脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板二

脓液和粪便标本中病原菌的检测学年专业： 14临床输血学号：姓名：宁立军集团：第七集团合作者：牛凯文黄可秀朱晋辉实验室：第六实验室指导老师：罗军实验得分：一、实验目的在革兰氏染色和油镜下通过细菌形态结构、细菌生化反应和细菌血清学反应等手段区分鉴定脓液标本和粪便标本中的细菌，检测病原微生物，进行细菌药敏试验。二、实验器材一器材接种环接种针打火机酒精灯电热恒温培养箱物显微镜电炉试管(带棉栓)称量纸药勺牛皮纸胶带容器高压蒸汽灭菌器镊子玻璃吸水纸2试剂普通营养琼脂培养基蒸馏水脓液标本粪石蜡油生理盐水晶紫罗果碘液95%乙醇稀释红葡萄糖微量发酵管(2根)乳糖微量发酵管(2根)青霉素抗生素纸链霉素抗生素纸庆大霉素抗生素纸兔血浆福氏志贺菌诊断血清三、方法和程序1培养基的制备取一定量的肉汁培养基，在三角烧瓶中加入适量的蒸馏水煮沸，取热中分装的一定量的营养琼脂培养基，在三角烧瓶中加入适量的蒸馏水煮沸3次(刚起泡，立即放在桌子上，30分钟后煮)，完全溶解，热中分装。 (平板培养基：无菌操作，倒入平皿10ml，琼脂完全凝固后，将平板倒置放置，保存在4的冰箱中。 斜面培养基：培养基趁热倾斜放置，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固后，放入4冰箱保存。 )贴上标签灭菌后使用。2空气与人体体表细菌学检测根据空气中的细菌气溶胶粒子，在重力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养后，数出菌落形成单位(CFU )，调查空气的污染状况。 打开平板盖，盖子朝下放置在平板面板旁边，琼脂平板面板露出15分钟即可。在普通平板上接种手指细菌。 第1段作为洗手前，第2段作为洗手后，第3段作为消毒后，第4段作为空白对照。3细菌分离培养接种前，接种戒指烧灼灭菌。 采集标本在平板表面上密集涂抹510 mm。 把接种环的多馀标本烧掉。 冷却后，采用区划线分离法将脓液标本接种到营养琼脂平板(2份)，粪便标本接种到伊红美青平板(2份)。 接种完毕，接种戒指烧灼灭菌。 将平板倒置，在37培养1824h小时，观察结果。4细菌群体生长特性的观察与纯化培养观察并记录细菌分离培养物中菌落的特点。选择平板上同一菌落数量多、典型、容易选择的单一菌落。 用无菌操作轻轻刮取细菌，接种到斜面培养基上。 接种完毕后，烤环接种，在37培养斜面培养基一夜。5细菌个体形态特征的观察斜面培养物的观察革兰氏染色：取出干净的载玻片，用灭菌操作后的接种环将生理盐水1-2环取入玻璃板，取出细菌培养物，稍微轻轻地融合盐水。 涂膜干燥后，在酒精灯炎外侧快速往复23圈，固定标本，进行染色。 结晶紫染液在初染1分钟后水洗，芦戈碘液1分钟后水洗，95%醇脱色20-30s，水洗，稀释后红染1分钟后水洗。 晾干标本后，滴沥青，用油镜观察。通过无菌操作，从斜面培养物中逐渐取出细菌苔，立即转移到肉汁培养基管中，用接近液面的管壁轻轻研磨，涂上少量肉汁调制，混合到菌液混合词培养基中。 接种完毕，试验管口用火焰灭菌23次，塞棉塞。 接种环烤好后卸下。6细菌糖发酵实验无菌操作，用灭菌接种针刮取一些新鲜细菌培养物，分别接种葡萄糖发酵微管和乳糖发酵微管。 将微管放入平盘中，在37下培养一夜，观察结果。7血浆凝固酶实验取一片干净的玻璃片，左右各滴1-2滴兔血浆，一滴生理盐水。 