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临床常用免疫学检查,苏大附二院检验科冯萍,掌握：免疫球蛋白、补体的临床意义病毒性肝炎血清标记物的检测肿瘤标记物的检测熟悉：感染免疫检查自身抗体的检测,第一节体液免疫检查,一、血清免疫球蛋白的检测,免疫球蛋白是指由浆细胞所产生的,具有抗体活性和(或)抗体样结构的球蛋白.主要分为:IgG,IgA,IgM,IgE和IgD五类.,IgGIgAIgM测定,IgG:含量最多或最主要的Ig（75%），唯一能够通过胎盘的IgIgA:约占10%，分为分泌型和血清型，在局部免疫中起重要作用IgM：分子量最大，是抗原刺激后最早出现的抗体,检测方法：免疫比浊法参考值：成人IgG：7.016.0g/LIgA：0.75.0g/LIgM：0.42.8g/L,临床意义,免疫球蛋白增高多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝病肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等,临床意义,免疫球蛋白降低常见于各类先天性免疫缺陷病、重链病、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病综合征、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。IgG下降：细菌感染IgA下降：反复呼吸道感染IgM下降：败血症,二、血清M蛋白检测,M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片断，一般不具有抗体活性,参考值阴性临床意义见于单克隆免疫球蛋白增殖病：MM巨球蛋白血症重链病(、重链)轻链病(、轻链)半分子病：IgA、IgG型恶性淋巴瘤良性M蛋白血症,三、血清补体检测,补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白,共有20余种组分,具有溶细胞、调理作用、中和与溶解病毒和炎症介质、清除免疫复合物等作用。是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体。按功能分为经典途径、旁路激活途径、膜攻击组分和调节分子4种。,总补体溶血活性检测（CH50）,抗原:绵羊红细胞+抗体:兔抗羊红细胞抗体(溶血素)+补体溶血,100,80,60,40,20,1,2,3,4,血清(ml),溶血%,溶血程度与补体含量的关系,参考值试管法:50-100u/ml临床意义主要反映补体传统途径活化的活性程度.CH50增高:见于急性炎症、组织损伤（风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、多发性关节炎、伤寒）和某些肿瘤。,CH50降低：更有意义。见于肾小球肾炎、自身免疫性疾病（SLE、RA）、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病和遗传性血管神经水肿。,在患SLE、RA等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。细菌感染，特别是革兰阴性细菌感染时，常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体水平降低。心肌梗塞、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等情况下血清补体水平常升高。,补体C3检测,C3是补体系统中含量最多的物质，主要由巨噬细胞和肝脏合成，在C3转化酶的作用下，裂解成C3a与C3b,在传统途径和旁路途经中发挥重要作用。,参考值成人:0.821.70g/L临床意义增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排斥反应。降低：消耗增多：肾炎、活动性SLE、RA。合成不足：肝病。大量丧失：肾病综合症、大面积烧伤等。,补体C4检测,C4由肝脏、巨噬细胞合成，为C1s底物，参与经典激活途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。,参考值成人：0.150.49g/L临床意义增高:组织损伤性疾病.降低:狼疮性肾炎、SLE、自身免疫性肝炎、型糖尿病、胰腺癌、多发性硬化症、RA、IgA型肾炎、遗传性IgA缺乏症。,第二节细胞免疫检查,人的淋巴细胞可分为：T、B、NK等细胞群他们有不同的表面标志和功能。T、B细胞还分为不同的亚型。,一、淋巴细胞表面标志物检测,E玫瑰花形成试验：T细胞表面有绵羊红细胞受体，与SRBC结合形成花结样的细胞，可用于T淋巴细胞计数。分化抗原测定：荧光标记的抗体与T细胞反应，用荧光显微镜或流式细胞仪计数。,临床意义,降低：见于免疫缺陷疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖疾病。