医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法及医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则

医疗机构临床基因扩增检测实验室管理办法卫生部卫办发2010194号郑怡发第一章一般原则第一条为了规范医疗机构临床基因扩增检测实验室的管理，保证临床基因扩增检测质量和实验室生物安全，保证临床诊疗的科学性和合理性，根据医疗机构管理条例、医疗机构临床实验室管理办法、医疗技术临床应用管理办法，制定本办法。第二条临床基因扩增检测实验室是指通过特异性dna或rna的扩增和检测，进行疾病诊断、治疗监测和预后判断的实验室。医疗机构实行集中设置和管理。第三条本办法适用于开展临床基因扩增检测技术的医疗机构。第四条卫生部负责全国医疗机构临床基因扩增检测实验室的监督管理。省级卫生行政部门负责本行政区域内医疗机构临床基因扩增检测实验室的监督管理。第五条科研用基因扩增检测项目不得向临床出具检测报告，不得向患者收取任何费用。第二章实验室检查和设置第六条医疗机构应当向省卫生行政部门申请设立临床基因扩增检测实验室，并提交下列材料：责验收行政部门执业许可证(a) 医疗机构执业许可证份；(二)医疗机构的基本情况、拟设立的临床基因扩增检测实验室的计划、拟开展的检测项目、实验设备、设施条件及相关技术人员信息；(3)临床基因扩增检测需求和临床基因扩增检测实验室运行预测分析。第七条省级临床检测中心或省级卫生行政部门指定的其他机构(以下简称省级卫生行政部门指定的机构)负责组织医疗机构临床基因扩增检测实验室的技术检查。第八条省级临床检测中心或省级卫生行政部门指定机构应制定医疗机构临床基因扩增检测实验室技术考核办法，建立相关专业专家库，并按照医疗机构临床基因扩增检验工作导则对医疗机构进行技术考核。技术考核办法报省卫生行政部门批准后实施。第九条医疗机构经省级临床检验中心或者省级卫生行政部门指定的机构组织的技术检验合格的，应当凭技术检验报告，向省级卫生行政部门登记相应诊疗科目的检验项目。第十条省级卫生行政部门应当按照医疗机构临床实验室管理办法和医疗机构临床检验项目目录的规定对医疗机构进行临床基因扩增检测项目登记。第十一条基因扩增检测实验室的设立应当符合国家生物安全实验室的有关规定。第三章实验室质量管理第十二条医疗机构在省级卫生行政部门登记临床基因扩增检测项目后，方可进行临床基因扩增检测。第十三条医疗机构临床基因扩增检测实验室应当按照医疗机构临床基因扩增检验工作导则进行临床基因扩增检测。第十四条医疗机构临床基因扩增检测实验室的人员，经省级以上卫生行政部门指定的机构技术培训合格后，方可从事临床基因扩增检测。第十五条医疗机构临床基因扩增检测实验室应当按照医疗机构临床基因扩增检验工作导则进行实验室室内质量控制，并参与卫生部临床检测中心或指定机构组织的实验室间质量评价。临床试验中心或指定机构第十八条省级以上卫生行政部门指定的机构应当对跨部门质量评价不合格的医疗机构临床基因扩增检测实验室给予警告。医疗机构临床基因扩增检测实验室连续2次或3次检测结果不合格的，由省卫生行政部门责令暂停相关临床基因扩增检测项目，限期整改。整改后，临床基因扩增检测项目必须通过指定机构组织的复检后方可复检。第十九条医疗机构擅自开展临床基因检测项目的，由省卫生行政部门依据医疗机构临床基因扩增检验工作导则第47条和医疗机构管理条例第80条予以处罚，并予以公告。公告所需费用由公告的医疗机构支付。第二十条医疗机构临床基因扩增检测实验室有下列情形之一的，由省卫生行政部门责令停止开展临床基因扩增检测项目，并予以公告。公告所需费用由公告的医疗机构支付：(一)超出省卫生行政部门批准的范围开展临床基因扩增检测项目的；(二)使用未经国家食品药品监督管理局批准的临床检测试剂进行临床基因扩增检测的；(三)临床基因扩增试验中未进行实验室室内质量控制的；(四)未参与临床基因扩增试验实验室间质量评价的；(五)在临床基因扩增检测中弄虚作假的；(六)以基因扩增检测项目的科研为目的向患者收取费用；(七)使用未经培训合格的专业技术人员从事临床基因扩增检测。(八)严重违反国家实验室生物安全有关规定或者不具备实验室生物安全条件的。第五章补充规则第二十一条本办法自发布之日起施行。医疗机构管理条例实施细则(卫200210号)同时废止。附加医疗机构临床基因扩增检测实验室指南一、临床基因扩增实验室的设计(1)临床基因扩增检测实验室区域设计原则。原则上，临床基因扩增检测实验室应设置以下区域：试剂储存和制备区、标本制备区、扩增区和扩增产物分析区。这四个区域在物理空间中必须完全相互独立。无论在太空中还是在使用中，每个区域都应该处于完全分离的状态，没有空气的直接交流。根据所用仪器的功能，可以适当地合并这些区域。例如，使用实时荧光pcr仪，扩增区和扩增产物分析区可以结合；使用集成了样品处理、核酸提取和扩增检测的自动分析仪，样品制备区、扩增区和扩增产物分析区可以合并。