将接种环在酒精灯火上烧灭菌后，取出一点细菌的新鲜培养物，在生理盐水中混入细菌悬浊液中。 用灭菌接种环取1环细菌悬浊液，或者选择一些细菌培养物，轻轻地适应兔子的血浆。 等一会儿，观察结果。8血清学实验取一片清洁的载玻片，以磨面的近位部为对照区，滴加生理盐水15ul。 以远端为试验区，滴入福氏志贺菌诊断血清15ul，用接种环采集粉红色菌苔，在盐水或血清内研磨，均匀混合。 前后倾斜载玻片，充分混合菌液，加快絮凝速度，结果清晰。9半固体穿刺培养接种针灭菌处理后取少许菌苔，垂直刺入半固体培养基中心，可刺入底部附近的管，但不到达管底，沿原路退出。 接种完毕后，试验管口立即通过火焰灭菌23次，塞上棉塞。 接种针烧了再放。 在37下过夜。10细菌药物敏感性试验接种环是在平板培养基的表面采集菌液，拉出2根细菌接种线做成“十字形”。 用平板密集划线接种细菌。 设计三点，呈等边三角距离，点距盘边约15mm。 加上标记：蓝色、锁链、庆。 镊子的火焰消毒，夹住对应的药片，平贴在设定的位置，按压，镊子的火焰灭菌。 在37培养1824小时，观察结果。四、实验结果与分析1 .空气和人体表细菌学检测(1)空气：菌落数： 16个，采集场所：厕所。 cfu/m3=50，000 NAT86n (直径7cm平板)实验室空气细菌标准。n :平板上的菌落数，a :平板面积(38.5cm2)，t :采样时间(15分钟)分析探讨：教室与其他组相比，微生物实验室空气细菌多，厕所反而菌落少，是因为实验室关闭，人流量多，空气细菌多，厕所人流量少，反而清洁。(2)人体时钟：手指皮肤的细菌学检查显示，无论是标准的还是普通的洗手后，平板上的菌落数量都和洗手前相同，更多的是，消毒后我们组没有发现两个同学的菌落，空白的比较显示，两个同学都是洗菌前的细菌种类较多分析探讨：对于普通洗手同学来说，临时细菌不能完全清洗，常驻细菌暴露，洗手后检测到的细菌反而变多，对于标准洗手同学来说，临时细菌可能完全清洗，但暴露的常驻细菌可能等于或多于临时细菌用碘酒消毒后，没有发现菌落，表明碘酒的消毒可以彻底消毒。 空白对照显示我们手指皮肤上的细菌比空气多。2细菌分离培养浓汁标本平板粪便标本平板脓液标本一般平板有黄色、白色两种菌落，圆形、隆起、表面光滑、边缘齐全、不透明。 粪便标本在伊红美青平板上有紫黑、淡粉红两种菌落。 紫黑色菌落有金属光泽，大大隆起，不透明。 淡粉色的菌落是半透明的。分析探讨：应用伊红美蓝平板从粪便标本中分离出紫黑色为金属光泽和粉红色半透明菌落，显微镜均为G-杆菌，散在序列中。 紫黑色金属光泽的产生是由于乳糖分解产生酸，酸使伊红美与蓝紫结合，产生紫黑色金属光泽菌落。 紫黑色菌落是能够分解乳糖的大肠杆菌。 病菌不能分解乳糖，菌落呈伊红色。 粉色菌落是一种不能分解乳糖的病原菌。3细菌个体形态特征的观察G-杆菌g球菌分析探讨：应用伊红美青平板从粪便标本中分离出紫黑和粉红半透明两种菌落。 显微镜下均为G-杆菌，散在序列中。 用普通平板从脓液标本中分离出黄色、白色两种菌落，这两株细菌在显微镜下为g球菌，呈不规则排列的葡萄串状。4细菌糖发酵实验分析探讨：粪便标本分离菌糖发酵试验中，紫黑菌落菌种葡萄糖和乳糖微量发酵管均为黄色，有产气的粉红菌落菌种葡萄糖微量发酵管为黄色，无产气剂，乳糖微量发酵管无明显变化。5血浆凝固酶实验脓液标本分离菌血浆凝固酶实验发现黄色菌液有明显凝固块，实验结果阳性白色菌未见凝固反应，实验结果阴性。分析探讨血浆凝血酶实验表明，黄色菌种实验结果阳性，病原菌。