血液实验实验报告汇总

血液实验实验报告09 生物技术摘要：血液在体内承担着物质运输、免疫等重要的生理功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异，对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。制作血涂片用于观察红细胞、白细胞、血小板形态；使用血细胞计数板于显微镜下直接计数，计算分别得到红细胞、白细胞数目。关键字：血液 红细胞 白细胞 血细胞计数 血涂片 第一章 前言血液在维持内环境稳定上起着重要作用，具有运输、缓冲、防御等功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异，对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。动物红细胞的形态、大小、数目与动物的进化和生态适应均有一定的关系，一般来说，动物越高等，红细胞的数目越多，而体积越小，同时血细胞也高度分化；白细胞体积（除鱼类）比红细胞大，但比重却比红细胞小。白细胞按其组成又分为粒细胞和无粒细胞。在不同生理状态下，白细胞数目波动较大。通过观察不同脊椎动物的血涂片，并在镜下计数，即可初步观察到不同脊椎动物血细胞形态变化即数目变化。第二章 材料与方法2.1 血涂片的制作与观察2.1.1 材料鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠血液样品，洁净载玻片，毛吸管，瑞氏染液，蜡笔2.1.2 方法取末血样少量置于玻片的一端,左手持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开，推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动，载片上保留下一薄层血膜。待干后用蜡笔在血膜两侧划线，以防染液溢出。然后将血膜平放在染色架上，加瑞氏染液2-3滴，使覆盖整个血膜。固定0.5-1.0分钟，滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水。与染料混匀染色5-10分钟。 当液面浮现一层金黄色金属状物质，表示染液起了作用。用蒸馏水冲去染液,待自然干燥后,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。红细胞淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。 颗粒白细胞 嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。 嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径10-15微米。 嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11微米。淋巴细胞胞质少，常为围绕细胞核的一薄层，其中无颗粒细胞核是肾形或马蹄形，染成蓝紫色。血小板 血小板体形甚小，形态不规则，染淡蓝色，内含紫色颗粒，无核，常聚集成团。2.2 血细胞计数2.2.1 材料鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠、人体血液样品，柠檬酸钠，血细胞计数板，盖玻片，毛吸管。2.2.2 方法1计数原理：血细胞计数板由一块长约7.5cm、宽3.5cm的厚玻璃制成，在中部1/3面积处有4条槽，内侧两条槽之间还有1条横槽相通，在中部构成2块长方形平台。此平台比整个载玻片平面低0.1mm。平台中部各有一个计数室，每个计数室分九大格，每格边长1mm，面积为1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。四角的大格被划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板及组织培养的细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。计数方格为：2.方法：用毛吸管吸取10l血液样本加柠檬酸钠至1ml（即稀释100倍）或2ml（即稀释200倍），轻轻摇匀。将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴、管将摇匀的血液稀释液由盖玻片边缘滴一小滴，让稀释液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，使计数室均能充满稀释液。取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生。加样后静止2-3min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。