每个区的职能是：1.试剂储存和制备区：储存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备，以及离心管和吸头等消耗品的储存和制备。2.样品制备区：核酸(rna，dna)提取，储存和添加到扩增反应管。涉及临床样本的操作应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。3.扩增区域：cdna合成、dna扩增和检测。4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析和测定，如杂交、酶消化电泳、变性高效液相分析、测序等。(2)临床基因扩增检测实验室的气流方向。临床基因扩增检测实验室的气流方向可根据试剂储存和制备区域标本制备区域扩增区域扩增区域进行(5)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和进样器尖端。(6)特殊工作服和工作鞋(套)。(7)特殊办公用品。2.样品制备区。(1)2-8冰箱，-20或-80冰箱。(2)高速离心机。(3)搅拌机。(4)水浴箱或加热模块。(5)微量进样器(覆盖0.2-1000升)。(6)可移动紫外线灯(靠近操作台)。(7)生物安全柜。(8)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和样品进料器吸头(带过滤元件)。(9)特殊工作服和工作鞋(套)。(10)特殊办公用品。(11)如果需要处理大分子dna，应提供超声波水浴仪。3.放大区域。(1)核酸扩增仪。(2)微量进样器(覆盖0.2-1000升)，(视情况而定)。(3)可移动紫外线灯(靠近操作台)。(4)消耗品：一次性手套、耐高压离心管和样品进料器吸头(带过滤元件)。(5)特殊工作服和工作鞋。(6)特殊办公用品。4.扩增产物分析区。根据检查方法，基本配置如下：(1)微量进样器(覆盖0.2-1000升)。(2)可移动紫外线灯(靠近操作台)。(3)消耗品：一次性手套、进样器吸头(带过滤元件)。(4)特殊工作服和工作鞋。(5)特殊办公用品。上述区域性仪器设备基本具备，实验室应根据自身扩增检测技术或试剂的特点，对仪器设备进行必要的增减。二、临床基因扩增实验室工作的基本原则(a)进入每个工作区应严格按照一个方向进行，即试剂储存和制备区标本制备区扩增区扩增产物分析区。(2)每个工作区域必须有清晰的标记。不同工作区域的设备和物品不得混合。(3)不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工人离开每个工作区时，不允许脱掉工作服。(4)实验室应按试剂储存和制备区标本制备区扩增区扩增产物分析区的方向进行清洁。不同的实验区应该有自己的清洁工具来防止交叉污染。(5)工作结束后，必须立即清理工作区域。工作区内的测试台表面应能承受次氯酸钠等化学品的消毒和清洁效果。实验台表面的紫外线辐射应方便有效。由于紫外线照射的距离和能量对去污效果至关重要，因此可以使用一个可移动的紫外线灯(波长254纳米)，并在工作完成后将其调节到照射在实验台上60 90厘米范围内。由于扩增产物只有几百或几十个碱基对(bp)，并且对紫外线损伤不敏感，所以扩增片段的紫外线照射必须延长照射时间，优选过夜。(6)实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，均符合临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 (gb19489-2008)。三、临床基因扩增试验各地区实验室工作注意事项(a)试剂储存和制备区。用于标本制备的储存试剂和消耗品等材料应直接运送至试剂储存和制备区，不得通过扩增检测区。试剂盒中的阳性对照物质和质量控制物质不得储存在该区域，但应储存在标本处理区域。(2)标本制备区。由于气溶胶污染可能发生在样品混合和核酸纯化过程中，通过在该区域建立正压条件，可以避免气溶胶污染从邻近区域进入该区域。为了避免样品之间的交叉污染，在加入待测核酸后，必须覆盖含有反应混合物的反应管。对于具有潜在感染风险的材料，必须在生物安全柜中打开盖子，并有清晰的样品处理和灭活程序。(3)扩增区。为了避免气溶胶造成的污染，我们应该尽最大努力减少在这个地区的行走。必须注意，不得在该区域打开所有测试的反应管。(4)扩增产物分析区。有多种方法用于分析扩增的核酸产物，例如膜或微孔板或芯片上的探针杂交(放射性核素标记或非放射性核素标记)、直接或后酶琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、southern转移、核酸测序法、质谱法等。该区域是扩增产物的主要污染源，因此必须