[医学]第三节实验与应用PPT课件

第3节实验技术和应用，第2节讨论，实验步骤总结，溶液制备，溶液显色，测量，仪器调试，数据记录，数据处理，结果报告，溶液中样品制备样品的测定，固-液溶剂转换要求：1。受试组分2的良好溶解能力。在测量波长范围3内没有吸收。测试组分在溶剂4中具有良好的吸收峰形状。无毒、不挥发、廉价，4，2。仪器测量条件的选择1。波长选择选择最大吸收波长max作为测量波长。选择原则：最强吸收带的最大吸收波长与测量波长的吸收峰一样尖锐。可以选择灵敏度较低的波长测量来减少偏差。问题：如何绘制吸收曲线？吸光度范围的光源不稳定，读数不准确，测量浓度误差因实验条件的偶然变化而大或小，相对误差大。a的测量范围为0.2 0.8。相对误差是：如果吸光度太大或太小，该怎么办？仪器狭缝宽度的选择将由专业人员调整，不会导致吸光度下降。显色反应条件的选择，1。显色剂及其用量的选择，显色反应：待测组分向有色物质显色剂的转化：与待测组分形成有色物质的试剂，a .显色剂的选择要求：(1)与待测离子发生显色反应的产品组成恒定，稳定性好，显色条件易于控制；(2)产品吸收能力强，即大；(3)显影剂与产品的颜色对比好，即吸收波长明显不同，一般要求max 60nm。显色剂用量的选择方法：先确定待测组分的浓度和其他条件，然后加入不同量的显色剂，分别测定吸光度a；吸光度A和显色剂CR量之间的关系如图所示。选择曲线变平的位置。Cr，a，b，a，b，9，2。反应的酸碱度(显色反应的重要条件)，显色剂是一种有机弱酸(或弱碱)，而介质的酸度直接影响其解离度，从而影响显色反应的完全程度。相同的金属离子与相同的显色剂反应生成具有不同配位数的不同颜色的配合物，例如在不同的酸碱度条件下Fe3和水杨酸的配合物。酸碱度对显色反应的影响如下：10。测定酸碱度的方法：确定溶液中待测组分和显色剂的浓度，改变溶液的酸度(酸碱度)(由缓冲溶液控制)，并画出一条酸碱度曲线，从中发现平坦部分在酸碱度范围内。a，b，11，显色(发色)时间：完成显色反应所需的时间稳定时间：显色后有色物质颜色保持稳定的时间，3。显色时间，大多数显色反应在常温下进行，有些反应必须在较高的温度下进行。b、绘制工作曲线和样品测定应使溶液温度一致。4。显色温度。12，问题。用邻菲罗啉测定铁含量时，进行如下操作：将：盐酸羟胺溶液依次加入铁标准溶液中：摇匀，然后分别加入2毫升1.5克/升邻菲罗啉和5毫升乙酸钠溶液，用蒸馏水稀释至刻度线，摇匀。分别加入邻菲罗啉、盐酸羟胺和醋酸钠溶液有什么效果？讨论了在铁标准溶液和供试品溶液中加入邻菲罗啉溶液、盐酸羟胺溶液和醋酸钠溶液的效果。1，邻菲罗啉的作用，(1)良好的选择性，(2)高灵敏度，(3)生成的有色化合物的恒定组成和稳定的化学性质，(4)对比度60nm，(5)在显色条件下容易控制，可见分光光度法：通过测量有色物质对证书的吸收程度来确定第一节。波长选择2。吸光度范围的选择3。选择狭缝宽度4。显影剂和剂量的选择。溶液ph值的选择方法相同：取曲线的平坦部分，由专业人员调整，0.2-0.8，最大吸收波长，16，4。参考溶液的选择，参考溶液的类型：1。溶剂参比样品溶液成分简单，其他成分少，几乎不吸收测量波长的光，显影剂无吸收，溶剂用作参比溶液。2.试剂参考显影剂或其他试剂在测量波长下有吸收。根据显色反应的相同条件，仅不添加样品溶液，并且还添加试剂和溶剂作为参考溶液。为什么需要使用参考解决方案？消除溶液中其他成分以及吸收池和溶剂对光的反射和吸收造成的误差，使测得的吸光度真正反映待测溶液的吸收强度。