升高：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动肝炎等。,T细胞亚群检测,CD3代表总T淋巴细胞CD4是辅助、诱导T细胞的标志CD8是抑制、杀伤性T细胞的标志应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。,CD3,CD4,参考值免疫荧光法（IFA）：CD3为63.1%10.8%；CD4为42.8%9.5%；CD8为19.6%5.9%；CD4/CD8为（2.20.7）/1。,流式细胞术：CD361%85%；CD428%58%；CD819%48%；CD4/CD80.92.0/1,CD3下降:自身免疫性疾病、免疫缺陷病、放疗、化疗后、肾上腺素治疗后CD4下降:恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫抑制剂的使用、病毒感染、严重创伤、大手术CD8下降：自身免疫性疾病、变态反应疾病,临床意义,CD4/CD8增高：自身免疫性疾病、恶性肿瘤、病毒感染、变态反应CD4/CD8下降：HIV（0.5)、传单、巨细胞病毒感染等器官移植排斥反应的监测:升高预示可能发生排斥发应;持续下降提示感染发生,0.2必须停止使用免疫抑制剂。,B淋巴细胞表面标志测定,膜表面免疫球蛋白(SmIg)测定：升高与淋巴细胞恶性增殖有关，降低与体液免疫缺陷有关分化抗原的测定：CD19为最重要的B淋巴细胞标记分子，升高主要见于淋巴系统的恶性肿瘤,二、淋巴细胞功能检测,T细胞转化试验原理：在体外培养时，T细胞在刺激物的作用下，转化为淋巴母细胞，部分发生有丝分裂，计数淋巴细胞及转化的母细胞数，求出转换百分数。意义：判断机体细胞免疫功能水平、估计疾病的疗效和预后。,1.形态法,2.H-TdR掺入法,3.MTT法,混合淋巴细胞反应原理：两个无关个体的淋巴细胞混合培养时，双方淋巴细胞会以对方为抗原发生反应，T淋巴细胞发生转化意义：反应机体整体的细胞免疫功能水平、用于HLA的细胞学分型,NK细胞活性测定能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功能，亦参与移植物排斥反应、自身免疫病和超敏反应的发生,方法：乳酸脱氢酶释放法、51Cr释放法、流式细胞术意义：肿瘤疗效观察与预后、免疫调节功能,第三节、病毒性肝炎血清标志物检测,甲型肝炎病毒标志物检测,甲型肝炎病毒抗原和RNA检测参考值均阴性临床意义HAVAg阳性:HAVAg在发病前两周可从粪便中排出.HAV-RNA阳性:早期诊断及特异性诊断。在病人粪便中检出表明病人急性感染,且病人及其排泄物皆为传染原。,甲型肝炎病毒抗体检测机体可产生IgM,IgG,IgA,HAV-IgM是病毒衣蛋白抗体,HAV-IgA是肠道粘膜分泌的局部抗体,HAV-IgG可长期存在.参考值均为阴性.,抗HAV-IgM阳性:是机体早期诊断指标,说明机体正处于感染期,是感染的特异性指标。抗HAV-IgA阳性:早期和急性期在粪便中测得,是早期诊断指标之一。抗HAV-IgG阳性:阳性提示既往感染,可作为流行病学调查指标。,临床意义,乙型肝炎病毒标志物检测,TheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticle.,HBsAg:具有抗原性,无传染性参考值阴性临床意义1.HBsAg为乙肝患者首先出现的病毒标志物,可作为乙肝的早期诊断和普查项目。在急性肝炎潜伏期即可阳性,而临床表现及肝功异常要在4周后才出现,乙肝发病时HBsAg达高峰。是诊断乙肝最常用的指标。,2.3个月后不转阴,变为慢性:慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌。3.慢性HBsAg携带者。,HBsAb:针对HBsAg产生,有一定的中和作用,阳性表明机体有一定免疫力。参考值阴性临床意义阳性提示急性感染后康复,在发病后转阳或效价升高有意义.一般3-6月后出现,可持续多年。判断疫苗的质量最主要的指标。接受HBsAb阳性血的受血者,可出现短暂阳性。,HBeAg:核心颗粒的可溶性蛋白,具有抗原性。参考值阴性临床意义HBeAg阳性是乙肝传染性的标志物,具有传染性,病人处于活动期.HBeAg与DNA复制成正比,也和肝损成正比。母婴传播。判断急性乙肝的预后。,HBeAb:比HBsAb转阳要早.参考值阴性临场意义急性肝炎患者HBeAg转阴,HBeAb出现,认为病情好转,预后良好,病毒复制水平下降,传染性降低,但并非无传染性。潜在HBeAb阳性可能是慢性迁延和恶性变信号。,HBcAg:存在于Dane颗粒核心,是一种核心蛋白,被HBsAg包裹,一般测不出来。参考值阴性临床意义乙肝传染性活动性病变的标志:HBsAg、HBeAg和HBcAb等指标是体内存在乙肝病毒的间接标志，而HBcAg是直接标志，与HBVDNA呈正相关，可反映HBV活动性复制程度。,HBcAb:有IgG、IgM、IgA三种。参考值阴性临床意义1HBcAb总抗体：主要反映IgG。HBV感染的指标乙肝急性期的辅助诊断：“窗口期”流行病学调查的指标献血员的筛选观察疫苗的安全性,2HBcAb-IgM急性乙肝的诊断:感染早期HBcAb-IgM上升,数月后不论HBsAg是否消失,HBcAb-IgM都稳定。