艾滋病、梅毒和乙肝讲稿.ppt

1,艾滋病、梅毒和乙肝的实验室诊断,内江市妇幼保健院副主任检验师项明电话2380579,2,艾滋病、梅毒和乙肝的实验室诊断培训的目的,对临床医生：1.检测有哪些方法2.哪个情况下采用什么检测方法最好。对检测人员：1.建立实验室的要求2.检测有哪些方法3.检测的质量控制,3,梅毒实验室诊断,4,1988-2006年全国梅毒报告发病率和胎传梅毒报告发病率,5,6,2008年全国梅毒发病地图,7,梅毒的临床分期,一期梅毒：梅毒螺旋体（TP）感染人体后，平均潜伏期3周形成硬下疳（一期皮损），后14周血中可测出抗体。二期梅毒：68周后，TP经淋巴系统进入血液系统，可引起皮肤粘膜、骨骼、眼等器官及神经系统受损，产生大量抗体。晚期梅毒：感染2年以上，心血管、中枢神经系统受损。,8,9,10,11,TP传播,TP可经性、血、胎盘而传播妊娠7周时，TP可通过胎盘只是少数患者才出现皮损,12,梅毒实验室诊断,13,暗视野检查,暗视野映光检查采用一个特殊聚光器，其中央为黑漆所遮蔽，光线仅可从四周边缘斜射到载玻片上。若载玻片上有细菌、螺旋体等微粒，由于固体微粒与周围液体折光率不同而引起散射，造成微粒在暗视野下为发光体。,14,取材方法,皮肤粘膜取材：首先在净净的载玻片上放12滴生理盐水备用。用棉拭子蘸取无菌生理盐水轻轻擦去皮损上污物，如皮损上有痂皮，可用钝刀轻轻刮去。用手挤压皮损周围，使组织浆渗透出，在其表面用钝刀轻轻刮取数次（避免出血），将渗透液混入载玻片盐水中。加上盖玻片后置显微镜检查。,15,16,17,18,19,其它取材方法,淋巴结取材羊膜穿刺术,20,TP镜下形态,特征：暗视野下是非常小的纤细的发光体长约614um,814个规则、紧密的螺旋典型的运动方式：蛇形伸缩式螺旋式,21,暗视野检查临床意义,1.获得性或先天性梅毒的早期进行直接诊断的唯一标准2.当标本阴性时，不能排除梅毒诊断,22,注意事项,取材前，应用无菌等渗盐水清洁皮损表面钝刀要消毒，取材时避免出血。取材后应立即置镜下检查。要观察到螺旋体的形态特征和运动方式，应与其它疏螺旋体相区别。如未观察到TP，并不能完全排除梅毒感染的可能性，应嘱病人复查.。,23,二、梅毒血清学试验,非螺旋体抗原血清学试验：RPR、USR、TRUST、VDRL试验缺点：敏感性稍低，可出现假阳性优点：可观察疗效、出结果快，操作简单。VDRL试验可用于检查神经梅毒,24,（一）RPR试验,TP感染人体后3-4周产生的抗心磷脂抗原的反应素（主要是IgM和IgG抗体）临床意义：疗效观察,25,步骤,在2-6位圆圈各加等渗盐水50l。吸50l血清标本加入第1位为原倍血清，再吸50l血清至第2位，作倍比稀释至1:32或更高。将RPR抗原悬液轻轻摇匀，垂直滴加抗原悬液。置振荡上8分钟，立即在明亮光线下参照对照标准卡用观察结果。,26,RPR,27,注意事项,在23-29环境中，抗原悬液4保存，试验前恢复至室温。专用针头，垂直加样。应在3分钟内观察结果,28,临床意义,RPR等试验一般认为是梅毒初筛试验，阳性者，均需作确证试验。VDRL用于神经梅毒诊断。有些疾病可导致生物学假阳性。复发或再感染可阳转或滴度升高。为疗效观察、判愈方法。早期梅毒治疗后血清滴度应下降4倍认为治疗有效,29,(二)梅毒螺旋体抗原血清学试验,荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）酶联免疫吸附试验（ELISA）其它,30,梅毒螺旋体抗原血清学试验,优点：特异性高，可作确证，FTA-ABS试验一期梅毒敏感性高，可用于母体梅毒与胎儿梅毒的区别。缺点：不能观察疗效、再感染,31,梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）,向反应板微孔内加血清稀释剂，第1孔100ul,第2，3，4孔各25ul。吸取被检血清25ul至第1孔，反复混匀后，取25ul至第2孔，连续倍比稀释至第4孔，混匀后弃去25ul.向第3孔内滴加未致敏明胶悬液1滴（25ul）。向第4孔内滴加致敏明胶悬液1滴（25ul）。用手轻轻拍击，混匀。将反应板置湿盒内，室温（22-29）孵育2小时，观察结果。,32,梅毒螺旋体明胶凝集试,33,结果判断,34,注意事项,试验在室温（22-29）环境中进行。用手轻拍、用力均匀，防止孔内液体流出,振荡要充分。未致敏反应孔出现疏散覆盖孔底时，说明阴性对照出错，应寻找错误原因并重作试验。反应孔应清洁，否则影响反应结果观察。,35,FTA-ABS试验,36,梅毒确证试验的临床意义,RPR：RPR等试验可用于大标本量的筛查？RPR定量可排除生物学假阳性？RPR是疗效判定的指标RPR是疗后随访的指标RPR用于判定是否血清复发,TPPA：是金标准TPPA等试验是确诊指标在HIV感染者中，血清学试验可发生难于解释的现象，若怀疑梅毒感染应作HIV检查,37,38,胎传梅毒的实验室诊断,暗视野查见TP。RPR等滴度持续上升。RPR滴度等于或高于母亲4倍。荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）IgM特异抗体阳性。,39,40,神经梅毒的实验室诊断,RPR等试验阳性。TPPA阳性。CSF常规：WBC计数10*10/L蛋白量500mg/LCSF：VDRL阳性可FTA-ABS阳性,41,隐性梅毒的实验室诊断,RPR等试验阳性。TPPA阳性。CSF正常,42,疗后梅毒血清学试验的随访,方法:RPR时间：第1年，每3个月检查1次第2年，每6个月检查1次第3年，最后1个月检查,43,妇幼系统常用的HIV试验检测技术,44,内容,一、HIV快速检测二、核酸检测在母婴传播中的应用三、如何申报HIV检测点,45,检测试剂与方法,1.