西兰花贮期黑斑病病原菌鉴定及防治技术研究

J ； ， 工 素 研 究 探 讨 西兰花贮期黑斑病病原菌鉴定及防治技术研究 刁小琴，关海宁，刘春龙，郭丽 绥化学院食品与制药工程 学院 ( 绥化 1 5 2 0 6 1 ) 摘要西兰花 贮期主要病 害是 黑斑 病 ，经病原茵鉴定 ，属芸 苔生链格孢 菌。4 的低 温只能抑制 而不能 终止该菌的生长，而3 5 q C 可有效抑制该菌的生长。p H在5 9 的范围内菌落生长良好，p H低于3 和高于1 1 时 该菌几乎完全受到抑制。臭氧和减压均能抑制该病原菌的生长，浓度为3 0 0 mg m 的臭氧杀菌效果显著 ， 浓度再增高，杀菌效果与3 0 0 mg m 差异不显著，在1 0 1 - 2 0 k P a 的压力范围内，压力越低 ，抑菌效果越 好 ，以压力4 0 k P a 较 为理 想。 关键词 西兰花 ；黑斑病 ；鉴 定；防治 S t u d i e s O n t h e l d e n t if i c a t io n a n d P r e v e n t i o n o f t h e P a t h o g e n i n St o r a g e o f Br o c c ol i Bla c k Sp o t Dis e a s e Di a o Xi a o q i n ， Gu a n Ha l n i n g ， L i u Ch u n l o n g ， GU O L i Co l l e g e o f F o o d a n d P h a r ma c e u t i c a 1 E n g i n e e r i n g S u i h u a C o l l e g e( S u i h u a l 5 2 0 6 1 1 Abs t r a c t M a i n di s e a s e i S b l a c k s p o t d i s e a s e i n s t o r a g e o f b r o c c o l i I t wa s Al t e r n a r i a b r a s s i c i c o l a b y i d e n t i f y i n g o f p a t h o g e n T h e p a t h o g e n c o u l d b e r e s t r a i n e d b u t n o t b e t e r mi n a t e d a t 4 Ho we v e r , h i g h t e mp e r a t u r e( 3 51 s e e ms t o e f f e c t i v e l y r e s t r a i n i t s g r o wt h T h e p a t h o g e n c o u l d gro w i n t h e c o n di t i o n o f p H 5 - 9 wh i l e i t g r e w s l o wl y u n d e r t h e c o n d i t i o n o f s t r o n g a c i d a n d s t r o n g a l k a l i Oz o n e a n d d e c o mp r e s s i o n c o u l d i n hi b i t gro wt h o f p a t h o g e n Th e e ffe c t o f s t e ril i z a t i o n b y 3 00 mg m o z o n e o n t h e p a t h o g e n i S o b v i o u s Ho we v e r l i, t he ba c t e r i c i d a e ffe c t S t h e s a me a s t h a t o f 3 0 0 mg mo z o ne wh e n the c o n c e n tra t i o n o f o z o ne i s h i g h e r tha n 3 0 0 mg mj I n a d d i t i o n ，t he l o we r the p r e s s u r e i S ， t h e mo r e p r o mi ne n t t h e e ffe c t i S Th e i n h i b i t i ng e ffe c t i S o p t i ma l wh e n t h e p r e s s u r e d r o ps t o 4 0 k P a Key wor d s b r o c c ol i ； b l a c k s p o t d i s e a s e ； i d e n t i fi c a t i o n； p r e ve n t i o n 西兰花( B r a s s i c a o l e a c e a Lv a r i t a l i c a ) 又名绿菜花 、 青花菜，是十字花科芸苔属甘蓝的一个变种，为一二 年生的草本植物。它不仅富含各种蛋白质、糖类 、脂 肪 、矿物质 、维生素c 和胡萝 卜 素等人体必需元素 ， 营养价值远远高于一般蔬菜 ，而且富含4 一 甲基亚磺酰 丁基芥子油苷 ，具有一定的抗癌作用l l 】 。