6血清学实验玻璃片凝集试验诊断粉红菌落菌种为福氏志贺菌，血清中出现板状凝集现象，实验结果为阳性，生理盐水中未见凝集现象。分析探讨：通过血清学实验，确定粉红菌落菌种和福氏志贺菌为血清凝集反应的福氏志贺菌。7半固体穿刺培养在半固体培养基中，紫黑菌落菌种扩散生长，培养基呈扩散云雾混沌状态的粉红菌落菌种沿穿刺线生长，穿刺线边缘整齐，周围培养基清澈。分析探讨：半固体动力试验紫黑色菌落半固体动力试验结果阳性，粉红色菌落半固体动力试验结果阴性，无鞭毛。8细菌药物敏感性试验白色细菌平板黄色细菌平板粉色菌种平板紫黑色菌种平板各菌落抗菌环直径青霉素头孢曲松庆大霉素黄色菌种42毫米25毫米30毫米白色菌种30毫米22mm40毫米紫黑色菌种没用37毫米26毫米粉色菌种没用36毫米38毫米分析研究：青霉素以革兰氏阳性细菌为对象，对白色菌落和黄色菌落敏感，头孢曲松和庆大霉素均为广泛抗生素，对革兰氏阴性和阳性细菌敏感，因此对4种菌落有较好的抗菌作用，从这些细菌的抗药敏感实验可以看出细菌属五、实验综合讨论1、一般平板，从脓液标本中分离出黄色、白色两种菌落，油镜下为g球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌。 结合菌落色素，这2株葡萄球菌分别为金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。 致病性葡萄球菌产生血浆凝固酶，将血浆中的纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白，附着在菌体表面，形成凝固块。 血浆凝固酶实验表明金黄色葡萄球菌实验结果阳性，为病原菌。采用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色为金属光泽和粉红半透明的菌落，显微镜均为G-杆菌，分散在其中。 紫黑色金属光泽的产生是由于乳糖分解产生酸，酸使伊红美与蓝紫结合，产生紫黑色金属光泽菌落。 紫黑色菌落是能够分解乳糖的大肠杆菌。 病菌不能分解乳糖，菌落呈伊红色。 粉色菌落是一种不能分解乳糖的病原菌。 从形态上无法识别是什么样的细菌。 糖发酵试验(紫黑色菌落菌种降解葡萄糖和乳糖，产生产酸剂； 粉红菌落菌种分解葡萄糖不产酸)半固体动力试验(紫黑色菌落菌种半固体动力试验结果阳性，有鞭毛粉红菌落菌种半固体动力试验结果阴性，无鞭毛。 比较常见肠道感染细菌的主要生化反应特点，分别判定为大肠杆菌和福氏志贺菌。 通过血清学实验，确定粉红菌落菌种和福氏志贺菌为血清凝集反应，并为福氏志贺菌。肠杆菌科各菌属于生化反应鉴别表葡萄糖乳糖麦芽糖甘露醇蔗糖半固体埃希里希亚属1111脾气志贺菌脾气脾气/-/-是沙门氏菌/-是11-是霍乱弧菌-是农杆菌属1-是脾气-是脾气注：产酸或阳性，1222222222222222222222222常见肠道感染细菌的主要生化反应特点葡萄糖乳糖半固体大肠杆菌群11福氏志贺菌伤寒沙门氏菌霍乱弧菌幽门螺杆菌不分解糖类农杆菌属12 .按照常规药敏试纸的判断标准，金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素、庆大霉素、链霉素敏感。 大肠杆菌对青霉素抗性、庆大霉素、链霉素敏感，福氏志贺菌对青霉素抗性、庆大霉素、链霉素敏感。 结论g球菌对青霉素和链霉素敏感。 g杆菌对青霉素耐药，对链霉素敏感。 g球菌和g杆菌对广域抗生素庆大霉素敏感。常用药敏试验纸片的判定标准抗