细菌基因缺失株的构建方法PPT课件_第1页
细菌基因缺失株的构建方法PPT课件_第2页
细菌基因缺失株的构建方法PPT课件_第3页
细菌基因缺失株的构建方法PPT课件_第4页
细菌基因缺失株的构建方法PPT课件_第5页
已阅读5页，还剩13页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

学生：王伟导师：李金年教授，细菌基因缺失株构建方法，报告提纲，基本概念，1。基本概念，1。基因的同源重组，也称为基因打靶，是指外源性DNA与受体细胞染色体上的同源序列重组，并在预定位置整合，从而改变细胞某些遗传特征的方法。重组的目的是剔除一个基因。红色重组系统简介红色重组系统简介传统敲除细菌基因的方法是使用重组系统。重组系统是大肠杆菌的内源性同源重组系统，由重组蛋白和重组蛋白组成。这种方法需要目标基因的长同源序列，还需要构建具有目标位点的质粒，因此重组效率低。近年来，墨菲和斯图尔特等人在大肠杆菌中建立的利用噬菌体红色重组系统快速敲除原核基因的方法简化了实验操作，大大缩短了实验周期。这种重组技术是一种可以在染色体水平上进行遗传操作的新技术。只需要一个短的同源序列，不需要特定的限制性酶切位点，从而完成体内重组过程，省去了体外DNA酶切、连接等步骤。质粒pKD46:是同源重组的辅助质粒，含有温度敏感复制子。如果温度高于37，质粒将丢失，在阿拉伯糖诱导后，Gam、Beta和Exo3 噬菌体重组酶可被表达。质粒pKD3:为氯霉素抗性基因的聚合酶链反应扩增提供模板，FRT位点(FLP重组酶识别位点)位于氯霉素抗性基因的两侧，为重组转化子提供筛选标记。质粒pCP20是具有氨苄青霉素(amp)抗性和氯霉素(Cm)抗性的质粒。它含有一个温度敏感复制子，可以表达FLP重组酶。FLP重组酶在42诱导下表达，质粒逐渐丢失。该质粒用于消除FRT位点之间的cat基因。红色重组系统的引入红色重组系统基因敲除是近年来研究比较热门的技术方法，对促进微生物基因功能的研究具有重要作用。与传统的基因敲除方法相比，重组效率明显提高，且该方法使用线性靶向DNA，无需构建靶向质粒，实验周期大大缩短。然而，迄今为止，该系统主要应用于大肠杆菌的基因整合和敲除。其他品系的成功案例很少，具体原因也不清楚。引入重组自杀质粒方法引入重组自杀质粒方法引入重组自杀质粒方法引入重组自杀质粒方法引入重组自杀质粒方法引入重组自杀质粒方法引入重组自杀
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论