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文档简介

1、主题1微生物的实验室培养,主题23360微生物的培养和应用,2、细菌的菌落,识别菌株的重要依据,3,1。什么是徽章?3 .不同的培养基配方不同,但其基本成分都一样,包括哪些营养素?什么角色?请举例说明。阅读课本P1415相关内容,回答以下问题:2。根据不同的培养基分割标准,培养基的种类、制备特性及应用?4,1,基础:(a)培养基,(1)根据物理状态划分:培养基可以分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于分离菌株,确认殖民地等。(2)按功能,可分为选择培养基和识别培养基。(3)可以按成分分为天然培养基和合成培养基。1 .培养基的种类和用途,5,液体培养基:表面生长,均匀浑浊的生长,沉淀生长,back,半固态培养基:无动力,力量(分散),固体培养基:集落,6,微生物需要的5种营养素是:培养基的组成、碳源、氮源、无机盐、水、生长因子、无机碳源:CO2;NaHCO3等,有机碳源:碳水化合物、脂肪酸、花生粉、石油等,细胞物质和部分代谢产物组成从属营养微生物的能量,来源:作用:(1)微生物的碳源,7,无机氮源:N2,有机氮源:可向元素、牛肉奶油、蛋白胨、氨基酸等微生物提供n元素的营养物质。主要用于合成含有蛋白质、核酸和n的代谢产物。(2)微生物的氮源,概念:来源:作用:8,1。无菌技术是什么?无菌技术包括哪些方面?2.消毒是什么?灭菌?这两者有什么区别?常用的消毒灭菌方法是什么?什么要求?4 .请告诉我干燥热灭菌方法和高压蒸汽灭菌方法的操作步骤。思想2: 9,2。无菌技术,1 .无菌技术的概念,灭菌工作通常是指在培养微生物的工作中,防止杂细菌污染的所有方法。获得纯培养菌的关键是防止外来杂细菌入侵,10,33;消毒定义:使用比较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的一些微生物(孢子和孢子除外)。2.杀菌和杀菌的概念及其差异杀菌的定义:是指利用强的理化因子对物体内外所有微生物(包括孢子和孢子)进行完全杀菌的过程。11,煮沸消毒法:100 煮5-6分钟。巴氏杀菌:在70-75 下煮30分钟或80 下煮15分钟。化学药品消毒法:75%酒精、尼日尔消灭等皮肤消毒;氯消毒水源。紫外线消毒。消毒方法:3 .常用消毒灭菌方法,12,燃烧杀菌干热灭菌:1-2h在160-170 加热。蒸压:100kPa,121 保持15-30分钟。杀菌法:13,1。在有关微生物营养物质的叙述中,准确地说,a,碳源是物质不能是氮源b,碳源都是能源c,只有水以外的无机物质提供无机盐类d,仅提供无机氮源,d,课堂练习,14,2。对发酵项目的杀菌理解有误的有:a,防止杂细菌污染B,去除杂细菌c,培养基,发酵设备均为灭菌d,灭菌在接种前,B,15,3。其次是培养基、培养皿、接种环、实验者的手、空气、牛奶的杀菌法。化学消毒烧伤消毒干热杀菌、干热杀菌、紫外线消毒高压蒸汽灭菌巴氏杀菌a .b .、 C. 、d .、a、16、4。可以用作硝化细菌碳源、氮源和能量来源的物质包括()a .含碳有机物质、氨、光b .含碳武器、氮、氮c .含碳有机物质、氨、氨、D、17 5。杀菌技术有以下叙述。其中错误的是()a .实验操作的空间,操作者的服装及手杀菌。b .灭菌用于微生物培养的培养皿、接种机构及培养基等。c .为了避免对周围环境的微生物污染,实验工作在酒精灯的火焰附近进行d .实验时,应避免已消毒的物质器具与周围物品接触。d、18、6。以下物质中不能用作酵母碳源的是()含碳有机B蛋白胨c含碳无机物d花生粉等,对杀菌和消毒的理解不准确的是()a .