免疫组化实验结果的判定和分析

免疫组织化学实验结果的判断与分析免疫组织化学实验结果的判断与分析免疫组织化学技术服务主要包括免疫组织化学工作的核心内容抗体实验结果的说明和分析，图片的确定和选择，以及相关数据的提供等。只有严格的实验设计、标准实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最好的服务。免疫组织化学结果的判断原则：同时要设置对照染色。没有对照染色的免疫组织染色结果不可靠。抗原表达必须在特定部位。LCA必须位于细胞膜上。CK应位于细胞浆中。PCNA和p53蛋白应位于细胞核内。EMA应该位于细胞膜上。不在抗原所在部位的阳性着色不能视为阳性。负面结果不能视为抗原表达。由于检测方法的灵敏度高或低，有时染色方法的灵敏度不足，会发生语音反应，判定时要注意。避免出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，尤其是酶免疫标记。这种良性着色剂是因为内源性干扰，或人为因素。对免疫组织化学标记结果的意义不能绝对化，必须综合分析临床数据、x线等影像学和实验结果。对照染色设计：(a)对照染色的目的对照组的目的是排除假阴性和假阳性。假声的原因主要有三个：组织处理不当，抗原过量丢失或屏蔽；抗体失活，效价过低或稀释度不合适(主要指一元，即特定抗体)；染色阶段缺失和错误，或选择显色剂、缓冲液pH和不适当的离子强度等。胃良性菌管是由以下多种因素引起的，非特异性颜色：自发荧光或内源酶等干扰；抗体试剂不纯(特别是一元)；操作错误，如污染、切片干燥或着色剂操作不当等； Fc受体干扰等。(b)控制类型和选择目的对照染色大致可分为四类：阳性组织对照组、阴性组织、阴性试剂调节、自我调节。良性组织控制是指与被确认含有目标抗原的同族不同的来源组织切片或细胞涂层与检查对象实验节同时进行相同处理和免疫染色的组织。正确的结果应该是阳性，以确认使用的免疫组织化学染色工艺的效果，排除假阴性的可能性。艉语音组织控制是指经确认不含目标抗原的同时处理和用免疫标记染色的组织对照组。正确的结果应该是阴性，假阳性除外。语音试剂控制用于免疫组织化学染色的试剂，特别是用于确认特定抗体试剂的效能和稳定性的同步免疫染色对照组，如空白对照组，替代对照组，吸收试验，抑制试验。目的证明除假阳性外，所使用的免疫组织化学试剂及其技术方法的有效性及检验对象实验切片免疫标记阳性结果的可靠性。空格控制用缓冲液(PBS，TBS等)代替第一抗体(主要是，根据需要可以替代第二抗体和教联抗体的空白)，在不同阶段对一定试剂进行对照染色，结果应为阴性。替代控制使用方法用第一抗体同类动物的正常血清或与本实验无关的抗体(目标生物的缺乏)替换第一抗体，用其他阶段不变试剂染色，结果应为阴性。吸收试验用事先被粗抗原吸收的第一抗体上清液替换第一抗体，其他阶段不变的免疫染色试剂形成对照。结果语音或阳性着色必须明显减弱(吸收不是全时间状态)。抑制试验抗体和未标记抗体(可能是第1段或第2段或桥抗体)的混合物作为试剂，其他步骤与一定的免疫组织化学染色试剂对照，使其阳性着色按比例减弱(等量或1: 9)。这种试剂比较主要用于直接方法。这些语音试剂控制选择原则如下：不能储存空格控制。其他控制要在前期实验中做得更多。尤其是新的抗体试剂的应用。染色应与实验片剂同步。控制结果应附加要求。自我控制同一标记切片中自身组织组件的负背景控件。与目标抗原阳性反应细胞或成分相邻的语音背景结构的现状要消极或配色浅，并与阳性的着色成分明显对比。这是为了排除因内源性干扰引起的假阳性和抗原扩散电位引起的错误结果。非特异性染色：非特异性染色是免疫组织化学染色过程中发生的非靶标抗原着色结果，也称为假阳性，背景着色，会严重扰乱免疫组织化学染色结果的正确判断，因此要努力避免或缓解。原因来自免疫组织化学染色过程的各个阶段，可以通过以下方法获得：内源性干扰(自发荧光、内源性酶、内源性生物素等)；试剂污染(低质量、交叉反应、Fc受体干扰等)；组织处理不当(因组织固定不当或固定不当而引起的抗原分散移位、因洗涤不当而引起的自由试剂残留等)。纠正方法可以根据原因，以事前实验为基础，采用定制的纠正对策大症状处方。阳性标记的形态特征和判断：免疫组织化学标记具有一定的形态特征，掌握后有助于准确判断免疫组织化学标记结果。性质包括定性、位置和定量三个方面。免疫发色强度和阳性细胞密度是实际工作中经常使用的与抗原含量相关的强度和密度结合方法的定性定量指标；阳性细胞的着色形态和组织分布主要是位置指标，与功能有关。一、阳性标记免疫特性子“弱”、“中”、“强”三个阶段。例如，免疫荧光法(FITC)表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和浅绿色耀眼荧光。免疫酶标记(HRP- DAB/H2O2)显示为浅黄色细粒子、黄褐色粒子和浅黄色粗粒子。一般照片图像，原则上选择更多的强阳性区域。第二，良性标记细胞学(以HRP-DAB/H2O2为例)可分为细胞膜类型。细胞核型；细胞质(浆)类型；微绒毛和复合(细胞膜-细胞质兼用、细胞质或微绒毛-细胞质兼用)等5种阳性细胞类型。这与抗原所在的部位有关，但由于组织固定不好而产生的抗原分散人工品，尤其是复合图像，必须排除。三、良性标记组织学特征(以HRP-DAB/H2O2为例)组织内免疫组织化学染色阳性细胞的分布可能以以下7种形式出现：局部类型；扩散类型；块类型；网状类型；射线管；腔边类型和菊花组类型。这主要取决于细胞内抗原抗体复合物的分布和组织内阳性细胞的集体分布特性。四、阳性标记强度特征根据细胞阳性着色程度(抗原含量)，可分为：弱阳性()1分；中等阳性()2分；强阳性()3分。根据阳性细胞数，可分为：弱阳性(，意味着阳性细胞总数在25