减数分裂的制片与观察

.,植物花粉母细胞减数分裂制片技术和染色体观察,.,一、实验目的1、观察染色体在减数分裂中的行为和变化，识别减数分裂各个时期特点，加深对减数分裂遗传学意义的理解；2、掌握动、植物减数分裂的制片技术。,.,二、实验原理,减数分裂是性母细胞在配子形成过程中一种特殊的细胞分裂方式。在减数分裂过程中染色体只复制一次，而细胞却连续分裂两次，因此一个二倍体的性母细胞便形成为四个单倍体的性细胞。高等植物花粉母细胞经减数分裂产生四个小孢子，染色体数目已减半为n。小孢子进一步发育为花粉粒。,.,减数分裂过程,1、间期(前间期)2、减数第一分裂3、中间期4、减数第二分裂,前期I中期I后期I末期I,前期II中期II后期II末期II,.,在适宜的时期采集植物的花蕾，经固定液杀死固定，使细胞保持活体时形态。然后进行压片染色等处理，在显微镜下进行观察，可以看到小孢子母细胞的减数分裂过程，研究染色体在形态和数量上的动态变化特点。,.,三、实验用品,实验材料：玉米（Zeamays2n=20）雄花序或小麦、蚕豆(Viciafaba2n=12)花蕾、蝗虫(grasshopper初级精母细胞2n=22+X)精巢仪器物品：显微镜、水浴锅、镊子、解剖针实验药品：卡诺氏固定液、70%乙醇、改良品红或醋酸洋红。,.,四、实验操作流程,取材固定剥离花药染色压片镜检,.,1.取材：选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时期不同。玉米：抽雄前两周（大喇叭口期），雄穗尖端露出以前7-10d时，先以手指挤摸穗尖的外部，觉得松软时在雄花序所在部位用刀片纵向划一切口，用镊子取出花序分枝。此时雄花序先端小穗颖长4mm左右，花药长23mm。每小穗中有两朵小花，各有花药3个。通常从一个分枝上从幼嫩的部位向较为成熟的区域混合制片。小麦：孕穗期以后，旗叶抽出12cm，取出穗子。时间一般在上午9时10时，不同材料间稍有差异。,.,玉米大喇叭口期,玉米小穗,玉米雄花序,.,小麦孕穗期,小麦的小花,实验中注意观察：每一分枝是中上部还是下部小穗发育最早？,.,2固定：取下的材料应立即放入固定液中杀死固定。一般采用卡诺氏固定液，无水酒精：冰醋酸3:1，一般固定424h。可用95乙醇代替无水乙醇。如需长期保存，可先用70%酒精冲洗2次然后转入70%酒精中保存。注意：固定液时应现配现用，固定时不要在阳光下暴晒。,.,3、剥离花药取出保存的花序，吸去小穗过多保存液，置于载玻片中央，挑出花药,.,4染色：,在剥离的材料上滴加1滴染液，在室温下染色1015min。,.,5.压片盖上盖玻片，在盖玻片上垫12层吸水纸，用一只手稳住载玻片和盖片防止滑动，另一只手用解剖针的针柄敲击盖片,.,6.镜检观察先用低倍镜观察，找到一个好的分裂相，再转用高倍镜观察。要求能够分辨减数分裂的各个时期，特别是能够独立辨认第一次减数分裂前期的各个时期7.观察永久制片在显微镜下观察，并与自己的制片比较，掌握各个时期的特点。注意：怎样区分各个时期？,.,五、实验结果与分析,1绘出自己所制作片子的分裂相(3个以上时期），说明其时期和特点。2.分析自己制片操作过程中出现的问题及可能原因。,.,注意事项,爱护显微镜。一次取材不要太多。用过的载玻片必须刷洗干净，用过的盖玻片丢入垃圾桶，不得直接冲入水池。,.,减数分裂前期I,细线期,偶线期,偶线期,.,粗线期,双线期,终变期,中期,后期,后期,.,前期II,中期II,后期II,末期II,四分体,小孢子,.,.,玉米减数分裂中期I,玉米减数分裂中期II,M1中期与M2中期的比较,.,前期I,细线期,偶线期,粗线期,.,双线期,终变期,中期I,.,后期I,末期I,.,前期II,中期II,.,后期II,末期II,.,取材及固定捕捉雄性蝗虫，直接投入到卡诺固定液中固定24小时，然后转到70的酒精中保存。,雌雄虫辨别（外观）雄性蝗虫虫个体小，雌虫较大；雌性蝗虫尾部有产卵瓣，雄虫无。,.,解剖取出精巢：先将蝗虫翅膀剪去，在翅基部的后方，相当于腹部背侧的前端，用解剖剪将其体壁剪开，上方两侧的黄色团块就是精巢。精巢由许多排列在一起的精小管组成。将精巢取出置于一洁净的培养皿内，用蒸馏水洗涤干净。用解剖针将精巢轻轻分离开，即可看到大量的精细小管。,.,取12根精小管放在干净的载玻片上，用吸水纸将上面的水吸净，在精小管位置上滴加一滴改良苯酚品红染液，在室温下染色10-15min。,.,附：显微镜操作和使用,开关显微镜，移动显微镜。调节目镜间距和目镜微调，使两个眼睛视野相同和清晰，防止眼睛疲劳。先低倍镜，后高倍镜观察，高倍镜下