杀菌是杀死环境中所有微生物的细胞,孢子,孢子B .杀菌和杀菌基本相同的c .接种环和燃烧灭菌d .一般的灭菌方法是燃烧灭菌,干燥和热灭菌,高压以下叙述的错误是()a .培养乳酸菌时,必须在培养基中加入维生素b。培养真菌时要提供培养基的PH为碱性c,培养细菌时要提供PH为中性或微碱性d,培养厌氧微生物时要提供厌氧条件。b,21,9。a,b,c是三种微生物。下表I,iii是用于培养微生物的三种培养基。a、b、c能在正常生长和繁殖;b在I中可以正常生长和繁殖,但a和c不能。c在中可以正常生长和繁殖,a和b不能。a、a、a、b、c都是独立营养微生物b、a、b是独立营养微生物,c、a是从属营养微生物,b是固定氮微生物,c是独立营养微生物D、a、b是固定氮微生物,c是从属营养微生物,D、22,1无菌技术除了防止实验室培养被其他外部微生物污染外,还有什么目的?2 .请判断以下材料或器械是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择相应的方法。(1)培养菌培养基和培养皿(2)玻璃棒、试管、烧瓶、吸管(3)实验者的手,(a)无菌技术还能有效地防止操作员自身感染微生物。a: (1),(2)需要灭菌。需要消毒。侧栅栏事故,23,微生物实验室培养的基本操作程序,1,仪器灭菌2,培养基的准备3,培养基的灭菌4,倒置版5,微生物接种6,温控器的培养7,菌株的保存,24,3,实验工作,(a)牛肉奶油蛋白胨培养基的制备阶段,(1)计算(2)计量,(3)熔融3360 PH值,(4)将灭菌:锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅,压力为100kPa,温度为121,杀菌15 30分钟。(5)。倒置的平板:培养基冷却到约50 时,在酒灯附近倒入板。二维后观察板,可用于接种,没有细菌污染。26,背板技术,1。在火边的桌子上放上灭了菌的培养皿,右手拿着装有徽章的锥子瓶,左手拔掉了棉花插头。1,2,3,4,27,背板技术,2。右手拿着锥形瓶,让瓶口快速通过火焰。1,2,3,4,28,背板技术,1,2,3,4,3。用左手的拇指和食指将培养盘打开,在比瓶口稍大的间隙,右手将锥形瓶的培养基(约10-20毫升)倒入培养盘,左手立即盖上培养盘的盖子。29,背板技术,1,2,3,4,4。等待冷却凝固大约需要5 10分钟。然后反向放置平板,使盘子位于底部,盘子位于顶部。30,1。灭菌培养基后,冷却到50 ,才能倒入板。你用什么方法估计徽章的温度?a:你可以用手触摸装有徽章的锥子瓶,如果锥形瓶的温度降到刚刚不烫的程度,你可以倒着做板。,问题讨论,31,2。为什么要让锥形瓶的瓶盖通过火焰?答:通过燃烧灭菌防止瓶口的微生物污染培养基。32,3。平板电脑凝结后为什么倒置放置平板电脑?答:如果平板凝结,则碟子盖上的水滴凝结,凝固的培养基表面湿度高,如果翻转平板,培养基表面的水分会更好地挥发,碟子盖上的水滴可能会落入培养基中受到污染。33,4。在倒板过程中,如果不小心在盘子盖和盘子底之间的部位上炸了培养基,还可以用这个盘子培养微生物吗?怎么了?答:建议不要用这个盘子培养微生物,因为空气中的微生物可以在盘子盖上和盘子底部之间的培养基中繁殖。34,9。有关牛肉软膏蛋白胨固体培养基的制备,记载有误的有:()a .计算、计量、熔化、背板、灭菌b .将牛肉软膏与计量纸一起放入燃烧器c。培养基冷却到50 时,板d .板冷却约5 10分钟后,将板倒置放置。a,35,10。错误地操作皮瓣是()a .把细菌放在火旁边的桌子上。b .使打开的风扇瓶盖迅速通过火焰。c .培养皿打开时,培养皿打翻在桌子上。