培养基的制备.ppt

实验一培养基的制备,一、实验目的1、学习并熟练培养基的制备的方法、步骤和技术。2、学习和掌握高压蒸汽灭菌的具体操作方法和技术。,二、原理,培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，它是进行科学研究，生产微生物制品及应用等方面的基础。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多，要根据培养目的和检测需要不同，选择配制不同的培养基。从培养基的用途来区分，培养基可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等。,灭菌原理：高压蒸汽灭菌高温蒸汽导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。一般培养基在1213灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160170），时间长（12小时）。但干热灭菌温度不能超过180，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。,三、牛肉膏蛋白胨培养基的制备,（一）试剂和仪器1、药品及试剂：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl、1mol/LNaOH、1mol/LNaCl。2、仪器用品天平、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、药匙、玻璃漏斗、pH试纸（5.5-9.0）、棉花、牛皮纸、记号笔、棉线、纱布、培养皿等。3、配方牛肉膏3g、蛋白胨10g、琼脂15-20g、NaCl5g、水1000ml、PH7.47.6,（二）操作步骤,1.称量称量蛋白胨要快。牛肉膏用玻璃棒蘸取放入空烧杯。2.加热溶解加入部分水，边加热边搅拌，溶解后再碎琼脂，边加热边搅拌直到完全溶解。3.调pH值4.过滤5.分装装量合适、管口或者瓶口不要沾上培养基。6.加塞松紧合适，深浅适度7.包扎8.灭菌9.搁置斜面长度为试管的1/2。10.无菌检查,1、称量除琼脂外，按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入适当大小的烧杯中。蛋白胨极易吸水，称量时动作要快。,2、加热溶解向烧杯内加入所需水量的一部分，放到电炉上加热，同时不断进行搅拌，使其溶解，如配制固体培养基则向溶液中加入所需的碎琼脂，在电炉上一面加热一面搅拌，直到琼脂完全融化后才能停止搅拌，并加入热水补足水分。,3、调pH值用精密pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用1mol/LNaOH或1mol/LNaCl进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。,4、过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。没有悬浮物的不用过滤。,5、分装将培养基趁热加至漏斗上进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中，装试管时，装量不要超过试管的1/5；如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于三角瓶内，一般以其容积的1/2为宜。注意管口不要沾上培养基。,6、加塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。,7、包扎塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆扎，然后在外面用一层牛皮纸包扎。试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别，准备灭菌。,8、灭菌操作流程：检查杀菌锅各部件是否正常加水装锅加盖密封通电加热排空气（大量蒸汽排出时，维持5min）升温恒温杀菌断电降温开盖取出物品培养基、无菌水等：放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。1、含糖培养基：115灭菌10min或113灭菌15min2、无糖培养基：121灭菌1520min玻璃器皿：干热灭菌，放入烘箱加热灭菌：160165灭菌2h；或湿热灭菌：121灭菌2030min。,高压灭菌器的构造:外筒:用于盛水,内有加热装置;内筒:置于外筒内,内由金属隔板相隔,用于盛装待灭菌的物品;厚盖:盖的边缘附有螺旋,借以紧闭灭菌器;压力表:指示灭菌器内的温度与压力;安全阀:当压力达到一定值时,可自行打开,以确保安全;放气阀:用于灭菌过程中,放出余气;,9、搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50左右，将试管棉塞端搁置在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。,10、无菌检验将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448h，以检验灭菌是否彻底。,思考题,1、培养基配好后，为什么必须立即