云斑天牛论文：云斑天牛-肠道环境-组氨酸酸性磷酸酶(HAP)-β-折叠桶状植酸酶(BPP)-假单胞菌-沙雷氏菌-紫色

云斑天牛论文：天牛肠道细菌来源植酸酶的基因克隆、表达及其性质研究【中文摘要】植酸酶(Phytase,EC 3.1.3.8或EC 3.1.3.26)是一类能够降解植酸并释放无机磷和肌醇的磷酯酶。近些年,植酸酶作为一种新型的饲料添加剂和无机磷的替代物,在猪、鸡等单胃动物饲养业的应用价值已得到充分体现,而在水产养殖方面,具有应用价值的中性植酸酶亟需开发。昆虫肠道作为一个微生物数量众多且复杂多样的特殊环境,目前几乎没有相关植酸酶的报道。本论文的研究旨在从中性的昆虫肠道环境中获得具有新颖性和应用潜力的植酸酶。本研究从云斑天牛肠道环境来源细菌中挑选具有种属差异的20株细菌,利用简并PCR和TAIL-PCR技术,从其中3株细菌中克隆到4个植酸酶编码基因,分别为Pseudomonas sp. TN06来源的phyA06、Serratia sp. TN49来源的phyH49和phyB49、Janthinobacterium sp. TN115来源的phyA115。其中,phyH49为组氨酸酸性磷酸酶(HAP)基因,phyA06、phyB49和phyA115为-折叠桶状植酸酶(BPP)基因。通过氨基酸序列比对分析,四个基因与已发表的植酸酶序列最高序列一致性为4764%,三个BPP基因相互.【英文摘要】Phytase (EC 3.1.3.8 or EC 3.1.3.26) is a group of enzymes that initiate the stepwise hydrolysis of phytic acid to generate inorganic orthophosphate, lower myo-inositol phosphoric esters, and free myo-inositol. Recently, dietary phytase, as a novel animal feed additive and as a replacement for inorganic phosphorus, has been proved to be efficient in the improvement of phytate-phosphorus utilization and bioavailability of minerals to swine and poultry. In aquaculture, neutral phytases with appropriate propert.【关键词】云斑天牛 肠道环境 组氨酸酸性磷酸酶(HAP) -折叠桶状植酸酶(BPP) 假单胞菌 沙雷氏菌 紫色杆菌【英文关键词】Batocera horsfieldi gut histidine acid phosphatase (HAP) -propeller phytase (BPP) Pseudomonas sp. Serratia sp. Janthinobacterium sp【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】天牛肠道细菌来源植酸酶的基因克隆、表达及其性质研究摘要6-8Abstract8-9第一章 绪论13-251.1 植酸13-141.2 植酸酶14-201.2.1 植酸酶的来源151.2.2 植酸酶的分类15-181.2.3 植酸酶性质比较18-201.3 植酸酶的应用前景20-221.3.1 饲料添加剂21-221.3.2 食品加工221.3.3 医药化工221.3.4 土壤改良221.4 植酸酶的研究热点22-241.4.1 新基因的克隆231.4.2 蛋白质工程231.4.3 表达系统的选择和优化23-241.4.4 转基因动植物241.5 本研究的目的和意义24-25第二章 天牛肠道中细菌来源植酸酶基因克隆及序列分析25-452.1 实验材料25-262.1.1 实验菌株252.1.2 引物合成和核酸测序252.1.3 宿主菌、载体和试剂25-262.1.4 主要仪器262.1.5 培养基和溶液262.2 实验方法26-332.2.1 细菌基因组DNA 提取262.2.2 植酸酶保守区基因片段的克隆及序列分析26-302.2.3 植酸酶全长基因的克隆及序列分析30-332.3 结果与分析33-432.3.1 植酸酶保守区基因片段序列分析及全长基因克隆33-352.3.2 来源于Pseudomonas sp. TN06 的植酸酶基因的序列分析35-362.3.3 来源于Serratia sp. TN49 的植酸酶基因的序列分析36-392.3.4 来源于Janthinobacterium sp. TN115 的植酸酶基因的序列分析39-412.3.5 双结构域BPP 植酸酶氨基酸序列分析41-432.4 讨论43-44本章小结44-45第三章 来源于Pseudomonas sp. TN06的植酸酶基因phyA06在大肠杆菌中表达及性质研究45-573.1 实验材料45-463.1.1 实验菌株453.1.2 引物合成和核酸测序453.1.3 宿主菌、载体和试剂453.1.4 主要仪器453.1.5 培养基和溶液45-463.2 实验方法46-513.2.1 植酸酶活性的测定463.2.2 原核表达载体pET-phyA06 的构建46-473.2.3 重组酶PhyA06 在大肠杆菌中表达、纯化及鉴定47-493.2.4 重组酶PhyA06 的酶学性质测定49-513.3 结果与分析51-543.3.1 无机磷标准曲线的绘制513.3.2 BCA 蛋白浓度标准曲线的绘制51-523.3.3 重组酶PhyA06 在大肠杆菌中表达及纯化523.3.4 重组酶PhyA06 的酶学性质分析52-543.4 讨论54-56本章小结56-57第四章 来源于Serratia sp. TN49 的两类植酸酶基因phyH49 和phy849 在大肠杆菌中表达及性质研究57-664.1 实验材料574.2 实验方法57-594.2.1 植酸酶PhyH49 和Phy849 的原核表达载体构建57-584.2.2 重组酶PhyH49 和Phy849 在大肠杆菌中表达、纯化及鉴定584.2.3 重组酶PhyH49 和Phy849 酶学性质测定58-594.3 结果与分析59-634.3.1 重组酶PhyH49 在大肠杆菌中表达、纯化及鉴定59-604.3.2 重组酶Phy849 在大肠杆菌中表达、纯化及鉴定604.3.3 重组酶PhyH49 和Phy849 酶学性质分析60-634.4 讨论63-65本章小结65-66第五章 来源于Janthinobacterium sp. TN115的植酸酶基因phyA115在大肠杆菌中表达及性质研究66-745.1 实验材料665.2 实验方法66-685.2.1 phyA115 及其结构域的原核表达载体构建66-675.2.2 重组酶PhyA115 及其结构域在大肠杆菌中表达、纯化及鉴定67-685.2.3 重组酶PhyA115 酶学性质测定685.2.4 植酸酶PhyA115 活性与Ca(2+)和植酸浓度的关系685.3 结果与分析68-715.3.