但是西兰花 采后的花球表面却经常出现黑色的病斑 ，使其迅速衰 老 和黄化 ，不 但影响 了蔬菜 的表观 商品性 ，缩短 了货 架期 ，同时也给其食用品质带来了安全隐患。目前 ， 对 于西 兰花贮 期的研究主要集 中在 生理生化和品质指 标上 ，而对西兰花贮期病害及防治技术则未发现有深 入研究与报道。本研究在对其贮期病原菌进行分离鉴 4 结论 甘薯叶黄酮能刺激N I D D M J 鼠的Ma f A 基因，使其 表达量增加，从而达到降血糖作用。 参考文献 ： 李凤林， 李青 旺 大孔树脂纯化甘薯叶黄酮的工艺研 究 I L I l l 中国食品添加剂， 2 0 0 9 ， ( 4 ) ： 1 0 3 1 0 8 2 】 高荫榆， 洪雪娥， 罗丽萍， 等 甘薯叶柄藤类黄酮的体外抗 氧化作用研 究 I 1 _ 食品科学， 2 0 0 6 ， 2 7 ( 7 ) ： 1 0 3 - 1 0 4 3 L i F e n g l i n ， L i Qi n g wa n g ， G a o Da we i ， e t a 1 Th e o p t i ma l e xt r ac t i on pa r a m e t er s a nd ant i di abet i c a ct i vi t y of fl a v o n o i d s f r o m I p o mo e a B a t a t a s l e a f【J 1 Af r _ J Tr a d C AM， 2 0 0 9 ， ( 2 ) ： 1 9 5 2 0 2 4 I 冯彩宁， 李青旺， 李凤林， 等 红薯叶黄酮对糖尿病P D X 一 1 基 ，、 食品工业 ) 2 0 1 2 - b N3 3 gN 4 期 因表达的影响 黑龙江畜牧兽 医， 2 0 0 5 ， 1 2 5 ( 1 2 ) ： 1 0 8 1 0 9 【 5 李凤林， 李青 旺， 高大威， 等 超声波法提取甘薯叶总黄酮 的工艺研究U 1 江苏调味副食品， 2 0 0 8 ， ( 3 ) ： 1 3 1 8 6 Ka n e t o H， Ma t s u o k a T A， Na k a t a n i Y A C r u c i a l Ro l e o f Ma f A As a No v e l T h e r a p e u t i c T a r g e t f o r Di a b e t e s J J B i o 1 Ch e m ， 2 0 0 5 ， 2 8 0 ( 1 8 ) ： 1 5 0 4 7 1 5 0 5 2 7 1 W a n g H， Br u n T， Ka t a o k a K，e t a 1 MAF A Co n t r o l s Ge n e s I mp l i c a t e d i n I n s u l i n B i o s y n t h e s i s a n d S e c r e t i o n Di a b e t o l o g i a ， 2 0 0 7 ， 5 0 ( 2 ) ： 3 4 8 - 3 5 8 8 】S t r a k o v a N， Eh r ma n n J B a r t o s J ， e t a 1 P e r o x i s o me P r o l i f e r a t o r - Ac t i v a t e d Re c e p t o ( P P AR)Ag o n i s t s Af f e C t Ce l l Vi a b i l i t y ，Apo pt o s i s a n d Ex pr e s s i o n o f Ce l l Cy c l e Re l a t e d P r o t e i n s i n Ce l l L i n e s o f Gl i a l Br a i n T u mo r s J Ne o p l a s ma ， 2 0 0 5 ， 5 0 ( 2 ) ： 1 2 6 - 1 3 6 研 究 探 讨 工 素 定的基础上，研究了抑制菌体生长的方法，以期为防 治西兰花黑斑病提供理论依据。 1材料和方法 1 1 材料 西兰花 ，采 自绥化市肇东农家果园 ；培养基为 P D A( 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 )。 1 2 方法 1 2 1 病原菌 的分离 、纯化和鉴定 按常规真菌分离方法将花球表面感病组织病原菌 分离，得到菌种 ，并进行单孢分离和纯化。将纯化的 菌种移至P D A 平板上2 8下进行培养 ，按玻片培养法 观察并依据魏景超 真菌鉴定手册鉴定 。 1 2 2 病原菌致病性鉴定 将分离纯化后的菌种孢子浓度定至1 0 个 m L，吸 取5 m L 孢子悬浮液，注入灭菌喷壶中，在每颗健康西 兰花表面均匀喷洒。将接种过的西兰花花球置于灭菌 干燥器中，同时在干燥器底部注入5 mL 的无菌水确保 湿度，用一层硫酸纸和一层牛皮纸将干燥器封闭，同 时保持空气流通。将干燥器置于常温下贮藏，5 d 后观 察花球上的发病状况和病症形态。 1 2 3 抑制病原菌生长和孢子繁殖试验 试验所用培养基为P D A 培养基。供试菌种经5 d 平 板培养，用直径6 m m的打孔器打取菌落边缘的菌块， 移入新的P D A 平板内，根据不同要求进行处理，每个 处理均设3 个重复。