胶体金、硒标。2.ELISA3.核酸检测3.免疫印迹试验（WB）。,46,全球儿童艾滋病流行概况,2008年全球估计有43万儿童新近感染上HIV，其中90%是通过母婴传播WHO报道每年估计有40万婴儿感染HIV，主要发生在分娩时.,47,2008年全球接受预防母婴传播治疗的艾滋病阳性孕妇比例从2007年的33%提升到45%自2001年以来HAART疗法的实施使20万婴儿免受艾滋病病毒感染,48,2/3的孕妇由于不能获得抗病毒治疗药物而被感染上HIV.UNAIDS提出一个重要目标是在2015年前消除HIV的母婴传播,49,50,51,52,窗口期,从HIV感染到产生HIV抗体这段时期称为“窗口期”。大多在1-3个月出现抗-HIV抗体，“窗口期”一般为3个月。统计学证实，95%的HIV感染者在感染后的5.8个月之内抗体阳转。,53,18个月以上的儿童及成人的HIV诊断,对成人进行HIV感染诊断的最佳方法是对血液中的病毒抗体进行检测。所有的HIV感染者体内都会产生针对HIV的抗体。这种抗体是针对病毒的特定蛋白而生成的，对HIV而言是独一无二的。感染者终生都会带有这种抗体,54,55,HIV快速检测,56,加样,结合物,对照行,检测行,IgG抗体HIV抗体,与胶体金结合的HIV抗原,抗-IgG/胶体金抗体,HIV抗原,原理:测式流过装置,57,9.阴性结果,10.阳性结果,58,快速检测操作规范雅培硒标法,59,5.采血量约2-4毫升,8.往试纸滴一定量血浆开始计算反应时间，在试剂要求时间内读取结果，超时无效,7.用吸管取上层血浆,6.使采血管直立静置1个小时以上血液会分离沉淀，下层为分离出的红细胞和其他成分,快速检测操作规范,60,快速检测结果的影响因素,试剂质量环境温度样本质量：融血严重、使用抗凝血、样本量结果判读时间操作人员个体差异,61,关于报告,1.阴性可直接除阴性报告,但要进行必要的咨询,最好能了解到近期有无高危行为.2.阳性结果送CDC进行复检或确证,确证结果未出之前一定不要告之受检者结果.3.筛查结果没有不确定结果,62,婴儿的HIV检测报告,（1）婴儿满12个月进行第一次HIV抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，报告“HIV抗体阴性（）”，可排除感染。检测结果出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除感染，应继续追踪随访，至儿童满18个月时再次进行HIV抗体检测。,63,64,65,快速试剂保存条件,1.可以2-30，有稀释液的快速试剂，建议保存在2-8冰箱2.试剂进出一定要有记录,包括试剂效期、批号、接受人等3.每天保存试剂冰箱温度,66,核酸检测,67,核酸检测,婴儿的早期诊断实验室检测方法：常用的有PCR、VL、DBS等HIV感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV核酸检测均为阳性即可作出诊断。有急性HIV感染综合症或流行病学史，且不同时间的两次HIV核酸检测结果均为阳性，即可诊断。18个月龄以上儿童诊断与成人相同,68,检测程序,于婴儿出生后6周（42天）采集第一份血样本（血样本可制备成DBS或EDTA抗凝全血），送检。若第一份血样本检测呈阳性反应，尽快再次采集第二份血样本进行检测。若两份血样本检测均呈阳性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”，诊断儿童HIV感染。,69,若第二份血样本检测呈阴性反应，待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。若第一份血样本检测呈阴性反应，继续提供儿童保健和随访服务，待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。,70,若婴儿满3个月再次检测呈阴性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”，按照未感染儿童处理，继续提供儿童保健随访服务；于儿童满12个月时，按照“HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”（图4），开始HIV抗体检测，最终确定儿童感染状态,71,如何申报HIV检测点,2-8冰箱10-100UL移液器孵育恒温箱22或空调试管架防护服和一次性手套人员资格培训,72,1.人员条件：,至少由2名医技人员组成，具有中级卫生技术职称的人员至少有1名。接受过省级或市级以上HIV检测专项技术培训，并获得合格证书。,73,检测点：由市专家验收内容包括人员、基本设备、相关制度等符合条件的报当地卫生局审批、报省疾控中心确证中心实验室备案,74,检测结果的报告和处理,筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查报告”（附表2），结论为“待复查”，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理：,75,HBV实验室检测,76,内容,现状特异性诊断指标及其临床意义实验室诊断预防,77,现状,HBV感染仍是全球公共卫生问题，20亿人曾感染HBV占全球人口1/315-25%最终死于与HBV有关的肝癌每年因HBV相关死亡100万例,占死因第7位本病主要通过血液、母婴和性接触