脐带间充质干细胞杨洁.ppt

脐带间充质干细胞概述,杨洁2014-10-13,目录,定义技术流程临床应用优势前景,什么是脐带间充质干细胞？,脐带间充质干细胞（MesnchymalStemCells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。,工艺流程简介,信息反馈,供者筛选,供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。,样本采集运输要求,脐带采集标准：1.脐带长度不得低于20cm2.脐带两端均在2-3cm处结扎3.脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化4.脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横5.采集套装内容完整，无缺失6.采集信息登记完整、字迹清楚易辨认7.脐带运输时间在规定范围内8.温度控制在适度范围内（0度-25度）,样本接收标准,脐带的接收标准：1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。2.母血采集量5ml脐血检测样本采集量5ml3.采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。4.无可能造成供者基因型异常的家族史。5.供者健康调查表登记信息无异常。,间充质干细胞的制备方式,间充质干细胞的制备原理：脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。,组织块分离法,免疫五项检测均为阴性,间充质干细胞的制备方式,华通氏胶的提取与培养华通氏胶提取：1.消毒2.清洗3.分离出两条动脉和一条静脉4.剥取华通氏胶5.剪碎华通氏胶（大小1mm3）6.接种至培养皿培养（密度2-3g/10cm皿）,间充质干细胞的制备方式,注意事项：1.血迹清洗要彻底2.剥取动脉与静脉要干净3.尽量不要剥取羊膜组织4.使用合格器械，器械钝口和生锈的不要使用5.接种后均匀平铺组织块,间充质干细胞原代培养,细胞补液和换液（原代培养）1.制备五天补液（观察是否有细胞爬出）2.八天换液,间充质干细胞的传代,细胞传代（原代）接种时间：细胞融合度40%-60%,最基本和重要步骤,间充质干细胞的传代,细胞传代（非原代）接种时间：细胞融合度85%,试剂标记、用前复核,间充质干细胞的冻存,细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（CD90+、CD105+、CD166+）冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO）配制：DMSO10%冷冻方式深低温冰箱梯度降温,间充质干细胞的冻存,注意事项细胞冻存过程降温要慢，缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。,操作要迅速,间充质干细胞的复苏,细胞复苏过程要迅速，以降低DMSO对细胞的损伤，用生理盐水清洗两遍再接种培养；若直接回输则多洗一变。,细胞治疗程序,1、治疗前咨询：明确诊断，明确疾病处于哪一期；2、治疗风险：分析利弊；可能的副作用；获益3、知情同意：,治疗前准备,1).安全检测:菌检；2).个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定;3).需要的细胞数量；4).细胞的使用方法；5).可能出现的不良反应及应对措施。,间充质干细胞质量要求,细菌检测内毒素检测革兰氏检测支原体检测活性检测90%,阴性,细胞发放,1.细胞的保存(基质：生理盐水或者保存液）2.运输要求：时间、温度3.病人信息填写完整4.样本检测合格,MSC治疗禁忌证：,1.怀孕。2.精神病。3.严重的心、肝、肾、肺功能不全。3.不能控制的严重感染。4.合并其他有致命危险的疾病。5.一般受者年龄不超过65岁（个别患者65岁）。6.自体免疫性疾病晚期。7.恶性肿瘤。8.HIV阳性,间充质干细胞治疗疾病的原理,替代和修复死亡和受损伤的细胞；激活休眠和处于抑制状态的细胞；旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）,间充质干细胞移植途径,腰穿途径静脉途径局部种植介入途径,优势,1、取材方便：采集过程简单、无痛苦，不影响母子健康；2、细胞数量丰富：增值能力强，可为组织器官的修复和再生提供所需的大量细胞；3、免疫原性低：具有独特的免疫调节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；4、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。,脐带间充质干细胞具有哪些临床应用价值？,泌尿系统：肾实质的修复；消化系统：肝组织的修复；内分泌系统：胰岛细胞的修复；神经系统：脑、脊髓损伤的修复；血液系统：化疗、放疗后造血系统的修复；循环系统：心肌修复、血管修复；免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；衰竭器官的结构和功能的修复和