蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)ppt课件

有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测-酶抑制率法(分光光度法)，1，分光光度法的原理介绍酶抑制率法(分光光度法)，2，吸光度：是基于可视比色法和分光光度法等物质选择性吸收的分析方法。不同物质的结构不同，因此吸收的光的波长和吸收度也不同。这是物质的选择性吸收。3，强度为I0的平行单色光束通过均匀吸收介质时，由于吸收物质分子和光子的作用，光子的一部分被吸收，一部分被介质吸收。如果透射的光线强度为It，则透射率T定义为T=It/I0，-LGT是吸光度a，即a=-LGT=lgi 0/it，4，测量物质吸收不同波长单色光的程度，波长()是横坐标，吸光度是如果相同物质的浓度不同，则最大吸收波长是恒定的，但吸光度随浓度的增加而增加。吸光度是在最大吸收波长下测量的，最敏感。5，颜色溶液对特定波长的光吸收强度与颜色物质的浓度c和吸收溶液的液层厚度b成正比，称为光吸收定律或lonber-bill定律，数学表达式为A=bc，T，表达式中：b表示液层厚度，单位为cm；c是浓度，单位为mol.l-1。是L.mol-1.cm-1单位的摩尔吸光系数。6，光电比色法，分光光度法(紫外-可见分光光度法)uv-vis，ultravioetvisuaalgorithcopy，光源，单色仪，吸收器，探测器，显示屏，I0，正常情况下，酶水解神经传导代谢产物(乙酰胆碱)，水解物与发色剂反应，产生黄色物质，用分光光度法测定吸光度随时间的变化，计算抑制率，通过抑制率，可以判断样品中是否存在高容量有机磷或氨基甲酸酯类农药。8，原理，9，试剂pH8.0缓冲溶液分别具有11.9g无水磷酸二钾和3.2g磷酸二氢钾，以1000mL蒸馏水溶解。显色剂分别将160毫克二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6毫克碳酸氢钠溶解为20毫升缓冲溶液，保存在4冰箱中。10，试剂气质：取硫乙酰胆碱25.0mg，将蒸馏水溶解为3.0mL，在4冰箱保存，摇匀保管。乙酰胆碱酯酶根据酶活性溶解为缓冲溶液，3min的吸光度变化 A0值应调节到0.3以上。摇晃4 的冰箱保存备用。11，分析阶段，试样处理：选择代表性蔬菜样品，冲洗表面土壤，切成1厘米左右的方形片，取样品1g，放入烧杯或萃取瓶中，加入5毫升缓冲溶液，震动1 2分钟，倒入萃取物，静置35min。对照组溶液试验：比试管先添加2.5毫升缓冲溶液，再添加0.lmL酶溶液，0.1mL发色剂，然后在37 摇晃15分钟以上(每个样品的控制时间必须一致)。添加0.lmL气质摇晃。此时液体应立即放入仪器比色池，记录3min的吸光度变化值 A0样品溶液测试。在试管中添加2.5毫升样品提取物之前，其他工作与对比溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值 at，12，计算结果，抑制率(%)=( A0- at)/ A0 100式： A0基准溶液反应3min样品溶液反应3min吸光度变化值；13、结果判定，结果显示酶抑制程度(抑制率)。蔬菜样品提取物对酶的抑制率50%，意味着蔬菜中存在高容量有机磷或氨基甲酸酯类农药，样品为阳性结果。阳性结果的样品必须重复2次以上。14、酶抑制率法对部分农药的检测限度，15、说明、大葱、大蒜、萝卜、韭菜、芹菜、芫荽、蘑菇、番茄汁中含有影响酶的植物二次生物量，容易产生假阳性。处理这种样品时，可以用全(体)蔬菜盛。一些叶绿素更高的蔬菜也能提取整个(身体)蔬菜，减少色素的干扰。温度条件低于37C时，酶反应速度减慢，添加酶液和显色剂后放置反应的时间相应延长，延长时间为3min的吸光度变化DA0值大于0.3，如果用胆碱酯酶空白对照进行测试，则可以下降。样例放置时间必须与解决方案放