医疗器械微生物检验

.1，医疗器械微生物限度检查，2，概述，微生物限度检查法规定制无规定的灭菌制剂及其原料、辅料的微生物污染程度的检查方法。微生物限度检查，细菌，真菌种群，控制细菌，3，概述，微生物：微小的身体，简单的结构，通常通过光学显微镜和电子显微镜可以看到明确的生物学特性：1，微型，普通0.1毫米2，简单的结构，单细胞，简单的多细胞，简单的，5，概述、医疗用品的分类根据医疗用品和人体接触的性质及人体使用安全要求分为三类。a) 医疗用品：接触人体完整皮肤的医疗用品b) 医疗用品：接触人体完好的粘膜的医疗用品c) 医疗用品：接触人体无菌组织、器官和血液、受损皮肤和粘膜的医疗用品6，常用检查标准，2010年版附录XIJ，微生物限度检查，8，实验条件，无菌操作技术实验环境实验设备，9，无菌操作技术，微生物学基本微生物实践基础无菌操作认识，10，实验环境，清洁度10000级的本地清洁度100级的单向流动空气区或隔离系统；根据当前国家标准GB/t 16292-16294: 2010 中华人民共和国药典验证清洁度：在实验过程中监测：在实验台上打开试验时准备的营养琼脂板，在30 35下培养48h，殖民地平均值必须低于1cfu/90mm，直到实验结束。11，实验仪器、仪器超净工作台、光学显微镜、恒温培养基、压力蒸汽灭菌器、薄膜过滤装置、浊度仪等。仪器试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、吸管、精密PH试纸、过滤杯、剪刀、镊子、灭菌服、牛皮纸等。12，实验准备，实验环境保证实验测试培养基灭菌方法，13，实验环境保证，环境清洁，表面消毒(75%(V/V)乙醇，尼日尔消化(1:000)溶液或其他合适的消毒溶液)空气过滤系统，紫外线灯或臭氧空气消毒器，14，实验测试试验，稀释剂1.0.9%氯化钠溶液2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液，pH7.6无菌磷酸盐缓冲液3.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：pH到中性附近进行仲裁，其中蛋白胨有助于保护细菌细胞和控制细菌数量。表面活性剂，中和剂或灭活剂确认用试剂1。靛蓝基质试验液2.1%二盐酸试验液(氧化酶试验)3。三氯甲烷4.1mol/l盐酸试验，15，培养基，标准菌株处理及增菌剂培养基选择培养基识别培养基，16，16。培养基、培养基的ph值必须满足细菌生长要求。应根据各种培养基的要求准确测量pH值。适合大多数细菌生长的pH值为7.2 7.6。酵母真菌(6.0 6.5)。可用于调整的1NHCl或NaOH。培养基的杀菌时间和温度应按照各种培养基的规定进行，以免失去灭菌效果及其培养基必需的营养成分。为了观察细菌的生长特性和其他代谢活动引起的变化，制造的培养基必须透明。17，灭菌方法，湿热：115 121，15 30分钟物品立即去除冷冻室，防止杀菌物品的蒸汽冷凝发生负压，产生感染菌。干热：160 170，2h适用于高温玻璃、陶瓷或金属产品的杀菌。灭菌程序需要验证。18，应检查系数培养基的适用性，细菌、真菌和酵母系数培养基的适用性，检查成品培养基、脱水培养基或处方的制剂。，19 .系数徽章一致性检查，菌株e scherichia coliCMCC(b)44102staphy loccus aureusCMCC(b)260003Bacillus subtilis，20，系数培养基适宜性检查，细菌新鲜培养物(一般18h24h，白色阅读24h48h，曲霉57天)，0.9%无菌氯化钠溶液，每毫升50cfu100cfu细菌悬浮液细菌悬浮液应在室温下保存2小时内，在2 8保存，24小时内即可使用。黑曲霉孢子悬浮液可保存在2 8下，在经过验证的保管期间使用。21，系数培养基适宜性检查，两碟葡萄球菌营养琼脂培养基大肠杆菌两碟芽孢杆菌两碟型玫瑰钠一千培养基candida两个Hispanic candida两个浸出物葡萄糖琼脂培养基：candida candida，23 .样品准备，试验用产品进入灭菌实验室前进行表面消毒，用适当的消毒药彻底消毒试验容器表面。