， 根据各种母液浓缩倍数计算使用量，24、2，配置培养基分注到锥形瓶中，一根分注50ml或100ml，制备培养液，调整PH，分注培养基，菊花茎的组织培养比较容易，因此不需要添加植物激素，25、3，灭菌， 分装培养基与其他器具一起进行高压蒸汽灭菌，1、选取材料：菊花茎，取生长旺盛的嫩枝，(2)外植体消毒，2、消毒，流水洗净菊花茎段用流水洗净后稍洗涤剂，用柔软的刷子轻洗，洗净后用流水洗净20min左右，26、用酒精处理， 用无菌吸水纸吸取外植体表面的水分，放入体积分率70%的醇中振动23次，连续6-7s，立即取出外植体，在无菌水中洗涤，用消毒液处理，取出后用无菌吸水纸吸取外植体表面的水分，在质量分率为0.1%的氯化汞溶液中加入1-2min， 取出并在无菌水中至少清洗3次，清洁消毒液，27、(3)接种、污染的主要原因是空气中的细菌和孢子，接种室的消毒很重要。 用70%的酒精喷雾消毒空气，用酒精或新洁尔清洗桌子，照射紫外线20分钟，1、在接种室消毒，2、要求无菌操作，操作在酒精灯火焰旁完成，每次使用器具时用火焰烧灭灭菌，接种后立即关上瓶盖。 3、材料切割和接种，28，29，4，接种注意事项，接种外植体前镊子放入体积分率为75%的酒精溶液中消毒，然后用酒精灯的火焰烧烤、冷却后接种，外植体均匀分布在培养基上，放置外植体的数量取决于锥形瓶的大小一般胡萝卜34片，菊花茎叶不少68片，充分利用培养基的营养成分和光照条件，插入茎段，茎尖基部插入培养基有利于吸收水分和养分，30、思路：你打算重复多少组成对照实验a :各种材料或配方至少要配方设置对照实验，取出经灭菌的放入培养基的玉米瓶，与接种操作后的玉米瓶一起培养，说明培养基制作合格，未受杂菌污染。31、(4)培养、1、愈伤组织的培养，从接种外植体到愈伤组织出现需要2周时间。 2周内，外植体可见乳白色或黄色肿瘤状愈伤组织逐渐生长。 第一次培养愈伤组织的时候，没有必要关闭恒温槽的门看光。 因为在没有光的条件下愈伤组织生长很快。 2周后，培养基成分枯竭，需更换培养基，进行传代培养。 32、传代培养所用的培养基与培养愈伤组织相同，在严格的无菌条件下将愈伤组织与原外植体一起转移到新的培养基中。 愈伤组织的继代培养代为20d。延长时间，培养基中的营养物质减少，外植体分泌有毒物质，引起自我中毒。 愈伤组织生长到直径1-1.5cm时，可以进行试管苗的培养，否则需要进行第二代培养、2、愈伤组织的继代培养，在愈伤组织继代培养期间，打开恒温槽的门，愈伤组织看光，愈伤组织看光，颜色变绿，33、3、试管苗的培养， 愈伤组织生长到一定大小后，更换培养基，可见试管苗的光照培养(5)移植，移植固定的菊花试管苗前，打开培养瓶的封口膜，使试管苗在培养期间生长数天，1