开展原位杂交技术可行性报告(FISH)

荧光原位杂交可行性报告* * * * *医院鱼类的发展前景鱼的原理1FISH 1的技术特点鱼的意义2鱼在临床中的应用及操作程序.8鱼类项目对社会和医院的益处公司简介14售后服务15开展荧光原位杂交检测项目一、发展前景。鱼随着医疗水平的全面提高，“个体化诊断”、“分子诊断”和“靶向治疗”越来越受到重视。近十年来，以荧光原位杂交(FISH)为代表的分子细胞遗传学已从基础医学研究广泛转移到临床医学检测。该技术操作简单，重复性好，灵敏度和特异性高，非常适合临床医学检验。在美国，FISH探针已被美国食品和药物管理局列为“特异性分析试剂”，可用于未经批准的临床医学检测。FISH已成为一种常见的检测方法，广泛应用于产前产后遗传病诊断和血液肿瘤、实体肿瘤等方面的检测。FISH检测的样本种类很多，可以是羊水、绒毛、流产组织、外周血、骨髓、体液和各种肿瘤组织。近年来，荧光原位杂交技术在中国得到了越来越广泛的应用，尤其是在血液诊断、产前诊断和实体肿瘤检测方面。二。原则。鱼原理：基于核酸碱基互补配对原理开发的检测技术，主要是利用DNA序列的互补性，通过荧光标记的DNA探针与待检测预处理样品的DNA进行原位杂交，并在荧光显微镜下区分和计数荧光信号，来检测和诊断细胞和组织样品中的染色体或基因异常三。鱼类的技术特征鱼类技术有以下优点：操作简单用离心机、水浴锅等常规仪器即可完成实验l需要更少的劳动力整个过程的劳动力操作时间在2-4小时之间。l结果报告在常规FISH项目中快速基因或染色体检测通常在24小时内完成l直观的结果-观察结果只需要在荧光显微镜下判断信号的数量，无需对人员进行特殊培训。四.鱼类的重要性鉴别诊断指导临床用药，指导临床用药方案的选择，并选择适用的靶向药物。l判断预后指标，预测疾病风险。辅助病理分级l监测治疗效果快速产前诊断五：鱼在临床上的应用和操作过程1.在乳腺癌中的应用1)检测项目：HER-2/neu基因，17号染色体FISH在乳腺癌诊断和指导用药方面显示出巨大优势。乳腺癌是最常见的恶性肿瘤，严重危及妇女的生命。寻找有效的治疗方法一直是肿瘤学研究的重要方向。大约25-30%的乳腺癌有HER-2/neu基因扩增。一般来说，HER-2/neu扩增与乳腺癌预后不良有关。赫赛汀是一种针对HER-2/neu异常扩增的靶向治疗药物，可特异性抑制HER-2/neu癌基因扩增的癌细胞生长，大大改善患者预后。HER-2/neu扩增是赫赛汀的关键指标，检测HER-2/neu的金标准是FISH。目前，临床检测HER-2扩增主要采用免疫组织化学和FISH方法。免疫组化方法是病理科的常规检测项目，价格低廉，但对于靶向药物治疗，蛋白质水平检测不能完全替代基因检测。它主要表现在两个方面：免疫组化结果的评估需要人工主观判断，1和2结果的可能性尚不清楚。关于内部参考，由于免疫组织化学的特点，不可能在一个实验中检测到同一样品的两个指标。由于17号染色体的非整倍性，这种检测可能导致错误的结果。鱼类优势：1.FISH结果测定是在荧光显微镜下观察荧光信号的数量，没有主观原因。2.FISH可以同时检测17号染色体的数目，避免因17号染色体异常导致的错误结果判断。目前，相对公认的HER-2基因检测是按照以下程序进行的：赫赛汀表明内毛细胞O赫赛汀未指明32鱼-鱼赫赛汀表明鱼1下图是标准结果图表。红色信号代表HER-2基因。绿色信号用于检测17号染色体的数量。当红色和绿色信号的比率大于2.2时，可以确定HER-2基因被异常扩增。2)乳腺癌患者中TOP2A基因的检测：lop2a基因异常的乳腺癌患者对含蒽环类药物的治疗更敏感：临床研究表明，如果患者有TOP2A基因异常，与CMF相比，使用CEF的患者有更长的无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)。TOP2A基因异常的患者可以明显受益于含有拓扑异构酶抑制剂的辅助化疗方案。