检验数量：试验产品必须至少提取2个包装单位，胶卷还不能超过4个。通常，应随机抽取3倍以上的检验量(至少2个包装单位)，用作试验。24，样品准备，检验量：除非另有说明，一般用于试验的检验量为10g或10ml；化学膜剂100cm2；可以酌情减少贵重物品、微量包装药品的检验量。如果要求对沙门氏菌进行检查，则必须增加20g或20ml(其中10g或10ml用于阳性对照组测试)。25，将测试准备、测试、固体、半固体或粘液测试用液体10毫升或10g用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释为100毫升，混合为1: 10的试验用液体。油可以添加适量的无菌吐温80，使试验产品均匀分散。水溶性液体也可以混合成试验溶液。非水溶性试验产品：乳化或萃取；试验用胶片：100cm2用于试验，切割，pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100毫升浸泡，振动奶昔1: 10用作试验用溶液；肠溶剂及结肠用制剂：试验制剂10g，pH6.8无菌磷酸盐缓冲液(肠溶剂)PH7.6无菌磷酸盐缓冲液(结肠药)至100ml，放入45水浴中摇晃溶解，用作1: 10的试验溶液。气溶胶、试验用喷雾、处理后第一次试验准备；试验准备抗菌活性试验准备产品：培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法；26，细菌、真菌和酵母数量，实验方法盘膜过滤培养基中的细菌总数：营养琼脂培养基真菌和酵母数量：玫瑰钠琼脂培养基，酵母浸出粉末琼脂培养基，27，细菌、真菌和酵母的数量，培养和数量，除其他规定外，细菌培养3天，每天菌落数真菌、酵母培养5天，如果需要，每天菌落计数，菌落数最多增加7天后，每个稀释等级试验溶液的平均菌落数，28，细菌、真菌和酵母数，方法验证(1)薄膜过滤法：试验液，过滤，洗涤，最后冲洗液中加入1毫升试验菌进行过滤，集落数；(2)细菌液体组测定添加的测试菌数。(3)试验对照组供应试验用溶液，并按照集落计数法测定试验用背景细菌的数量。(4)稀释剂对照组在试验准备过程中需要进行分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，调查试验准备过程中微生物受影响的程度。稀释剂试验细菌悬浮液；29，细菌、真菌和酵母的数量，验证测试必须分别计算至少3个独立的并行测试和每个测试细菌的回收率。结果在3次单独并行试验中，判断稀释剂对照组的细菌回收率应低于70%。如果测试组的细菌回收率不低于70%，可以根据测试准备方法和计数法测定测试对象细菌、真菌和酵母的数量。测试中，如果测试组的细菌回收率低于70%，则应使用培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法等或其组合，去除试验产品的抗菌活性，并重新验证。30，细菌、真菌和酵母的数量，1 .盘法应服用适合细菌数测定的连续23稀释等级试验液。试验溶液1ml，直径90mm的灭菌盘，1520ml的温度不超过45的融化营养琼脂培养基或玫瑰钠琼脂培养基或酵母浸出粉胯部葡萄琼脂培养基，混合，凝固，反培养。每个稀释等级每个徽章至少制造两个板。取1毫升阴性对照组检查用稀释液，放入灭菌盘内，注入培养基凝固，反过来培养。每个计数的培养基各制造两个板块，任何一个都不能带来细菌的生长。31，细菌，真菌和酵母的数量，营养琼脂-细菌玫瑰钠琼脂培养基-真菌，32，细菌、真菌和酵母的数量，1 .皿型细菌数报告规则：细菌、酵母选择平均菌落数低于300，真菌选择平均菌落数低于100的稀释等级，作为细菌数报告(使用2个有效数字)的基准；报告测试过程中包括的细菌数，即最大平均殖民地数乘以稀释倍数，即1g、1ml或10cm2。如果每个稀释级别的平板没有集落生长，或者只有最低稀释级别的平板有集落生长，但是平均集落数小于1，则细菌数报告为1乘以最小稀释倍数。33，细菌，真菌和酵母的数量，2 .薄膜过滤器在每个滤膜上包含1g或1ml的试验溶液，并添加到适量稀释剂中混合和过滤。