DNA重组技术的基本工具(1).ppt

课程要求：现代生物技术主题拓展了学生的生物技术视野，提高了学生的科学技术意识，为学生进一步学习生物学专业奠定了基础。模块解释，现代生物技术主题，课程标准现代生物技术主题的核心知识要求，细胞工程，本模块知识内容的构建顺序：基因工程细胞工程胚胎工程生态工程，分子水平，细胞水平，个人水平，组水平，1953年，沃森和克里克提出了DNA的双螺旋结构模型。技术探索之路、克里克等核心定律、技术探索之路、尼伦伯格和马太破译了氨基酸编码的基因编码的1966年霍拉纳通过实验证明。基础理论和技术开发被称为基因工程、基因工程、DNA重组技术。一般来说，是按照人类的意图提取某种生物的遗传形态，加以改造，然后放入另一种生物的细胞，直接改造该物种的遗传特性。基因工程概念，基因剪接技术或DNA重组技术，体外，基因，DNA分子水平，人类所需的基因产品，切割，剪接，导入，表达，每100公斤只能从猪或牛的胰腺中提取4 5g。1979年，美国将人的胰岛素基因重组为大肠杆菌，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。糖尿病治疗药物，WTO调查：2005年全球约1.8亿人，我国约6000万人。胰岛素，思考：基因改造技术把一种生物的某些特性表达在另一种生物身上。这种形体的表达跟我们所学的基因的什么过程有关？什么样的药物蛋白的基因，烟草的DNA，如何实现烟草的药物基因表达，需要事先做什么样的工作？精确切割DNA的工具(“分子手术刀”)限制性内切酶，DNA片段的连接工具(“分子缝合针”)DNA连接酶，基因转移工具(“分子运输工具”)运输载体，DNA重组技术的基本2、说明基因工程操作工具、类型和作用的例子。3、利用所学的DNA重组技术制作重组DNA分子模型的模拟。自然界中有没有一种生物的DNA进入另一种生物呢？2.单细胞生物在进化中没有灭绝。有什么保护机制？为了防止，可能产生了几种特殊的酶。但这种酶识别并分解入侵的外部DNA，对自己的DNA不起作用。“分子手术刀”限制性核酸内切酶，限制性核酸内切酶“分子手术刀”，2。为什么限制酶和DNA连接酶能从微生物中分离，高等植物和动物中没有？引导学生从噬菌体感染菌中获得灵感，为什么酶不能切割自己的DNA分子？1，DNA分子没有其限制性酶的识别切割序列；2，通过甲基化酶识别的序列的碱基，限制甲基化酶不被切割。限制性核酸内切酶“分子手术刀”，1。主要来源：2。种类和命名：主要从原核生物中分离纯化，约从300种微生物中分离出4000种限制性内切酶(限制性内切酶)。，例如，在嗜血杆菌诱导的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中，用三种限制性酶连续分离，分别为：Hind，hind 和hind 主要来源：2。种类和命名：3 .功能(特定)，在双链DNA分子中识别特定的核苷酸序列，在每条链的特定部分分离两个核苷酸之间的磷酸键。，主要从原核生物中分离和纯化，t，磷酸二酯结合，a，限制性核酸内切酶“分子手术刀”，1。1.主要来源：2。种类和命名：3 .功能(特定)4。酶识别序列限制，双链DNA分子中特定核苷酸序列识别，以及在每条链的特定部分分离两个核苷酸之间的磷酸二价键。主要从原核生物中分离纯化，大部分限制性酶的鉴定顺序由6个核苷酸组成，少数鉴定顺序由4、5或8个核苷酸组成，限制酶的鉴定顺序，限制性核酸内切酶“分子手术刀”，1。主要来源：2。种类和命名：3 .功能(特定)4。酶识别序列限制5。作用结果：在双链DNA分子中识别特定的核苷酸序列，在每条链的特定部位分离两个核苷酸之间的磷酸基团。主要从原核生物中分离和纯化、粘性末端或平端生成的大部分限制性酶识别顺序由6个核苷酸组成，少数识别顺序由4、5或8个核苷酸构成，被限制性酶切掉的DNA的两个单链切口具有几个扩张核苷酸，在它们之间完全互补配对的这些切口称为粘性末端。ecor ，粘滞端，粘滞端，Sma，平端平端，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.ecor ，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.