血液抗凝剂的特点及应用

实验室常用抗凝血剂的特点及应用在实验室的检查中，检查项目的血液标本需要抗凝固。 抗凝剂的种类很多，实用上如果不根据需要进行选择，就得不到理想的效果。 实验室常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐)、柠檬酸盐、草酸盐等4种，其特点和应用分别阐述如下一、肝素抗凝剂是血液化学成分检测中使用的优先抗凝剂。 肝素为含有硫酸基的粘多糖，分散相物质的平均分子量为15000。 其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶结合改变抗凝血酶的配置，加速凝血酶复合体的形成而产生抗凝血作用。 另外，肝素可通过血浆辅助因子(肝素辅助因子)抑制凝血酶。 常用肝素抗凝剂为肝素钠、钾、锂、铵盐，其中肝素锂最好，但价格高，钠、钾盐增加血液中钠、钾的含量，铵盐增加尿素氮的含量。 用肝素抗凝的量通常为血液10.012.5 IU/ml。肝素对血液成分干扰小，不影响红细胞体积，不溶血，适用于红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及一般生化测定。 肝素具有抗凝血酶作用，不适合凝血试验。 另外，肝素的过剩量会引起白血球的聚集和血小板的减少，因此不适合白血球分类和血小板计数，不能用于止血检查。 此外，肝素抗凝不能用于血涂膜的制备。 Wright染色后出现深蓝色背景，影响显微镜的减产。 肝素抗凝必须在短时间内使用。 否则，过度放置血液会凝固。二、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐)EDTA可以与血液中的Ca2结合螯合物，阻断凝血过程，血液不凝固。 EDTA盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝固速度最快。 EDTA盐通常配合在质量分率为15%的水溶液中，在血液ml中加入1.2 mg EDTA，在血液5ml中加入0.04ml。 EDTA盐可在100干燥，抗凝作用不变。该抗凝剂不影响白细胞的计数和大小，对红细胞形态的影响最小，能抑制血小板的凝集，适用于一般的血液学检查。 但是，抗凝剂浓度过高时渗透压上升，细胞萎缩。 EDTA溶液的pH与盐类的关系很大，低pH能使细胞膨胀。 EDTA-K2能使红细胞的体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积变得非常不稳定就会稳定。 EDTA k 2在降低Ca2、Mg2的同时降低肌酸激酶、碱性磷酸酶，EDTA k 2的最佳浓度为血液1.5mg/ml，血液少时中性粒细胞肿胀分叶消失，血小板肿胀、崩溃，产生正常血小板碎片，分析结果出现错误。 EDTA能抑制或干扰纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，因此不适合血凝和血小板功能检测，也不适合钙、钾、钠和含氮物质的测定。 另外，EDTA影响某种酶的活性，能抑制红斑狼疮因子，因此不适合组织化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂膜的制作。三、柠檬酸盐柠檬酸盐主要为柠檬酸钠，抗凝原理与血液中的Ca2结合形成螯合物，Ca2失去凝血功能，凝血过程中断，阻止凝血。 柠檬酸钠有Na3C6H5O72H2O和2Na3C6H5O711H2O两种晶体，通常采用前者配合3.8%或3.2%的水溶液，与血液以1:9体积混合。大多数凝血试验可用柠檬酸钠抗凝，有助于v因子和viii因子的稳定，且对平均血小板体积和其他凝血因子的影响小，可用于血小板功能分析。 柠檬酸钠细胞毒性小，也是输血中血液保守液的成分之一。 但柠檬酸钠6mg能抗凝血液1ml，碱性强，不适用于血液检查和生化检查。四、草酸盐草酸盐也是常用的抗凝剂，具有溶解度大的优点，作用原理是溶解后解离的草酸根和标本中的Ca2形成草酸钙沉淀，Ca2失去凝血功能，阻断凝血过程。 常用草酸盐抗凝剂种类为草酸钠、草酸钾和草酸铵，草酸钠常用浓度为O.1 mol/L，以血液和1:9的比例使用。 但是，高浓度的k和Na容易使血细胞脱水，草酸铵会使血细胞膨胀，因此在测定血细胞比容时，草酸铵与草酸钾和草酸钠以适当的比例混合的抗凝剂不会影响红细胞的形态和体积。 常用于血液生化测定，但不适用于k、Ca 2的测定。 草酸钙沉淀，红细胞变得锯齿状，白细胞变成空泡，淋巴细胞和单核细胞变形，所以不能进行血液检查。 草酸盐使血小板凝集，影响白细胞的形态，不能用于白细胞和血小板的分类计数。附录4常用抗凝剂的制备和使用方法医学实验要求动物全身抗凝，所采集的全血和血浆也要加入适当的抗凝剂。 抗凝剂的要求是用量少、溶解度大、不能进行干扰实验的杂质。一、肝素(1)肝素抗凝作用原理；肝素抗凝作用强，在死亡复苏等实验中常用作动物的全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血酶的活力，阻止血小板凝集，抑制抗凝血酶等作用，不凝血。(2)制备和用量纯肝素10mg可抗凝血液65125 ml (lmg=125 u，1020U可抗凝血液1 ml )。 但由于肝素制剂纯度的高低和保存期的长短不同，抗凝效果也不同。 一般配合肝素生理盐溶液1%，使用时取0.1ml于试管内，100干燥，每管可抗凝510ml血液。 也可以用肝素将采血注射器浸湿墙壁，直接在注射器内采血，使血液不凝固。 动物实验进行全身抗凝时，一般剂量为大鼠2.53.0mg/200300g体重、兔10mg/kg体重、犬510mg/kg体重。 肝素可以改变蛋白质的等电点，因此用盐析法分离蛋白质用于蛋白质各部分的测定时，不能使用肝素。 市售肝素钠溶液每毫升含有肝素12500U，相当于100mg。二、草酸盐合剂(1)原理草酸胺可以使血细胞稍大，草酸钾可以使血细胞变小，草酸铵和草酸钾按32的比例配置，加入能保持血细胞体积一定的福尔马林，可以防止微生物在血中繁殖。 该抗凝剂最适合红细胞比积测定。(2)调制方法及使用量在草酸铵1.2g、草酸钾0.8g、福尔马林1.0ml、蒸馏水100ml中加入血和草酸盐合剂0.1ml (相当于草酸铵1.2mg、草酸钾0.8mg )。 根据采血量，将计算出的草酸盐量放入玻璃容器中晾干。 取0.5ml作为试管，干燥后，每管5ml的血不凝固。(3)注意事项草酸的作用是使凝血过程中必需的钙离子沉淀，达到抗凝的目的。 使用时添加的量适中，不要妨碍蛋白质的血液采集。 不适用于血液内的钙和钾的测定，也不适用于血液非蛋白性氮的测定。三、柠檬酸钠始终配合在35%水溶液中。 也可以直接加入粉剂，每1ml血液中加入35mg就可以达到抗凝固的目的。柠檬酸钠失去钙的活性，防止血液凝固。 但抗凝作用差，碱性强，不适合化验。 只能用于测定红细胞沉降速度。 急性血压测定实验所用柠檬酸钠为56%溶液。四、草酸钾(一)原理和注意事项；草酸钾是最常用的抗凝剂。 与血液混合后立即与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。 常用于非蛋白氮测定，但不适合钾和钙的测定。 应注意草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性。(2)调制及使用方法取草酸钾10g，加入少许蒸馏水使其溶解，再加入100ml蒸馏水。 调制10%水溶液，每根管子加入0.1ml的话，510ml的血就不会凝固。 一般做微量检查，血液量少，可以制成2%溶液，每管加0.1ml，12m