盘子冷却后要倒放。c,36,(2)纯化大肠杆菌,平板清洗和稀释版画法,接种微生物:纯化原则:将细菌稀释或分散为单个细胞,以单个菌落,这种菌落是经过纯化的细菌菌落,37,平板洗涤,稀释涂层板法,38,39二是留在贝齐的单个细胞不能形成规则的群体,菌落沿着被刮的地方生长,形成带状的群体。、45、46、为什么在工作的第一阶段和每个划线之前烧掉预防回路?划线工作结束时需要接种疫苗吗?怎么了?答:运营的第一步是避免接种环中可能存在的微生物污染培养物。每次划线前预防接种环是为了在上次划线结束后杀死留在环中的菌株,以便下次划线时接种环的菌株立即从上次划线结束开始,随着划线次数的增加,每次划线时菌种数量逐渐减少,从而获得殖民地。刮后燃烧接种环,可以及时杀死接种环中残留的菌株,防止细菌污染环境或感染者。52,2。燃烧后的接种环,为什么冷却后再刮?答:杀死菌株,以免接种环温度太高。3 .进行第二个和下一个线条处理时,为什么总是从上一个线条处理的终点开始进行线条处理?答:画线后,线末端的细菌数量比线的起点少,每次从线的终点开始,细菌数量减少,逐渐减少,最终得到由单个细菌繁殖的群体。53,11。以下关于平扫接种的错误操作是()a .在火上放入接种环,b .将冷却的接种环浸入细菌中,然后将环液和c .深层细菌和刮除与火焰旁d .刮除时最后一个区域的刮除和第一个区域的刮除连接起来。d,54,2。稀释涂层板法,55,1。6个试管灭菌,每个有9毫升水,按101106的顺序编号。56,2。将1mL培养菌液拖到皮液管,注入第二个试管。用手指轻轻按液晶的橡胶头,吹三次,充分混合细菌和水。57,3。从101倍稀释的试管中拉出1mL稀释剂,注入102倍稀释的试管,重复步骤2。依次类推,直到最后试管稀释完成。58、注意:吸管必须灭菌。试管口和吸管运行时距离1 2厘米,计算每个样品的集落数:每个样品的集落数=(cv) m,其中c是在其中一个稀释度中生长的平均集落数,v是用于涂层平板的稀释液的体积(ml),m是稀释倍数。60,61,62,63,64,平板涂层的所有工作都必须在火焰附近进行。除了平板划线和系列稀释无菌操作要求外,想想看,第二阶段应该如何进行灭菌操作?工作的所有细节都要保证“无菌”。例如,酒井灯和培养皿之间的距离要适当,吸管头不能接触其他物体,吸管必须在酒井灯的周围。讨论问题,65,微生物恒温培养,微生物恒温培养,66,微生物恒温培养,67,菌种保存,1。临时保存:接种于固体倾斜培养基,菌落生长后,保存在4 冰箱。2.长期保存法:甘油冷冻管法,68,4,课题成果评价,(a)培养基的制作是否适当,未接种的培养基在孵化器中保温1 2后,如果母体不生长,培养基的制造就成功了。否则要重新制造。69、(2)接种工作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致,并符合大肠杆菌菌落的特性,则接种工作就是要求;如果介质出现其他殖民地,则说明在接种过程中无菌操作尚未达到要求,必须分析原因,重新练习。70,(3)是否及时进行了仔细的观察,记录培养12小时及24小时后大肠杆菌菌落大小将有显着差异,记录同学们发现了这一点,可以观察到其他微小的变化。这个阶段的要求主要是培养学生良好的科学态度和习惯。71,12。获得纯培养物的关键是:(a .微生物培养用器械、接种机构及培养基等器械)灭菌b .纯细菌接种c .在适当的环境条件下,D .防止外来杂菌入侵D,72,13 .稀释涂层平板法,说明错误的是()a .细菌的一系列梯度稀释b .和培养D .在适当条件下,每个琼

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