混合不同来源的DNA片段，不连接同种DNA片段的生物a基因片段，生物b基因片段，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.酶切，“分子缝合针”DNA结合酶，DNA结合酶通过“缝合”绳子末端之间的缝隙，将被切割的DNA片段结合成新的DNA，DNA和磷酸连接起来，可以“缝合”粘性末端之间的缝隙，大肠杆菌，DNA聚合酶只能在现有单链核苷酸片段的末端添加单核苷酸，形成磷酸二酯键，必须摸板。DNA连接酶是连接两个双链DNA片段的末端，磷酸形成酯连接，无需触摸板块。比较多种酶的作用，特定位置的磷酸二酯键，碱基对之间的氢键，脱氧核苷酸，DNA片段的特定端，DNA单链，整个磷酸二酯键，DNA连接酶和DNA聚合酶是同一种物质吗？焦点2:“分子缝合针”-DNA结合酶，从甲生物细胞中取出的基因要在乙生物体内表达，必须先将这个基因发送到乙生物的细胞。能够将外源基因发送到细胞的工具是载体。进入受体细胞的基因载体“分子转运蛋白”，载体的必要条件：1个或多个限制性酶体点，对受体细胞无害，导入基因在受体细胞中复制和表达，具有特定标记基因，使筛选更容易；将细菌的质粒噬菌体的衍生物或特定动植物病毒目的基因导入受体细胞后，作为分子运输车载体，如果没有切割部位会怎么样？霍乱菌有质粒多限制酶切点，你想用它作为分子运输车吗？目标基因是否进入了受体细胞，如何知道？常用载体：质粒，复制和插入目的基因一起复制，切割部位，标记基因的存在，用含有氨苄西林的培养基确认，限制性核酸内聚酶(分子手术刀)，在双链DNA分子中识别特定核苷酸序列，在每条链的特定部分分离两个核苷酸之间的磷酸基团。主要从原核生物中分离和纯化，使其粘性末端或平端、功能、起源、结果、DNA结合酶(分子缝合)、基因进入受体细胞的载体(分子运输车)、功能、种类、条件、受体细胞无害。，ecol I 连接酶，将切割的DNA片段拼接成新的DNA片段。T4DNA连接酶能可靠地保存受体，并大量克隆。有一个或多个限制性内切部位。有特殊的基因标记基因，容易筛选。质粒，动植物病毒和噬菌体衍生物。摘要，在课程下制作：使用EcoRI酶，E.coliDNA连接酶形成的DNA重组模型，然后在课程中展示。ctg ca.g，(1)，GC.CG.g.CTT aa，g.ACG TC.GC.CG，gt.ca.aa TTC.g.(2)、(3)、(5)、(6)、(7)、(8)、gt.ca.交流.TG，你可以缝合两块，上下左右翻转。练习：知道基因中有抗四环素基因和氨苄西林基因，现在我们来看看哪些细菌的质粒中有无标记基因或标记基因。设计实验，预测实验结果，得出质粒的构建和转化1)删除不必要的DNA区域，减少分子量，增加外源DNA片段的装载量的适当实验结论。2)特定质粒编码基因的停用。3)添加容易识别的选择标记基因。4)添加特殊的基因表达控制因素。一般来说，自然运输工具往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要对一些自然运输工具进行人工改造。1.在限制酶的主张中，确切地说，限制酶是GAATTC基本序列B. eco ri唯一切割的g-a之间的氢键c .限制酶通常不切割自己的DNA分子，而是外来的DNAD.限制性内切酶只存在于原核生物中，并进行练习。2.DNA连接酶产生催化反应的是()a. DNA复制时，母链和子链之间形成氢键的b .粘端碱之间形成氢键，c .两个DNA片段粘端之间的间隙连接错误的D. a，b，c全部，3 .在基因工程中切割包含载体和目的基因的DNA片段的步骤()A .同种限制酶b .两种限制酶c .同种连接酶d .两种酶A，c，3。作为基因运输工具载体，必须具备的条件和原因是()在宿主细胞中稳定地保存和大量克隆，提供了很多目的基因。b .为了方便目的基因的表达，有多个限制性酶接触点。c .具有特定标记基因的表达。目的基因表达的条件d .在宿主细胞中复制并稳定保存，可以筛选，a，4。基因工程中常用的受体细胞有：()(1)大肠杆菌(2)枯草杆菌(3)支原体(4)动植物细胞a. (3) (4) b. (1)