实验4 细菌革兰氏染色法ppt课件

实验4细菌革兰染色法，CentralLaboratoryofBiology，实验4油镜使用和细菌革兰染色法，微生物学实验，实验4细菌革兰染色法，课前问题和目的要求，课前问题，1。油镜的特点和使用范围是？革兰染色的原理是什么？目的要求，1 .学习和掌握油镜的原理和使用方法。请理解革兰氏染色的原理。学习和掌握格兰姆染色方法。实验4细菌革兰染色法，基本原理，1。油镜改进分辨率油镜与其他物镜不同，在幻灯片胶片和物镜之间有油层。香和沥青的折射率n=1.52与玻璃相同。光不会减少视野中的照明。主要可以增加光圈，提高显微镜的放大性能。分辨率=/2 nas=光波导(物镜的数值孔径值)na=nsian =镜口的半知n(介质折射率)对提高显微镜的分辩力有重要作用。实验4细菌革兰染色法，2 .革兰染色法可以将细菌分为革兰阳性(G)和革兰阴性(G-)两种，细菌对革兰染色的反应不同，是因为细胞壁的成分和结构不同。首先使用草酸铵结晶紫，所有细菌都穿结晶紫的蓝紫色。然后，以卢戈碘作为媒染剂，碘和结晶紫形成碘-结晶紫复合物，加强了染料在细菌中的停留能力。之后将95%的乙醇用作脱色剂时，两种细菌的脱色效果不同。实验4细菌革兰染色法革兰阳性细菌细胞壁肽酶含量高，壁厚和脂质含量低，肽聚糖本身不结合染料，但具有可保留碘结晶紫复合物的网状结构，但目前通过乙醇处理，肽聚糖网收缩，碘结晶紫复合物停留在细胞壁上，菌体保持原来的蓝紫色。革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄，脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原细胞壁中残留的碘-结晶紫复合物容易溶出，菌体无色，用像番红一样的利盐剂染色，然后转化为利盐剂颜色(红色)。基本原理，实验4细菌革兰氏染色法，图4-1革兰氏阳性细菌和阴性杆菌细胞壁比较，实验4细菌革兰氏染色法，实验用品，菌株：大肠杆菌16h牛肉奶油蛋白胨琼脂斜面培养物，葡萄球菌16h牛肉奶油蛋白胨1千试剂：革兰染料、草酸铵结晶紫染料、卢戈碘、乙醇95%、板红复水染料等。仪器及其他用品：酒精灯、幻灯片、显微镜、双瓶(包括香和二甲苯)、擦镜子纸、接种环、试管架、镊子、幻灯片夹、幻灯片支架、滤纸、滴管、无菌生理盐水等。实验4细菌革兰染色法，【方法步骤】，1。涂层：大肠杆菌(16h)和金黄色葡萄球菌(16h)分别涂层、干燥和固定。2.染色：1)初盐：一滴草酸铵结晶紫(最好是盖上菌膜)，染色1 2分钟后，倒入染色溶液，冲洗，直到出水无色。2)媒染物：用卢戈氏碘去除残余物后，用碘复盖1分钟，倒入碘，用水冲洗，直到水无色。脱色：将幻灯片上的残留物用滤纸吸干(为了防止菌被擦掉，从边缘吸出)，倾斜幻灯片，以白色背景用95%乙醇冲洗，直到几乎没有紫色为止。大约20-30秒，立即冲向乙醇。实验4细菌革兰染色法，方法步骤，4)再矿化：将玻璃碎片中残留的水吸到吸水纸中，用粉红复合液染色2分钟，冲洗，吸干残留物(图4-1)。显微镜检查：干燥后，观察油镜。以分散的细菌颜色为标准，革兰阳性菌为紫色，革兰阴性杆菌为红色。4.混合制作观察：第一张幻灯片上混合了两种细菌制作的比较观察。细菌年龄和脱色程度对染色结果影响很大。，实验4细菌革兰染色法，方法步骤，a .早期染色b .洗涤c .介质染料d .洗涤e .脱色f .洗涤g .染色h .洗涤I .吸入干图4-1革兰染色程序，实验4细菌革兰染色法，方法步骤，这一实验成功的关键(2)涂布不要太厚，以免脱色完全假阳性。(3)脱色是革兰染色成功与否的关键，脱色不足以产生假阳性，脱色产生假阴性。实验4细菌革兰染色法，实验结果，图4-2大肠杆菌染色结果图4-3大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合染色结果，实验4细菌革兰染色法，注意事项，涂层不能太厚以免脱色完全变成假阳性；火焰固定不能过热(幻灯片不是热冲压)。加热时请使用幻灯片夹和试管夹，以免烫伤。使用染料时要注意不要沾衣服。使用乙醇脱色时，不要接近火焰。实验后洗手。实验4细菌革兰染色法，【实验报告】，1。结果1)画出了在遗经下观察到的混合区细菌的图像。(2)填表，表4-1结果记录表，实验4细菌革兰染色法，2。沉思问题1)革兰氏染色成功吗？有什么问题需要注意？为什么？2)一株目前不为人知的细菌比大肠杆菌大得多，怎样鉴定它是革兰阳性还是革兰阴性？(？3)为什么革兰氏染色是假阴性？(？4)你认为革兰染色法可以省去哪些