第二章+玻片标本制作技术.ppt

第二章生物玻片标本制作技术,第一节生物玻片标本制作方法第二节植物材料玻片标本制作技术第三节动物材料玻片标本制作技术,第一节生物玻片标本制作方法,从保存时间长短分，有临时玻片标本和永久玻片标本。从制作的方法来分，有涂片、压片、装片(也叫整装法)、磨片和切片等。,一、切片法,简单、省时、容易掌握，有一定局限性，但至今在生物学教学中仍然是观察形态构造的一种基本切片方法。（1）材料和夹持物（2）材料的持法（3）持刀方法（4）切片（5）取片（6）选片、装片,1.徒手切片法,切片法即用刀片将材料切成薄片的方法。,切取的标本,材料和夹持物,滴水,放置标本,加盖盖玻片,叶的横切,所使用的支持剂是石蜡，优点是切下的片子薄而匀，还能作连续切片，但制作手续较复杂。几个重要环节步骤如下：(1)固定其目的在于保存组织中各细胞的形态结构和生活时相似；必须对固定液的选择、固定材料的性质、大小和固定的时间以及研究的目的等加以注意。(2)冲洗(3)脱水酒精是最常用的脱水剂，把酒精配成不同梯度的浓度缓慢进行。(4)染色(5)浸蜡将已透明的材料投入熔化的石蜡中，取代透明剂，使组织中空隙为石蜡透入而填满；,2.石蜡切片法,(6)切片用石蜡包埋块包埋的石蜡块，经修整后一般使用旋转式切片机进行切片；(7)透明透明在两种情况下进行。第一，透明是在组织脱水后浸蜡前进行，其目的不在于为了显微镜观察，而是作为从脱水剂进入包埋剂的桥梁。因此，透明剂必须既能与酒精混合，又能与石蜡融合无间，二甲苯即具此性质，故被选为常用的透明剂。第二，透明是在片子脱水与封藏之间进行。其目的除了作为从脱水剂进入封藏剂的桥梁外，尚有使标本透明而便于观察的作用。(8)封藏常用的封藏剂有树胶和甘油等。封藏的目的在于使切片能永久保存便于镜检。,火棉胶切片法所使用的支持剂是火棉胶。这种方法的优点是包埋过程不经高温，可以避免组织收缩及变脆，适用精细材料(如脑)的切片，也因火棉胶有韧性，切片不致有折卷或破裂，适于大块组织及多空洞的组织(如脑、眼球)的切片。,3.火棉胶切片法,4.冰冻切片法,冰冻切片法是将已固定或新鲜组织块不经脱水和包埋先进行冰冻，然后在切片机上切片的一种方法。这种方法的优点是：1.制片速度快，因此常用于临床上的病理手术诊断；2.能保存组织内某些易被有机溶剂所溶解的物质，例如脂肪和酶等。同时还可以防止组织块的收缩保持原形。缺点：所切片子较厚，又不能作连续切片还有易碎的毛病。,是一种将游离的细胞，动、植物中比较疏松的组织均匀地涂布在载玻片上的一种制片方法。涂片材料有单细胞生物、小形藻类、血液，含有细菌的培养液以及精巢、花药等,二、非切片法,1.涂片法,将植物或动物比较疏松的材料，如花药、根尖、水螅，蠕虫的精巢、果蝇(或其他双翅目)幼虫的唾液腺等，用较小的压力压碎在载玻片上使成一薄层的一种制片法。,2.压片法,微小的生物如衣藻、水绵、青霉、变形虫和水螅等可以直接作为装片的材料植物的叶表皮、鳞茎表皮等；动物中如昆虫的翅、腿、口器等；人的口腔上皮细胞等都是从整个器官上取其一部分作为装片材料，可制作成临时或永久装片，进行观察。,3.装片法,悬滴玻片是将培养在盖玻片上溶液里的活材料(如变形虫的运动、细菌的活动、花粉的萌发等)封闭在载玻片的小室里，供观察它们活动的一种玻片标本。,4.悬滴法,一些含有矿物质的比较坚硬的动物组织要作成玻片标本时，常把材料直接放在砂石上磨成薄片，此法即为磨片法。如珊瑚的骨骼、软体动物的贝壳，脊椎动物的硬骨、角以及牙齿等都可以用此法制成玻片标本。,5.磨片法,第二节植物材料玻片标本制作技术,一、常用实验种子植物的制片方法(一)洋葱表皮装片(二)洋葱根尖纵切片(示细胞有丝分裂),洋葱表皮细胞,洋葱根尖细胞,南瓜茎纵切片,蚕豆幼根横切,(三)蚕豆根横切片(四)南瓜茎纵切片及横切片,二、常用实验孢子植物的制片方法(一)衣藻装片(二)团藻装片,衣藻装片,团藻装片,藓原丝体装片,（三）细菌三型涂片（四）地钱生殖托纵切片（五）藓原丝体装片,细菌三型涂片,第三节动物材料玻片标本制作技术,一、草履虫装片二、水螅的整体装片和横切