用CEF方案治疗TOP2A扩增的患者可以减少61%的复发风险和51%的死亡风险，而用CEF方案治疗没有TOP2A扩增的患者只能减少6%的复发风险和10%的死亡风险。TOP2A基因异常的乳腺癌患者预后较差：乳腺癌研究表明，TOP2A在乳腺癌组织中的表达水平与其预后指标有关。TOP2A基因异常的患者预测无复发生存期(RFS)较短，但总生存期(OS)没有改变。TOP2A缺乏症患者的预后更差。2.2:FISH在宫颈癌中的应用测试项目：TERC基因宫颈癌是世界上35岁以下女性第二常见的肿瘤，也是女性生殖系统最常见的肿瘤，严重危害女性健康。在中国，每年约有100，000名新的宫颈癌患者和30，000至50，000例死亡。早期诊断是治疗宫颈癌和改善患者预后的有效方法。世界上常用的宫颈癌筛查方法有宫颈涂片形态学检查和人乳头瘤病毒检测。细胞涂片检查的敏感性一般在55%-80%左右，但一旦观察到异常细胞，特异性可达90%以上。虽然人乳头瘤病毒检测是高度敏感的，从84%到100%不等，但它的特异性一般只有64%到95%，因为许多人乳头瘤病毒阳性的病人在一年内会变成阴性，不会引起宫颈癌。鉴于上述问题，从宫颈癌筛查和早期诊断的角度来看，迫切需要其他可靠的指标或手段来辅助上述检查，从而使筛查更加准确、可靠和可预测。美国国立卫生研究院直接领导的宫颈癌研究表明，在从非典型增生向宫颈癌转变的过程中，几乎所有的宫颈细胞都伴随着3号染色体长臂的扩增。其中，最重要的基因可能是人类染色体末端酶基因。该基因的扩增可以防止细胞凋亡，从而导致肿瘤的产生。TERC基因检测的意义：准确区分宫颈细胞的高癌前病变和低癌前病变，即CIN2和CIN3与正常、ASCUS和CIN1相区别，敏感性和特异性均在90%以上L预测CIN1/CIN2发展为CIN3的危险因素，敏感性为100%，特异性为70%端粒酶逆转录酶基因扩增的检测对宫颈癌的筛查和早期诊断非常有帮助。检测这种基因扩增的标准方法是FISH技术。3.3:FISH在膀胱癌检测中的应用检测项目：p16基因，3、7、17号染色体膀胱肿瘤是泌尿系统发病率最高的肿瘤，约占我国恶性肿瘤的20%。膀胱癌在男性中更常见，男女比例约为3: 1。膀胱癌的发病率大多在50岁以上，并且随着年龄的增长而增加。近三分之二的膀胱癌患者年龄超过65岁。膀胱癌最初诊断时大多局限于膀胱，但约6%的患者有远处转移。不同临床阶段的膀胱癌，包括早期疾病，在治疗后具有非常高的复发率。复发性膀胱癌的生物学行为与原发性疾病显著不同，并趋向于发展到更高的临床阶段和病理分化水平。因此，膀胱癌的早期诊断和术后监测成为疾病治疗的关键环节。目前，美国食品和药物管理局已批准将上述几项检测指标用于膀胱癌的检测和监测。FISH主要用于根据以下四个指标检测膀胱癌：p16基因和3、7、17号染色体。9号染色体(如p16基因)部分或全部缺失是最常见的遗传异常之一，与膀胱癌的早期发生密切相关。此外，膀胱癌的发展与染色体不稳定性密切相关，如3号、7号和17号染色体的非整倍体。如果上述四项指标中有一项异常，患者极有可能患有膀胱癌。如果两个或多个指标异常，可以诊断膀胱癌。如果一个指标出现复杂异常，也可以判断为膀胱癌患者。与传统的膀胱癌检测和术后监测方法相比，FISH以尿液为样本，避免了有创采样对患者造成的心理和生理刺激。更容易被病人接受。鱼类检测的主要特点是：无创早期诊断1)通过膀胱镜检查监测膀胱癌复发2)检测与膀胱癌进展和分级相关的染色体异常3)不受卡介苗免疫治疗的影响与现有的诊断方法相比，复发可以首先在分子水平上发现。4.4:FISH在产前检测中的应用检测项目：13、18、21、x和y染色体数很大一部分遗传病是由染色体异常引起的。目前，已经发现了1000多种。例如，唐氏综合征主要是由21号染色体异常引起的，表现为暗三倍体。患者通常患有严重的疾病，如发育迟缓、智力迟钝等。