生物：5.1《DNA的粗提取与鉴定》课件

5.1DNA的粗提取和鉴定，主题5DNA和蛋白质技术，1，基本知识，(1) DNA提取方法，1。提取生物大分子的基本想法，选择特定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子，2。提取DNA，提取DNA，去除其他成分DNA和RNA、蛋白质、脂质等物理和化学性质的差异；DNA的溶解度；DNA和蛋白质等成分在浓度不同的NaCl溶液中的溶解度不同，因此利用此特性选择合适的盐浓度，可以使DNA充分溶解，杂质沉淀；或其他成分的溶解，DNA析出，3 .DNA等大分子的物理化学性质，DNA不能溶于酒精溶液，DNA能抵抗酶、高温和洗涤剂，DNA不能溶于酒精溶液，但细胞内某些蛋白质能溶于酒精。将DNA从蛋白质中进一步分离。DNA不能溶解在酒精溶液中，DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性，蛋白酶水解蛋白对DNA没有影响，高温大部分蛋白质经不起60 80 以上，DNA变质，洗涤剂3354试剂：(b) DNA识别，条件：二苯胺，沸水浴条件下DNA的二苯胺为蓝色，沸水浴，现象：(a)实验材料选择，(b)粉碎细胞，获得含有DNA的滤液，(c)鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物红细胞；液体培养基中培养的大肠杆菌可以在含有DNA的生物材料中选择DNA含量较高的组织。从核DNA的数量来看，可以选择38个猪，78个鸡，0个哺乳动物血液，58个猕猴桃，16个洋葱，14个豌豆，12个菠菜和1个大肠杆菌。请选择多种动植物材料。哺乳动物的血细胞没有细胞核和细胞器。液体培养基中大肠埃希菌的DNA量减少。鱼卵是减数分裂的产物。(b)粉碎细胞，含有DNA的滤液，1，动物细胞，2，植物细胞，容易破碎，需要溶解细胞膜，鸡血球溶液：添加一定量的蒸馏水，用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液，请想想：蒸馏水对鸡血细胞是低渗透液体，水分大量流入血细胞，血细胞膨胀，出现裂纹。在搅拌器作用下，加速鸡血细胞膜、核膜破裂，释放DNA。加入一定的洗涤剂和盐，充分搅拌，研磨，过滤后收集研磨液。想想看：洗涤剂和盐的作用分别是？洗涤剂离子去污剂，溶解细胞膜，有助于DNA释放盐NaCl，DNA溶解在研磨液中，粉碎细胞壁，释放细胞核中的DNA。如果不好好研磨，提取的DNA量就会减少，看不到思想沉淀物，被确认为二苯胺，看不到蓝色。，为了提炼提取的DNA，必须进一步处理滤液：滤液/研磨液中可能含有什么成分？答：可能含有核蛋白、多糖、RNA等杂质，请想想研磨的目的是什么，如果研磨不成功，会对实验结果产生什么影响。1 .DNA溶解度，2 .酶、高温和洗涤剂的DNA耐受性，(3)从滤液中去除杂质的讨论：方案2和方案3的原理有何不同？场景2:使用蛋白质分解酶分解杂质蛋白质，将提取的DNA与蛋白质分离。选项3:利用DNA和蛋白质的耐高温性，使蛋白质变质，与DNA分离，(4) DNA的析出和识别，与滤液体积相同的冷却酒精溶液(体积分数为95%)，2-3min不动的话，溶液中白丝的粗提取DNA会向玻璃棒的方向搅动，并把线缠在一起DNA鉴定，在两个试管中各加入2mol/LNaCl溶液5mlK 将含有DNA的粘度尽可能多地溶解在溶液中，去除含有DNA的滤液中的杂质， DNA提取DNA，在不改变蓝色b的情况下提取DNA颜色观察，说明如果不是白丝的话，DNA中的杂质含量更高； 二苯胺识别蓝色指示表明实验基本成功，如果不显示蓝色，可提取的DNA含量低，或者实验操作出错，请重新准备，4，评价作业结果，是否提取DNA，练习，1，说明DNA提取实验工作中主要步骤的目的。答：提取DNA的第一步必须选择DNA含量高的生物材料。否则，在实验过程中会发生一些损失，测试会有困难。第二阶段是DNA的释放和溶解，这一阶段是实验成功与否，尽可能溶解细胞内所有DNA的关键；第三阶段，根据DNA的溶解特性、酶和耐高温性的各种特性，将DNA与杂质最大程度分离的DNA纯化；最后一步是确认DNA，这是检查整个实验的结果。2，你认为从细胞中提取某些蛋白质和提取DNA一样容易吗？答：提取蛋白质比提取DNA难。这是因为与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件更加敏感，容易被禁用；另外，由于蛋白质的空间结构多样，理化性质不同，蛋白质提取没有一定的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取条件，设计出特定的方法。2 .实验中NaCl的物质量浓度2 mol/l和0.14 mol/l对DNA有什么影响？1 .在DNA的粗提取实验中，将蒸馏水两次添加到烧杯中的作用是。a .血液稀释，样品冲洗，b .血细胞破裂，NaCl浓度降低DNA析出c .血细胞破裂，DNA溶解量增加d .血细胞破裂，提取杂质少的DNA，a: b，a:前者是DNA溶解，后者是DNA析出。DNA是二苯胺(