生物：1.2《基因工程的基本操作程序》教学新人教版选修3课件

,B,B,A,C,C,F,D,E,复习1：原核细胞的基因结构,复习：真核细胞的基因结构,B,B,A,C,F,D,E,原核细胞的基因结构,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,与RNA聚合酶结合位点,启动子,终止子,编码区,非编码区,编码蛋白质,连续不间断,不编码蛋白质，有调控作用,真核细胞的基因结构,编码区,非编码区,外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列,不编码蛋白质，有调控作用,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,外显子,内含子,与RNA聚合酶结合位点,IMN,一目的基因的获取,第二节基因工程的基本操作程序,IMN,(一)目的基因：,编码蛋白质的结构基因；,(二)获取目的基因的常用方法,从自然界已有的物种中分离,用人工的方法合成,1.从基因文库中获取目的基因,(1)基因文库的概念,将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。,(2)基因文库的类型,基因组文库和部分基因文库,(3)基因文库的构建,析1反转录法,mRNA,cDNA(互补DNA),双链DNA,反转录酶,DNA聚合酶,析2如何从基因文库中得到所需要的基因,依据目的基因的有关信息,IMN,(1)PCR聚合酶链式反应,是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可在短时间内获取大量的目的基因。,2.利用PCR技术扩增目的基因,模板DNA；合成引物；四种脱氧核苷酸；DNA聚合酶等。,(2)原理：,DNA双链复制,(3)前提：,一段已知目的基因的核苷酸序列,(4)条件：,(5)过程：,变性、退火、延伸三步曲,(6)结果：,以指数形式扩增,变性,退火,延伸,3.通过DNA合成仪用化学的方法直接人工合成,若基因_，核苷酸序列_。,较小,已知,1.作用,使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代,同时使目的基因能表达和发挥作用,二基因表达载体的构建核心,IMN,目的基因,2.组成,启动子,终止子,标记基因,三将目的基因导入受体细胞,（一）转化：,目的基因进入_内，并且在受体细胞内维持_和_的过程,受体细胞,稳定,表达,（二）方法：,1.将目的基因导入微生物细胞,3）常用法：,2）常用菌：,1）微生物作受体细胞原因：,繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少,4）过程：,Ca2+处理大肠杆菌,感受态细胞,表达载体与感受态细胞混合,感受态细胞吸收DNA,大肠杆菌,Ca2+处理,2.将目的基因导入植物细胞,1）农杆菌转化法,特点:,过程：,能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力,Ti质粒的TDNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上,提纯含目的基因表达载体,取受精卵,显微注射,培养成早期胚胎,发育成新性状动物,3.将目的基因导入动物细胞显微注射技术,1）细胞类型：,2）操作程序:,移植到子宫或输卵管,导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？,四目的基因的检测与鉴定检查是否成功,真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。,目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？,不一定,受精卵,1.检测,1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因,方法,基因探针：,15N,15N,14N,14N,探针,转基因生物的DNA,变性,变性,DNA分子杂交技术,放射性同位素等标记的DNA分子,2）检测目的基因是否转录出了mRNA,方法分子杂交技术,15N,15N,14N,14N,探针,转基因生物的mRNA,变性,3）检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法抗原-抗体杂交,2.鉴定个体生物学水平的鉴定,抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,(2)动植物细胞除去内含子,商标注册注册商标商标注册注册商标prz82nsr吗？葱大麻油大，饺子包成拳头大！大饺子才好吃呢！”耿正停止了笑，说：“婶子辛辛苦苦包了小饺子，我们不应该笑的。婶子，对不起。您辛苦了！”耿英也停止了笑，说：“婶子，我并没有多和馅儿啊，面团和馅儿的比例差不多的。饺子大了才能包得进去馅儿！您剩了馅儿，咱可就得多吃皮儿了啊！”李妻恍然大悟，说：“可不是耶，辛苦做了傻事儿了！剩了足有三分之一的馅儿呢！”耿英说：“如若不信，您把剩的馅儿带回去，明儿个再包一些大饺子吃吃，看看大的小的，哪个更香！”李妻说：“我信，我信，你们这样一说，我就都明白了！明年儿的八月十五，我一定给咱们包大饺子吃！来来来，大家快吃吃大杂烩菜，看我做得怎么样，不会还带有南方菜的味道吧！”大家吃吃，都说挺好，是北方菜的味道！耿直还加了一句：“我吃着怎么有点儿就像是我们当年那个南北小饭庄里大杂烩菜的味道呢！”转头问李老乡：“叔叔，您说是不是？”李老乡点点头，十分肯定地说：“是有南北小饭庄里大杂烩菜的味道，很香！”李妻高兴地说：“这一手我可真学会了，以后会经常给你做的，省得你老想老家，想老家的大杂烩菜！”大家高高兴兴吃完饭后，耿英拦住准备拾掇碗筷的李妻，说：“婶子，您送弟弟妹妹上学去吧。有一截子路呢。刚吃完饭，路上走慢点儿！”小腊梅听了耿英这话，就“咯咯咯”地笑了，说：“就是嘛，我吃得这么饱，走快了会肚子痛的！”李妻笑着拍拍小腊梅的脑袋，说：“好，那我们这就走了！”于是，耿英一人麻利地拾掇洗涮，李老乡、耿正和耿直也一起出门往店铺里去了。虽然已经是中秋时节了，但江南的天儿，还是说变就变。那日午饭后还是大太阳呢，但到了日头西斜时分，由东南方向缓慢飘来的大片云层逐渐将整个天空都覆盖了起来。当老乡四人准备关门闭铺时，杭州境界早已经是一个完完全全的大阴天儿了。看着有些个昏昏暗暗的街道，李老乡对耿正兄妹三人说：“这里不像咱们老家，大多数年份里都看不到中秋圆月，像去年那样的赏月机会是很少见的。唉，也罢，这老天爷的事情，谁又能管得了呢。回去吧，晚上少看一会儿书，早点儿歇息啊！”耿正兄妹三人都点头答应。耿正说：“那我们回去了。叔您慢走啊！”站在自家的店铺门口看着兄妹三人拐个弯儿回住地去了，李老乡这才转身快步往家里赶去。兄妹三人回到租住的小院儿后，像往常一样，耿正