细菌内毒素检查法(凝胶法)ppt课件

.细菌内毒素检查(凝胶法)，细菌内毒素检查法，凝胶法，分级浊度分光光度法，显色矩阵法，重现性好，方法特点是能定量控制药物的增/抑干扰，操作简单。省时原理：通过裂解物和机械手段从鲎血液中的变性细胞中提取细胞裂解物，促进细胞破裂，可与极少量的细菌内毒素形成特异性凝胶反应。反应速度和凝胶硬度与内毒素浓度有关。试验程序1，试验准备：试剂、仪器和器具2，内毒素限值的测定3，最大有效稀释因子的测定4，凝胶限值试验5，结果测定。要求：1、最终产品是测试所必需的(浓度超过0.5毫克/毫升)2、被测样品的酸碱度应在6至8之间，如有差异应进行调整。1、试验准备：试剂、仪器和用具、仪器和用具的电热恒温水浴锅、固定时钟、排热枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。试剂细菌内毒素工作标准，细菌内毒素检查水，鲎试剂。嘿。嘿。2、内毒素限值的测定，其中L=K/M，L为供试品的细菌内毒素限值，一般表示为欧盟/毫升、欧盟/毫克或欧盟/单位；k为每小时每千克人体重量可接受的最大内毒素剂量，单位为欧盟/(千克小时)；m是每小时每千克人体重量的最大样本剂量，以毫升/(千克小时)、毫克/(千克小时)或铀/(千克小时)表示。一般来说，供试品供应商直接提供内毒素限值，如1000EU。(MVD):MVD=C1/，其中L是受试物品的细菌内毒素限值；c是测试溶液的浓度；是凝胶法中鲎试剂的标记灵敏度(EU/ml)。嘿。嘿。3、鲎试剂灵敏度复核，按下表配制溶液A、B、C，用稀释倍数的MVD试验溶液配制溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项目进行。结果测定：将配制好的试剂用锡箔纸包好，放入电热恒温水浴中。在37恒温水浴60分钟后观察结果(确保玻璃瓶中的溶液低于水面，并防止水进入瓶子)。如果阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性，则试验有效。如果溶液A的两个平行管都是阴性的，则确定测试物品符合规定。如果溶液A的两个平行管都是阳性的，则确定测试物品不符合规定。如果溶液A的两个平行试管中的一个为阳性，另一个为阴性，则需要重新测试。在重新测试期间，溶液A需要用4个平行的试管制成。如果所有平行管都是阴性的，则确定试验物品符合规定。否则，确定测试物品不符合规定，试验前的操作和准备注意事项：1。玻璃器皿应标准化，以方便热原的去除、准确的测量和方便的清洁操作。2.用于内毒素检测的稀释试管最好是玻璃试管。塑料器具只能一次性使用，并保证不含内毒素。实验环境：最好在干净的房间或干净的工作台上进行实验，以确保稳定的环境温度、湿度和通风。实验室工作人员：戴上干净的手套和口罩。实验过程：1。内毒素标准品应严格按照要求低温保存。工作标准应在打开后尽快使用，并应一次性用完。它不应该再储存了。2.每个步骤中用于稀释的移液器不得重复或交叉使用。3.当鲎试剂重新溶解时，应沿着瓶壁添加检查水，以避免出现气泡。4.操作时间长度。环境温度的变化会影响实验结果，因此操作应该尽可能熟练和快速。恒温器的温度变化为1，鲎试剂与样品混合后应立即转移到水浴中，保温时间应严格控制在602分钟。试管架在保温