每 日使用十字交叉法测量不同处 理下的菌落直径 ，绘制生长曲线 ，直到生长最快的处 理菌落长满培养皿。 1 2 3 1 温度试验 将移植有菌块的P D A 平板置于4 0 ，3 5 C，2 8， 1 8 ，4 环境下培养。 1 2 3 2 p H 试 验 用1 m o l L H C 1 和1 mo l L N a O H 将P D A 培养基调配 成3 ，5 ，7 ，9 ，1 1 五种不同的p H，在室温下 培养 。 1 2 3 3 臭氧试验 将移植有菌块 的P D A 平板置于臭氧浓度分别为 0 ，1 0 0 ，2 0 0 ，3 0 0 ，4 0 0 mg m 的双层P E 塑料袋中， 每天用相应浓度臭氧处理一次，在室温下培养。 1 2 3 4 减压试验 将移植有菌块的P D A 平板置于压力分别为2 0 0 ， 4 0 0 ，6 0 0 ，8 0 0 ，1 0 1 3 k P a 的真空干燥器中，每天抽 真空一次，使其保持相应真空度 ，在室温下培养。 2结果与分析 2 1 病原菌的鉴定 病原菌菌落在P D A 培养基上初为白色，后变灰黑 色，铺散状，容易产生孢子 ( 见图1 )；分生孢子梗淡 褐色，直立 ，分隔，分生孢子链状，淡褐色至褐色 ， 绥化 晕 院科 举技 术研 项 目r oK1 1 0 2 0 0 2 1 具横膈膜2 6 个 ，纵隔膜0 3 个 ( 见图2)，根据病菌 的形态特征 ，同时参考魏景超 真菌鉴定手册 和 张天宇 中国真菌志 等著作 ，初步认定该病原菌 为半知菌亚门丝孢纲丝孢 目链格孢属芸苔生链格孢菌 l t e r n a r i a b r a s s i c i c o l a ) 。 图1 西兰花贮期黑斑病病原菌菌落特征 图2 西兰花贮期黑斑病病原菌孢子形态 2 2 病原菌致病性鉴定 使用浓度为l 0 个 m L 的孢子悬浮液喷洒健康西兰 花花球后，2 4 h P q 西兰花花球大面积发病 ，4 8 h 内产 生大量黑色孢子，导致感病花球变黑 ，同时将接种过 该病原菌的健康花球再次进行病原菌的分离 、纯化得 到同样的病原菌。上述结果证明芸苔生链格孢菌是引 起西兰花贮期黑斑病的主要病原菌。 2 - 3 病原菌生长 的抑制试验 2 3 1 温度对病原菌生长的影响 温度是影响病原菌生长的首要因素。图3 可以看 出，4 c c 低温能够显著抑制芸苔生链格孢菌的生长 ， 但是随着时间的推移 ，该病原菌仍缓慢生长 ，表明低 温对该病原菌没有致死作用 ，因此一般冰箱的冷藏室 无法长期保存西兰花。随着温度的提高，该病原菌生 长速度显著加快 ，2 8生长最为迅速 ，因此冷藏的 西兰花一旦进入常温环境销售就会迅速发病。然而 ， 图3 还可以看出，3 5条件下，该菌的生长也受到抑 制，生长速度接近低温时的生长速度。当温度再升高 达到4 0时该菌的生长完全受到抑制 ，说明该病原菌 不耐高温，因此在进行西兰花保鲜时可尝试结合热处 理，降低西兰花病害的发生。 食 品工业 2 0 1 2 年第3 3 卷第4 期 ， ， 、 J ；l 工 素 研 究 探 讨 9 0 7 5 吕 6 0 _皿 i 4 5 犍 媳3 O 1 5 O O 一 4 廿 _ _1 8 3 4 培养天数 d 图3 不同温度对病原菌菌落生长的影响 2 3 2 p H 对病原菌 生长 的影 响 图4 可 以看 出 ，西兰花黑斑 病病原菌在p H 5 Np H 7 的环境下 ，生长旺盛 ，培养5 d ，几乎长满平皿。 当p H 为9 时，该菌生长能力受到抑制，在p H 为3 和1 1 时，几乎完全停止生长，说明该菌在中性和弱酸性环 境下能够正常生长，而对碱性环境有较高的敏感性， 因此在进行西兰花保鲜时可选择碱性农药和保鲜剂。 O 一 p H3 90 75 l 6 0 4 5 艇 翘3 0 l 5 0 培养 天数 d 图4 不 同p H 对病原菌 茵落生长 的影 响 2 3 3 臭氧对病原菌生长的影响 臭氧是一种 强氧化 剂 ，对果蔬表面 的微生物具有 良好 的杀灭作用 ，同时不存在残留物。图5 看出，臭 氧具有抑制病原菌生长的作用 ，在0 4 0 0 mg m 浓度范 围内，臭氧浓度越大 ，抑菌效果越好。病原菌在P D A 上培养5 d ，用3 0 0 mg m 浓度的臭氧处理的菌落 ，其 生长抑制率为6 4 4 ，同时经方差分析和多重比较 ， 臭氧浓度高于3 0 0 m g m 。 时，各处理间菌落直径无显著 差异 0 0 5 ) 。综合考虑，以3 0 0 m g m 的臭氧处理对 抑制病原菌生长较为理想。 2 3 4 减压对病原菌生长的影 响 图6 看出，压力降低对病原菌生长具有明显的抑 制作用，压力越低 ，抑菌效果越好。病原菌在P D A 上 培养5 d ，用2 0 k P a 压力处理的病原菌，其生长抑制率 最高 ，达 1 6 7 8 。用4 0 k P a 压力处理的病原菌，其 抑制率达 t 6 3 3 。经方差分析和多重 比较，2 0 k P a 压力处理与4 0 k P a 压力处理相 比，菌落直径间差异不 显著( P0 0 5 ) 。因此 ，以4 0 k P a 的压力处理对抑制病 原 菌生长较好 。 ， ， 、 食品工业 2 0 1 2年第3 3 卷第 4期 3 4 培养天数 d 图5 不同臭氧浓度对病原 菌菌 落生长 的影响 2 3 4