如果每1g或1ml有更多的细菌用于测试，则适合1ml的稀释等级，过滤。PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他合适的清洗液冲洗过滤膜，清洗后去除。细菌是通过将营养琼脂培养基或玫瑰钠培养基或酵母浸出粉胯部附着在葡萄糖琼脂培养基板上培养出来的。每个培养基至少制造一个滤膜。取1毫升阴性对照检查用稀释液，按照上述薄膜过滤法用作阴性对照。语音对照组不应有细菌生长。34，细菌，真菌和酵母的数量，2 .胶片过滤细菌数报告规则：与1g或1ml的被测试菌落数相对应的细菌数；如果在滤膜上无菌，则细菌数报告为1(1g或1ml的滤膜，用于测试)或1乘以稀释倍数的值。35，如果细菌、真菌和酵母的数量，在特殊情况下，营养琼脂培养基上有真菌和酵母，玫瑰红色钠琼脂培养基上有细菌，就要分别计算真菌和酵母、细菌菌落的数量。然后将营养琼脂培养基中的真菌和酵母数量或玫瑰钠琼脂培养基中的细菌数量与玫瑰钠琼脂培养基中的真菌和酵母数量或营养琼脂培养基中的细菌数量进行了比较，比较了菌落数量高的培养基中的细菌数量。36，37，验证控制细菌检查法，菌株(与细菌准备相同之前)大肠杆菌CMCC(B)44102staphy lococcus aureusCMCC(B)26003B paratyphimurimuries，验证控制细菌检查法，(1)使用试验组和10cfu100cfu试验菌的增菌培养基添加薄膜过滤法时，将试验液、过滤、洗涤、试验菌放入最后冲洗液中，过滤后注入增液培养基或去除滤膜。(2)语音细菌控制组设置了语音细菌控制组，以验证该控制细菌检查方法的特殊特性。方法确认大肠埃希菌、大肠埃希菌、沙门氏菌检测过程中阴性对照组细菌使用金黄色葡萄球菌。在铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检查过程中，验证阴性对照组细菌是否使用大肠杆菌。语音对照组未检测到。结果阴性细菌对照组判断不能检测阴性调节细菌。如果检测组检测出了试验菌，则按照试验准备方法和检查用控制细菌检查法进行检查。如果在试验组中未检测到试验细菌，则应使用培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法等，或结合这些方法，去除试验产品的抗菌活性，并再次进行方法验证。39，大肠杆菌检查，检查10ml，相当于测试1g，1ml，10cm2，直接或治疗后在适量(100ml以上)的胆盐乳糖培养基中培养，必要时延长至48小时。取上述培养物0.2毫升，接种于含有5毫克培养基的试管，并在5小时、24小时366nm紫外线下观察，使用未接种的毫克培养基作为基准对照组。管内培养菌为荧光、MUG阳性、无荧光、MUG阴性。观察后，沿体外培养管壁添加几滴靛玉红基质试验液，液体水平为靛蓝色基质阳性的玫瑰红色；显示试剂的本色，靛蓝气质为阴性。背景控制必须是MUG语音和indi矩阵语音。40，Escherichia coli检查，MUG indigio矩阵测试，41，大肠杆菌检验，MUG阳性，靛玉红基质阳性，大肠杆菌检测试验；MUG阴性，靛气质阴性，检查结果未检测到大肠杆菌；如果MUG阳性、indigo气质阴性或MUG阴性、indigo气质阳性，则应将胆盐乳糖培养基的培养物涂在eosin亚甲基蓝琼脂培养基或mekang kai琼脂培养基的板上，并培养18至24小时。如果板块上不生长或不生长种群的群落与下表中显示的种群的形态特征不匹配，则在试验检测中未检测到大肠杆菌。在板块上生长的种群与下表所示种群的形态特征一致或可疑，应进行分离、纯化、染色显微镜和相应的生化检查，以确定其是否为大肠杆菌。42，大肠杆菌检查，大肠杆菌菌落形态特征，43，大肠杆菌群检查，3个含适量(10ml以上)的胆盐乳糖发酵培养基，分别为1: 10的测试液1ml(含0.1g或0.1ml)，1: 100的测试液1ml(测试物质0.01g或0.001ml)，44，大肠杆菌群检查，胆盐乳糖发酵管无菌生长，或菌生长但未产酸，该管未检测到大肠菌群；生产产气的情况下，发酵管的培养菌应分别在乙烯利蓝培养基或麦