此外，具有13号染色体三倍体的患者也表现出严重的疾病，例如伴有唇裂的严重精神缺陷。据统计，人群中各种染色体疾病的发病率相当高。新生儿发病率高达7.3。一些染色体异常，如由18号染色体三倍体引起的爱德华综合征，甚至达到人口的1/2000。在当前晚婚晚育的社会形势下，上述染色体的发生率更高。因此，人们越来越重视对胎儿进行产前检查的必要性，及时发现异常胎儿，识别胎儿所患的染色体疾病类型，从而采取相应的措施。研究表明，由13、18、21、X和Y染色体异常引起的疾病占新生儿染色体疾病的85%-90%。也就是说，只需要分析上述五条染色体来检测常见的唐氏综合征(21三体)、18三体、13三体、克莱恩费尔特(47，XXY)、特纳(45，X)、47三体、XXX、XYY等。传统的产前诊断使用羊水细胞样本。细胞培养后，根据羊水中中期细胞染色体的形状和带型配对染色体，制作染色体图谱，用于染色体疾病的诊断。核型分析需要大量中期细胞。应首先培养获得的羊水，并且仅在样品培养7天后才能测试样品。这种检测方法耗时长，操作繁琐，对医务人员要求高，不能在各级医院广泛实施。此外，核型分析只能诊断染色体数目和大片段的异常，而小片段的缺失，如小于5Mb的片段缺失，则无法区分。荧光原位杂交作为一种准确、快速的分子诊断工具，在产前诊断领域具有明显的优势：1)待测细胞无特殊要求，分裂期或间期细胞均可测试。2)不需要细胞培养，可以立即采取并测试该方法。3)诊断报告可在24小时内完成，为医生和受试者提供及时的参考数据。4)操作简便，不同颜色的荧光探针可以同时检测同一样品中多条染色体的异常5.5:FISH在血液肿瘤中的应用慢性淋巴细胞白血病(CLL)测试项目：RB1、P53、大气压、D13S25、CSP12慢性淋巴癌是欧洲和美国高加索人中最常见的白血病。在中国，慢性淋证也越来越常见。临床上，一些慢性淋病患者只能存活几个月，而另一些患者可以存活20年以上。长期以来，人们对慢性淋证的认识一直停留在临床观察上。近年来，随着基因组医学的发展，我们对慢性淋证的发生和发展有了更好的认识。尤其重要的是，通过使用分子细胞遗传学技术，人们对慢淋病患者的预后变得更加科学和准确。现在已经知道，与任何其他现有指标相比，几个遗传指标可以更准确地预测慢淋病患者的预后，例如p53基因缺失(平均存活时间：32个月)、ATM基因缺失(平均存活时间：79个月)、12三体(平均存活时间：114个月)和13q14缺失(平均存活时间：133个月)等。检测这些指标的标准方法是FISH技术。毫无疑问，这些慢性淋证遗传学研究的发现为临床个体化治疗提供了非常重要的理论基础和指导。多发性骨髓瘤检测项目：RB1、P53、1q21、D13S319、IGH多发性骨髓瘤也是一种常见的血液肿瘤。临床上，患者的预后普遍较差，迫切需要新的治疗方法。目前，国际血液学界普遍根据不同的临床和实验室指标评估患者的预后风险，然后制定相应的治疗方案。因此，探索准确的预后风险评估指标非常重要。目前公认的可靠指标包括2-微球蛋白、C-反应蛋白、骨髓浆细胞形态、浆细胞增殖率和分子细胞遗传学改变，其中分子细胞遗传学指标最为重要。现在已知多发性骨髓瘤患者在接受常规化疗后平均可以存活24.7个月(如果有T(4；14)和/或t(14；16)易位或p53基因缺失)，42.3个月(如果13q14缺失)或50.5个月(仅t(11；14)易位或没有任何上述遗传变化。检测这些基因变化的标准方法是FISH技术。慢性粒细胞白血病检测项目：费城染色体检测(BCR/比利时)慢性粒细胞白血病(CML)的特征是白细胞增多和脾肿大，其发病率为0.5/10万。大多数30-40岁的人男性发病率略高于女性。90%以上的髓系白血病(CML)患者具有典型的Ph染色体，即t染色体(9；22)(q34；Q11)易位形成BCR/ABL融合基因。不到10%的患者有变异、复杂或隐匿的酸碱度易位。BCR/ABL融合基因编码的蛋白质具有酪氨酸激酶活性，导致恶性细胞增殖。Ph染