埃博拉出血热的实验室检测和生物安全概要.ppt

埃博拉出血热实验室检测方案和生物安全要求中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中国疾病预防控制中心(海南省CDC马无) 2015-08，主要内容是埃博拉出血热病原学实验室检测方案(第三版)3.生物安全要求相关标本采集、包装、运输技术指南、埃博拉出血热病原学、 埃博拉是埃博拉病毒(Ebolavirus，EBV )引起的人类和非人类灵长类(猴子、大猩猩、黑猩猩等)发生的急性出血性传染病。 EBV属于丝状病毒科，病毒有脂质被膜。 埃博拉病毒基因组为无节负链RNA，大小为18.9kb，编码7个结构蛋白和1个非结构蛋白。 病毒呈长丝状体，呈棒状、丝状、l形等多种形态。 毒粒的长度平均为1000nm，直径约为100nm。 埃博拉病毒在对热有中等抵抗力的室温和4下保存1个月后，感染性无明显变化的60灭活病毒可以在紫外线、射线、甲醛、次氯酸、酚类等消毒剂和脂溶剂敏感的1小时1005分钟内灭活。 埃博拉出血热病原学、埃博拉病毒分类，目前已发现5种埃博拉病毒，不同亚型病毒基因组核苷酸构成差异较大，但同一亚型病毒基因组比较稳定。 扎伊尔型(EBOV ) :人致病性最强，苏丹型(SUDV ) :人致病性强，奔波焦点型(BDBV ) :人致病性更强，泰国森林型(TAFV ) :黑猩猩致病性强，人弱的雷斯顿型(RESTV ) :人无致病性，埃博拉出血热实验观察例，仿真例和确诊例，1 .检查对象，2 .采样、保存和运输，(1)采样、分离橡胶无菌真空凝固促进管采静脉血，1管3mL，标记后4保存，记入采样登记册。 观察病例，疑似病例在发病3天后采集静脉血2管，对具有埃博拉出血热检查资格的实验室进行埃博拉出血热检查确诊的病例采集恢复期的血液标本，对国家疾病管理中心的病毒病院进行检查。 (二)标本保存、运输，二.标本采集、保存和运输，未分离血清的全血标本应在4保存，应尽快送至有埃博拉出血热检查资格的实验室，血清标本长期保存于-70以下冰箱，1周内放于-20冰箱。 标本运输应按照有关生物安全规定，采用a级包装、低温冷藏运输，避免冻融。 埃博拉病毒核酸检测埃博拉病毒抗原检测IgM、IgG抗体检测、三、检测内容为，(一)病原学检测1 .核酸检测：是目前早期诊断、早期发现埃博拉病例的主要检测方法。 为了提高检测的敏感性和特异性，采用实时荧光PCR法检测埃博拉病毒的两个不同基因，在病例筛选时，任何一个基因检测阳性均被确诊为埃博拉病毒阳性的病例出院时，如果两个基因的检测不同时为阴性，则判定为阴性四、实验室检查方法，二.病毒抗原检查：酶联免疫法检测埃博拉病毒抗原。 病毒抗原检测阳性可以确诊。 发病后3天内，血液标本中埃博拉病毒抗原检出率低，检出阴性不能排除埃博拉病毒感染。 发病后310天血液标本病毒抗原检出率高。 四、实验室检测方法，(二)血清学检测1 .血清特异性IgM抗体：采用捕获法ELISA法检测。 IgM抗体阳性可以确诊。 2 .血清特异性IgG抗体：目前采用间接法ELISA检测IgG抗体。 单血清埃博拉病毒IgG抗体阳性表明曾感染埃博拉病毒，2种血清埃博拉病毒IgG抗体阳转或恢复期滴度达急性期4倍以上者可确诊。 四、实验室检测方法，(三)结果报告、探讨和反馈埃博拉病毒检测机制都要将所有阳性和部分阴性血清标本检测到我国疾病预防控制中心病毒病房。实验室的检验结果应当立即将标本提交检验单位，并报告给上级主管部门。 四、实验室检查方法五、生物安全按照病原微生物实验室生物安全管理条例等有关规定，搞好生物安全工作。 埃博拉病毒的分离、培养和动物实验在生物安全水平BSL-4/ABSL-4 )的实验室进行。 没有培养感染性材料的实验活动需要在BSL-3实验室进行。 血清学检测应在BSL-3实验室进行，标本应先在60灭活1 h，然后再进行实验操作。 核酸检查中，在BSL-3实验室的生物安全柜内将核酸提取分解液放入样品中，充分分解后，完成病毒RNA提取。 将装有病毒RNA的样品管的外表面彻底消毒后，可以在BSL-3实验室以外进行放大检查。 