红细胞数/L=N*25/（5*10*106*稀释倍数）白细胞计数/L=N*稀释倍数*10*106/4第三章 结果3.1血涂片的制作与观察3.1.1 鲤鱼、牛蛙、家鸽的血涂片都只观察到了红细胞，经查阅相关资料，白细胞有如下特点：1、含量少 由于白细胞含量为500010000个/立方毫米，而红细胞为400500万个/立方毫米（男），其比例大约为1500（按最高含量），也即，大约观察500个红细胞才能看到1个白细胞。2、颜色浅 白细胞体积比红细胞大，圆球形，是无色有核的细胞。因而，在光镜下观察，由于其透光能力强，所以看到的白细胞颜色浅。主观因素 主要是来自于实验技能方面不过关。解决方法：可根据白细胞的透光能力较强这一特点，利用低倍镜找。方法是：首先，应在低倍镜下调节细准焦螺旋，当看清细胞后，再继续向上调，使红细胞模糊不清。然后，移动涂片，边移动边注意观察。会发现在视野中有一些小亮点，如星星在闪烁。将其中一个亮点置于视野中央，然后，再调细准焦螺旋使细胞清晰。观察后发现，此亮点便是要找的白细胞。如需仔细观察，可换高倍镜。但注意光线不要太亮。3.1.2 家兔、小白鼠血涂片制作失败血涂片制作失败原因分析：1. 现象：以磷酸缓冲液为稀释液配制染剂，配比尝试了1：5，1：7，1:9,细胞几乎均不着色；以蒸馏水为稀释液配制染剂，配比为1：5，染色较浅，但能看到细胞。查阅相关资料：缓冲液pH值为6.24时，各血涂片的血细胞染色均较淡，尤其是白细胞中特殊颗粒显示不清，胞核、胞质对比不理想；随着缓冲液pH值的升高，血细胞染色逐渐变深，白细胞中的特殊颗粒逐渐显现，胞核、胞质对比逐渐鲜明；缓冲液pH值为6.98时，血细胞的染色、白细胞中特殊颗粒均显示清晰，胞核、胞质对比鲜明；随着pH值的继续升高，血细胞的染色、白细胞中的特殊颗粒显示反而模糊，胞核、胞质对比效果逐渐下降。2.原因分析：查阅相关文献：瑞氏染料是由伊红、美蓝的化合物溶于甲醇而制成的，伊红是带负电荷的酸性染料，美蓝是带正电和的碱性染料。两种染料结合在一起溶解在甲醇中后，美蓝和伊红又重新分离开来，成为带负电荷的伊红离子和带正电荷的美蓝离子，以吸附带不同电荷的蛋白质。血细胞内含有不同等电点的蛋白质，在pH为6.98的缓冲液中，血液中的但多说蛋白质均达到或接近自己的等电点，因而能很好地吸附相应的染料并着色。综上，家兔和小白鼠血涂片制作失败主要是由于没有测定染料的pH值，使得染色在不适宜的pH下进行不成功。3.2 血细胞计数3.2.1 鲤鱼血细胞计数（稀释二百倍）1.红细胞1617181514N=80，红细胞个数=0.8*1012个2.白细胞无法辨识，具体误差分析见3.1.13.2.2 牛蛙血细胞计数（稀释二百倍）1.红细胞1110989N=47，红细胞个数=0.47*1012个2.白细胞无法辨识，具体误差分析见3.1.13.2.3 家鸽血细胞计数（稀释二百倍）55675069581.红细胞N=299，红细胞个数=2.99*10122. 白细胞无法辨识，具体误差分析见3.1.13.2.4 家兔血细胞计数（稀释一百倍）1.红细胞185181178184181N=909，红细胞个数=4.5*10122.白细胞1310146N=43，白细胞个数=11*1093.2.5 小白鼠血细胞计数（稀释二百倍）1551761681491811.红细胞N=829，红细胞个数=8.29*10122.白细胞6485N=23，白细胞个数=11.5*1093.2.6 人血细胞计数（稀释二百倍）1.红细胞6957686775N=336，红细胞个数=3.36*10122.白细胞16172120N=74,白细胞个数=37*1093.3 数据汇总数值动物红细胞白细胞计数值/(1012个/L)理论值/(1012个/L)计数值/(109个/L)理论值/(109个/L)鲤鱼0.80.6-1.3未观察到4.0牛蛙0.470.53未观察到14.7-21.9家鸽2.993.2未观察到1.4-3.4家兔4.54.5-7116-13小白鼠8.297.7-12.511.54-12人3.363.5-5.0374-103.4 误差分析误差来源既有技术上的，也有客观因素。其中由于采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密也会带来误差；还有由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差。查阅相关资料，可通过以下途径减小误差:（1） 所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正; （2） 红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒;（3） 严格操作，从消毒、采血、稀释、充液到计数都应规范，尤其应注意的是血样稀释及充液时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台