HBsAg阴性急性感染者HBcAb-IgM阳性且高滴度,也可诊断。,判断病毒复制的指标:有助于区别慢活肝或非活动性肝炎,慢活肝HBcAb-IgM阳性，低度低。有助于鉴别近期感染或即往感染,3HBcAb-IgG流行病学调查有助于区别慢活肝或非活动性肝炎:特别是急性乙肝和乙肝携带者急性发作,BragHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbDiagnosis1+-+-earlyHBVinfection2+-+-+acuteHBVinfection(highinfectivity)3+-+HBVinfectione-antibody-conversion(lowinfectivity)4-+convalescentwindowstage5-+-+earlyconvalescentstage6-+acuteorchronicHBVinfection7-+-vaccination,HBV-DNA:参考值阴性临床意义乙肝的直接诊断依据母婴垂直传播,丙型肝炎病毒标志物的检测,HCV-RNA参考值阴性临床意义早期病原学诊断判断预后,HCV-IgM参考值阴性临床意义急性丙肝患者4周后阳性,6个月内治愈转阴,否则转变为慢性。,HCV-IgG:出现慢,2-6月后阳性参考值阴性临床意义抗HCV-IgG阳性表明已有HCV献血员筛选,第四节、感染免疫检查,抗链球菌溶血素o测定(ASO)参考值乳胶凝集法500U临床意义增高：A族溶血性链球菌感染所引起的疾病：风湿热(风湿性关节炎、风湿性心肌炎)，急性上呼吸道感染(扁桃体炎)，急性肾小球肾炎等。,伤寒和副伤寒沙门氏菌的检测肥达氏反应(Widal)参考值o凝集效价1:80伤寒H凝集效价1:1602副伤寒甲:O1:80,A1:160乙:O1:80,B1:160丙:O1:80,C1:1603单O升高:感染早期或其他沙门氏菌与O抗原交叉反应4单H升高:预防接种或非特异性反应,C反应蛋白测定(C-reactiveprotein,CRP)参考值免疫比浊法:10mg/L临床意义1组织损伤:大手术,严重创伤,烧伤,心梗2细菌感染,病毒感染升高不明显3风湿热活动期4恶性肿瘤,器官移植后排斥反应,TORCH感染免疫检测,TO：toxoplasmagondii,弓形虫R：rubellavirus,风疹病毒C：cytomegalovirus,巨细胞病毒H：herpessimplexvirus,单纯疱疹病毒孕妇感染后可通过胎盘传染给胎儿，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍，已被作为孕期检查常规项目。,第五节、肿瘤标志物检测,肿瘤标志物(tumormarker):肿瘤在发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或机体对肿瘤反应而产生的一种物质。反映细胞恶变各阶段表型及基因特征性。,甲种胎儿蛋白（AFP）：早期胎儿肝脏合成，出生后受抑制。当肝脏细胞或生殖腺胚胎组织恶变时显著增高。参考值定性:阴性，定量:300ug/L生殖腺胚胎癌中的运用:在睾丸癌、卵巢癌、畸胎癌的诊断、疗效观察和预后判断中均有意义。其他：鉴别妊娠和绒毛癌；在胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、胎儿先天性开放性神经管畸形，病毒性肝炎、肝硬化。,癌胚抗原（CEA）：胎儿早期的消化管和某些组织均可合成，孕6个月后下降，出生后极低。参考值15ug/l临床意义由内胚层分化来的恶性肿瘤：尤其是消化道腺体的肿瘤检出率较高，特别是结肠癌；某些良性肿瘤:直肠息肉轻度一过性增高,结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿、支气管哮喘；其他体液：良性胸腹水CEA50%0%,第六节、自身抗体检查,自身免疫性疾病（AID）：某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受，免疫系统对自身组织或成分产生免疫应答，称自身免疫。由于自身免疫而产生的疾病称自身免疫病。,自身抗体检查,类风湿因子（RF）：靶抗原为变性IgG的Fc部分，有IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五种类型。90%RA患者呈阳性，IgA-RF与骨质破坏有关，早期升高提示病情严重，预后不良。IgE-RF升高时已属病情晚期。RF无严格特异性，不是RA的诊断惟一标准,不同疾病时RF的检出率疾病阳性率%类风湿性关节炎79干燥综合征95SLE30硬皮病80皮肌炎80混合结缔组织病20,抗核抗体（ANA）：ANA是以自身真核细胞的各种细胞核成分作靶抗原的一组自身抗体的总称，ANA的性质主要是IgG,ANA无种属和器官特异性可与所有动物细胞核发生反应。,可提取性核抗原性多肽抗体谱测定（ENA）：包括Sm、RNP、Jo-1、Scl-70、SSA/