2 .操作感染性材料时，每次标本份数不多，每份标本量不多。 实验室检验的生物安全、生物安全防护，在实验室处理感染性标本时，应严格按照操作规范在BSL-3实验室进行。 实验室工作人员应佩戴复盖全身的个人防护装备。 包括防漏防护服、N95以上的口罩、(防护目镜)、防护口罩、乳胶手套等，需要感染性标本的离心、比较大量的标本(10mL )分注处理等时，必须使用正压头盔。 实验者有体表开放伤的，不得参加实验活动。 与感染性材料相关的离心力应使用带密封盖的离心滚筒或旋转轴进行标本的离心力，在生物安全柜内必须打开离心旋转轴放入或取出带标本的离心管。 标本采集、包装、实验室检验等过程中产生的医疗废弃物可能存在生物危险，必须按照医疗废物管理条例和医疗卫生机构医疗废物管理办法等有关规定及时处理。 实验室内埃博拉病毒相关感染性标本的实验活动发生事故时，应立即开始相关应急救治。生物安全防护、埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南、埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南、一、生物安全防护1、所有样本采集和处理均应遵守医院感染管理规范和病原微生物实验室生物安全管理条例等相关生物安全规定，在标准预防上采取飞沫和接触隔离的预防措施。 2、取样时，必须严格按照BSL-3级实验室的规定进行个人保护。 必须佩戴医疗用防护服、复盖口鼻的医疗用防护面罩(N95 )、双重防护手套、护目镜、防护面罩、鞋套、橡皮靴等。 (1)采集时间一般在发病后2周以内，患者血液标本中检出病毒核酸和抗原，发病后310天标本核酸和抗原检出率高。 首先从发病后2 d的患者血清中检测出特异性IgM抗体，IgM抗体可维持数月。 发病后7-10检出IgG抗体，康复者IgG抗体可维持数年。 发病10-14天以后标本病毒特异性抗体检出率高。 应根据不同检查目的确定取样时间，疑似患者排除埃博拉感染，因此发病3天后应采集血样。 二、采样；(二)采样1 .采血场所除患者常规护理材料外，还备有手套、防护服和防护面罩等，并备有洗手设施和装有消毒液的桶。 2 .采集埃博拉出血热患者的血样应该由接受生物安全保护训练的人员进行，采血时应该有两人会面。 二、采样，(二)采样3，采用分离橡胶无菌真空凝固管采集静脉血，各管3mL，采样后用封口膜封口，标记清晰后放入自封口袋或50mL离心管内，在自封口袋或离心管外表面再标记清晰，在4保存，填写采样登记册。 检测疟原虫需要另外采集一支抗凝剂。 4 )观察病例和疑似病例在发病3天后采集静脉血2管，对具有指定埃博拉出血热检查资格的实验室进行埃博拉出血热检查。5、确诊病例采集恢复期血液标本，不限于出院前2份，每2管，采集时间间隔48以上，对国家疾病控制中心病毒病进行埃博拉检查，指导病例管理。 二、标本采集、一、埃博拉相关感染性标本运输按照病原微生物实验室生物安全管理条例和人间传染的病原微生物名录等有关规定，采用a级包装，满足UN2814的要求。 用三层包装系统包装：第一层包装为自封袋或50mL离心管，第二层包装在防水防漏安全盒容器中，第三层由输送包装构成。 样品用吸水纸等包裹，固定在防漏自封袋和离心管内。 然后，放入坚固防水、防漏的第二层安全壳容器中，用吸水纸等填充物固定装有标本的自封袋和离心管，放入第三层包装。 安全壳容器和外包装应符合IATA危险品条例包装制度650。 三、标本包装、运输、三、标本包装、运输、二、标本详细情况、运输人员和需求人员地址，密封在塑料袋中，用胶带贴在外侧容器内外，留下文件进行跟踪，便于实验室工作人员查找标本数量。 3、样品运输前，按照相关生物安全规定，联系收到样品的公司相关生物安全责任人，办理相关手续，确定运输日期后，通知实验室样品运输的时间和运输方式。 1、实验室检测埃博拉病毒阳性标本，必须按照病原微生物实验室生物安全管理条例等有关生物安全规定予以保存，实行“双人间两片”管理和抽样“审查”制度。 2、实验室检测埃博拉病毒阴性血液