样品参考样品基质溶液在测量波长下有吸收，并且与显影剂没有颜色反应。除了不添加显影剂之外，在与颜色反应相同的条件下处理参比。4.褪色参比显色剂和样品基质具有吸收性，可以将褪色剂加入显色剂中，与被测离子选择性反应，生成无色络合物(被测组分除外)。嘿。18.主要干扰情况有：1 .共存离子有颜色：Fe3和Cu2。干扰物质与显影剂或测试组分形成更稳定的络合物，使得显色反应不完全。3.干扰物质与显影剂形成有色化合物。测定条件下有吸收法、五种干扰消除法、十九种消除法。1.控制酸度以控制酸度，使待测离子显色，而干扰离子不产生有色化合物。例如，当磺基水杨酸用于测定Fe3时，如果Cu2共存，Cu2也可以与磺基水杨酸形成黄色络合物，从而干扰测定。如果溶液的酸度控制在2.5，铁可以与磺基水杨酸形成络合物，而铜则不能。选择合适掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身以及掩蔽剂和干扰组分的反应产物不干扰待检测组分的测定。3.选择合适的测量波长4。分离。21、紫外-可见分光光度法的应用，22、紫外-可见分光光度法可用于有机化合物的定性鉴别、结构推断和纯度检验。1.未知化合物定性鉴别的定性依据：吸收光谱的形状、吸收峰的位置、摩尔吸收系数。方法：在相同条件下，测定未知物质和已知标准物质的吸收光谱，并进行比较。目前，最常用的标准图谱是：萨特勒标准图谱库，一、定性分析。23，2。有机化合物的结构推断。有机化合物的许多基团(发色团)，如羰基、苯环、硝基、共轭体系等。都有它们特有的紫外或可见吸收带。一些特征基团的识别，如204纳米左右有中强吸收带，260纳米左右有弱吸收带，精细结构是苯环的特征吸收。24，3。该化合物的纯度测试表明，该化合物在紫外区没有明显的吸收峰，杂质在紫外区有很强的吸收，因此可以通过紫外吸收曲线来检测该化合物中所含的杂质。例如，乙醇中杂质苯的测定，25，2，定量分析，定量分析，可见分光光度法定量分析，紫外分光光度法定量分析，有色物质的测定，紫外吸收物质的测定，26，单组分定量分析，a .吸光度系数法：已知待测组分的吸光度系数，测定溶液的吸光度，代入朗伯-比尔定律公式计算含量。A=kbc，单组分的定量分析：在某个样品中只需要测定一种组分，而在选定的测量波长下，其他组分则不需要2.在相同条件下测定样品溶液的吸光度，并根据上述标准曲线得到的回归方程计算浓度。以邻菲罗啉为显色剂，用标准曲线法测定微量Fe2，通过实验获得标准溶液和样品的吸光度数据(见下表)，并测定样品浓度。30，溶液：绘制一条以吸光度A为纵坐标、浓度C为横坐标的标准曲线，并使用线性处理程序进行线性回归处理。回归方程为：A=0.109105C 0.0073，相关系数r2=0.9994。标准曲线符合要求。将待测溶液的吸光度代入回归方程，样品浓度为：a，截距，B，斜率，相关系数，接近1线性。0.999，CX=(a-0.0073)/0.109105=(0.712-0.0073)/0.1091056.5110-5摩尔-1，请总结可见分光光度法和紫外分光光度法的联系和区别。(定义、条件、仪器、应用)，32，紫外和可见分光光度法之间的比较，可见分光光度法，紫外分光光度法，定义，基于物质吸收可见光的物质定性和定量分析的一类方法，基于物质吸收紫外光的物质定性和定量分析的一类方法，有色溶液；彩色显影剂；酸碱度控制；绘制吸收曲线，选择最大波长，减少干扰；适当参考液体、条件，绘制吸收曲线，选择最大波长；合适的参考液、仪器、400-780纳米钨灯、玻璃吸收池、200-400纳米氘灯、应时吸收池，一般